КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ
Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Номер проекта 25-14-00125
НазваниеРазработка новой технологии культивирования микроводорослей – продуцентов природного α-токоферола
Руководитель Мальцева Ирина Андреевна, Доктор биологических наук
Организация финансирования, регион Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Мелитопольский государственный университет" , Запорожская область
Конкурс №104 - Конкурс 2025 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами»
Область знания, основной код классификатора 04 - Биология и науки о жизни; 04-206 - Физиология и биохимия растений
Ключевые слова микроводоросли, токоферол, биомасса, продукция, удельная скорость роста, стрессовые условия культивирования, филогения, экология, многомерная статистика
Код ГРНТИ34.27.19
ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ
Аннотация
Одной из научных задач мирового уровня является преодоление продовольственного кризиса. Площади земель, пригодные для выращивания дополнительных объёмов растительной продукции, необходимой также для животноводства, птицеводства, аквакультуры, являются ограниченным ресурсом, что создает проблему и требует поиска новых решений. При этом следует учитывать, что предпочтения потребителей сместились в сторону продуктов, имеющих натуральное происхождения в сравнении с синтезированными химическим путем, а также полученными в результате генетической трансформации. Приоритетным спросом стали пользоваться продукты с потенциальной пользой для здоровья, в том числе, различные добавки с защитными функциями. В число соединений, к которым наблюдается рост внимания потребителей, входит витамин Е. Витамин Е – это группа соединений, наибольшую биодоступность среди которых и, соответственно, ценность имеет α-токоферол природного происхождения, который представлен стереоизомером RRR-α-токоферол. Синтезируется он только фотосинтезирующими организмами. На мировом рынке спрос на данное соединение имеет стойкую тенденцию роста с показателем 14,23% до 2032 года. Также отмечается существенный дисбаланс между спросом на продукцию с природным α-токоферолом и возможностью обеспечить его производство. Причём основная причина этой проблемы, по мнению экспертов, заключается в недостаточности природного сырья и, как следствие, его высоких ценах.
Для решения этой проблемы и удовлетворения растущего спроса на природный α-токоферол необходим его новый природный источник, который дополнял бы объёмы традиционного растительного сырья и не требовал при этом выделения дополнительных площадей земель сельскохозяйственного назначения. Новым источником природного α-токоферола, как свидетельствуют наши предыдущие исследования, а также некоторые научные публикации, может быть биомасса микроводорослей и цианобактерий. Для выращивания микроводорослей и цианобактерий могут быть использованы различные открытые и закрытые биореакторы, размещенные на землях не пригодных для роста основных продовольственных культур.
К сожалению, на данное время способность микроводорослей синтезировать α-токоферол изучена недостаточно. Целенаправленный поиск высокопродуктивных штаммов не осуществлялся, не производился скрининг условий культивирования микроводорослей для максимального выхода α-токоферола. Коллекция высокопроизводительных по α-токоферолу штаммов не создавалась.
Вместе с тем, эти исследования актуальны и будут способствовать запуску новых технологий получения сырья с натуральным витамином Е и удовлетворению спроса на такое сырье в различных производственных сферах, включая пищевую, кормовую, косметическую и фармакологическую; помогут улучшить качество продукции, её соответствие современному уровню осведомленности общества о пользе для здоровья натуральных продуктов.
Предлагаемый проект направлен на решение данной проблемы и предполагает разработку новой технологии получения сырья богатого на природный α-токоферол путём осуществления аргументированного выбора штаммов микроводорослей – продуцентов природного α-токоферола из Chlorophyta и Heterokontophyta и условий их культивирования.
Ожидаемые результаты
1. Будет разработана новая технология получения биомассы с высоким содержанием природного α-токоферола с помощью высокопродуктивных штаммов микроводорослей. Будут представлены рекомендации по условиям культивирования штаммов микроводорослей для получения биомассы с высоким содержанием природного α-токоферола. Данный результат предполагает возможность реализации пилотных проектов по производству биомассы богатой на α-токоферол и включения её в состав кормов для повышения продуктивности агро- и аквахозяйств. Также данный результат является научным заделом для разработки новых полупромышленных технологий получения биомассы микроводорослей с высоким содержанием природного α-токоферола. Достижение результата соответствует мировому уровню. Результат нацелен на решение проблемы удовлетворения растущего спроса на мировом рынке на растительное сырьё с природным α-токоферолом.
2. Впервые будут сформулированы новые научные выводы о наличии закономерностей между содержанием и продуктивностью α-токоферола у видов и штаммов микроводорослей, их филогенетической, экологической принадлежностью, условиями культивирования, разработаны новые теоретические и математические (регрессионные) модели этих зависимостей на основании экспериментальных данных, а также осуществлена их оценка с использованием методов многомерной статистики (кластерного анализа, метода главных компонент и др.).
