Аннотация результатов, полученных в 2016 году
Заявленный объем исследований в 2016 году был выполнен коллективом исследователей в полном объеме. Рассеянный склероз (РС) - наиболее частое инвалидизирующее неврологическое заболевание у лиц молодого возраста. Клинически РС в большинстве случаев протекает в виде эпизодов неврологической дисфункции(обострений), сменяющихся периодами стабилизации симптомов (ремиссий), что определяют как рецидивирующе-ремиттирующее течение (РРРС). На протяжении более чем десятилетия преобладала точка зрения о ведущей роли Т-лимфоцитов в патогенезе заболевания, что находило подтверждение как в эксперименте, так и в клинических исследованиях. Данные современных исследований отводят В-клеточному звену иммунной системы ключевую роль в патогенезе РС. Рассеянный склероз является аутоиммунным заболеванием с выраженным нейродегенеративным компонентом, проявляющимся уже на ранних стадиях и неуклонно прогрессирующим. Изучение влияния В-клеток на течение РС является одной из наиболее актуальных проблем в области лечения рассеянного склероза. Наше исследование было посвящено определению роли В-клеток в индукции и прогрессии РС и поиску новых факторов патогенности, продуцируемых В-клетками. Также было проведено исследование по выявлению участков персистенции и пролиферации В-клеточных фолликулов внутри мозговых оболочек с помощью МРТ и поиск потенциально нейротоксичных биомаркеров, связанных с В-лимфоцитами. Был проведен углубленный анализ баз данных Городского центра РС (ГЦРС) и биобанка центра по молекулярной медицине (ЦММ) для сбора необходимого объем клинического и биологического материала. Были сопоставлены и идентифицированы архивные биоматериалы и клинические случаи, позволяющие обеспечить достижение целей исследования. Демографическая информация больных была сопоставлена с биобанком образцов в ЦММ и были идентифицированы образцы ЦСЖ и сыворотки крови для дальнейших нейроиммунологических исследований. Для проведения исследований были отобраны биообразцы более 600 пациентов ГЦРС. Все пациенты для выполнения поставленных задач были разделены на несколько групп. Была выделена категория пациентов, у которых образцы сыворотки и ЦСЖ были взяты на стадии клинически изолированного синдрома (КИС) (n=160). Наблюдение пациентов проходило в ГЦРС не менее 2х лет от даты первого обострения. Пациенты, которые в течение 2 лет от начала заболевания конвертировались в достоверный РС, составили группу КИС-РС (n=111), а пациенты без значимой активности заболевания остались на стадии КИС (КИС-КИС, n=49). В этой работе нами были измерены концентрации СЛЦ каппа и лямбда в ликворе (Кл-СЛЦ, Лл-СЛЦ), коэффициенты и индексы СЛЦ обоих типов (Q-k, Q-λ, I-k, I-λ) в группах пациентов с КИС, пациентов с воспалительными (ВЗ, n=20) и невоспалительными (группа сравнения (ГС), n=46) заболеваниями ЦНС. Также было проведено изоэлектрофокусирование