Достижение заявленных результатов соответствует мировому уровню исследований. На данном этапе накопления научных знаний обсуждение таких закономерностей не осуществлялось, проблема не решена. Предполагаемый результат откроет новые возможности объяснять и предсказывать возникновение определенных фактов и явлений, связанных с синтезом токоферолов, которые до этого невозможно было предвидеть и объяснить. Результат будет способствовать принципиальной смене точки зрения на поиск как источников биомассы с высоким содержанием природного α-токоферола, так и целого ряда других исследовательских задач метаболомики, антиоксидантной устойчивости микроводорослей и др., связанных с функциональной активностью токоферолов.
3. Будут впервые описаны и идентифицированы новые штаммы микроводорослей – продуценты α-токоферола из Chlorophyta и Heterokontophyta: представители родов Parietochloris, Heteroclamydomonas, Bracteococcus, Chlorococcum и Vischeria. Идентификация будет произведена с позиций интегративного подхода, который предполагает использование широкого спектра морфометрических методов световой микроскопии, физиолого-биохимических методов, цитохимических тестов, а также методов молекулярно-генетических исследований. Для всех новых штаммов будет проведена таксономическая идентификация, указана характеристика мест изоляции с указанием типа экосистемы, основных физико-химических характеристиках почвы/воды, в том числе данных о рН среды, минерализации, обеспеченности питательными элементами.
Эти данные представляют новые знания о разнообразии видов микроводорослей из Chlorophyta и Heterokontophyta, открывают пути использования их для новых филогенетических реконструкций, а также новых аут- и демэкологических выводов при оценке экологических взаимоотношений со средой. Достижение результата соответствует мировому уровню исследования, поскольку базируется на актуальном на данном этапе исследований интегративном подходе, и будет представлять совокупность новых знаний в данном направлении исследований.
4. Впервые для новых штаммов будет дана характеристика содержания общего токоферола и его форм, в том числе α-токоферола, как наиболее ценной формы токоферолов для биотехнологического использования, определены биотехнологически значимые параметры: удельная скорость роста, продуктивность биомассы, продуктивность α-токоферола. Будут впервые подобраны условия культивирования штаммов и стрессоры (интенсивность освещения, режим аэрации, источник углерода, лимитирование азота и фосфора в питательной среде) для максимальной продуктивности α-токоферола, разработаны рекомендации по их культивированию с целью дальнейшего запуска биотехнологических производств. Впервые будет создана базы данных для хранения информации о штаммах микроводорослей – источников природного α-токоферола.
Данный результат исследований открывает новые возможности биотехнологического использования микроводорослей, помогает по-новому решать проблему получения биомассы с биотехнологически значимым содержанием природного α-токоферола, которая ранее имела только частичное обсуждение.
Предполагаемый результат соответствует мировому уровню по совокупности новизны предполагаемых знаний, а также будет отправным для дальнейшего развития и формулировки последующих приоритетных исследовательских задач в области биотехнологического скрининга микроводорослей на уровне мировых исследований.
ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Аннотация результатов, полученных в 2025 году
В течении первого года выполнения проекта описаны пути биосинтеза токоферола и его форм, построена модель путей синтеза токоферола с указанием ферментов и генов, задействованных в данном процессе у прокариотических и эукариотических фотосинтезирующих организмов. Проанализирована динамика эволюционных событий, связанных с синтезом токоферола у водорослей в связи с приобретением пластид. Отмечена консервативность путей синтеза токоферола в эволюционном отношении и его схожесть у цианобактерий, водорослей и растений. Вместе с тем, установлено, что детали путей синтеза токоферола у водорослей различных филогенетических групп остаются на текущее время практически не исследованными. Сделан вывод о значительной вариативности содержания α-токоферола у видов, а также штаммов микроводорослей и цианобактерий. Отмечен высокий потенциал представителей Eustigmatophyceae в качестве источников α-токоферола, а также отдельных видов зеленых микроводорослей. Cyanobacteria продемонстрировали невысокие уровни содержания α-токоферола. Описано влияние на содержание α-токоферола изменений условий освещения при культивировании и количества питательных элементов в среде. Связь между способностью водорослей синтезировать α-токоферол и их экологическими характеристиками неоднозначна и нуждается в дальнейшей проверке. Также требуется исследование вариативности содержания токоферолов у штаммов одного вида. В ходе работы получена информация о морфологии новых штаммов микроводорослей, сделаны микрофотографии штаммов, построены филогенетические деревья. В первый год работы изучено 19 штаммов цианобактерий и микроводорослей. Из них – 6 новых штаммов, которые были идентифицированы и впервые описаны на основании интегративного подхода (Nostoc sphaeroides C4, Nostoc calcicola C23 и Nostoc commune C24, Bracteacoccus minor Ch31 и Ch39, Vischeria magna E1). Получены данные о содержании α-токоферола на экспоненциальной и стационарной фазе роста в стандартных условиях культивирования (без использования стрессоров) в биомассе 19 штаммов: Heterochlamydomonas inaequalis (субкультура штамма SAG 4.75), Heterochlamydomonas rugosa (субкультура штамма SAG 45-86), Heterochlamydomonas lobata (субкультура штамма SAG 38-72), Heterochlamydomonas sp. 1 Ch16, Heterochlamydomonas sp. 2 Ch28, Bracteacoccus bullatus Ch11 и Ch32, Bracteacoccus minor Ch31 и Ch39, Coelastrella multistriata Ch23, Pseudomuriella engadinensis Ch33, Coccomyxa elongata Ch64, Parietochloris grandis Ch5, Vischeria magna Е1, Vischeria cf. vischeri Ch18, Nostoc sphaeroides C4, Nostoc calcicola C23, Nostoc commune C24, Desmonostoc caucasicum C154. Среди изученных Cyanobacteria наибольшее количество α-токоферола было у Nostoc commune C24, минимальное – у Desmonostoc caucasicum C154. Продуктивность α-токоферола составила от 1,17 мкг/л×сут. до 1,46 мкг/л×сут. и была наибольшей у Nostoc commune C24. Удельная скорость роста штаммов Cyanobacteria была невысокой и изменялась в диапазоне 0,026-0,041 в сут. Количество биомассы к концу эксперимента у исследованных штаммов было от 0,61 г/л до 1,21 г/л. Наибольшие показатели отмечены для Desmonostoc caucasicum C154. Содержание α-токоферола у штаммов из Chlorophyta и Heterokontophyta (Ochrophyta) было от 8,0±0.25 мкг/г СВ до 773,8±54,62 мкг/г СВ. Удельная скорость роста была в диапазоне 0,12-0,34 в сут. Минимальные значения установлены для Bracteacoccus minor Ch39, Coelastrella multistriata Ch23, наибольшие – для Coccomyxa elongata Ch64, Vischeria magna E1. Логарифмическая фаза роста продолжалась до 12-18 дня культивирования. Накопление биомассы изменялось в широких пределах, продуктивность биомассы лежала в диапазоне 0,115-0,309 г/л×сут. Продуктивность α-токоферола была от 2,44±0,11 мкг/л×сут. до 131,55±12,28 мкг/л×сут. К высокопродуктивным штаммам по количеству α-токоферола отнесены: Heterochamydomonas sp.2 Ch28, Vischeria cf. vischeri Ch18, Vischeria magna E1, Bracteacoccus minor Ch31. Основными позициями концепции технологии получения биомассы микроводорослей с высоким содержанием α-токоферола являются: описание оптимальных условий культивирования, в т.ч. интенсивности освещения, состава питательной среды, режима аэрации, источника углерода, сроков сбора биомассы с учетом особенностей роста штаммов микроводорослей и цианобактерий, продуктивности биомассы и α-токоферола. В ходе работы разработан прототип базы данных для хранения информации о штаммах микроводорослей и цианобактерий – источников природного α-токоферола. База данных имеет табличную форму и содержит данные о таксономической принадлежности штамма; названии коллекции; номере штамма; аутентичности штамма; общей среде обитания; годе изоляции штамма; питательной среде культивирования штамма в коллекции; продолжительности поддержания штамма в условиях коллекционных культур до проведения экспериментов по установлению содержания токоферола; питательной среде и интенсивности освещения в экспериментах по изучению содержания α-токоферола; содержании α-токоферола в экспоненциальной и стационарной фазах роста; продуктивности α-токоферола, источнике данных. База данных также содержит в виде гиперссылки дополнительную информацию о морфологических, молекулярно-филогенетических, экологических особенностях штаммов микроводорослей. За отчетный период в базу данных внесена информация о 19 исследованным штаммам микроводорослей и цианобактериям, а также данные о 133 штаммах, собранные из различных научных источников. Результаты работы первого года выполнения проекта свидетельствуют, что дальнейшие исследования должны быть направлены на оценку содержания α-токоферола у видов и штаммов, демонстрирующих способность к накоплению α-токоферола и обладающих высокими показателями роста. Основное внимание будет уделено видам и штаммам из Eustigmatophyceae и отдельным таксонам зеленых водорослей. Также необходимо уточнение вариативности содержания α-токоферола у штаммов одного вида и поиск факторов стресса, воздействие которых при культивировании приведет к увеличению накопления α-токоферола в биомассе микроводорослей с одновременным сохранением высоких темпов роста.
Публикации
1.
Мальцева И., Яковийчук А., Мальцева С., Куликовский М., Мальцев Е.
Antioxidant status of cyanobacteria strains during long-term cultivation in nitrogen-free media
International Journal of Molecular Sciences, № 22, Т. 26, С. 10891. (год публикации - 2025)
10.3390/ijms262210891
2.
Мальцева И., Кочубей А., Яковийчук А., Мальцева С., Куликовский М., Мальцев Е.
Comparative study of the antioxidant status and biotechnological potential of Bracteacoccus minor (Chlorophyceae) strains
International Journal of Molecular Sciences, №21, Т.26, С. 10740 (год публикации - 2025)
10.3390/ijms262110740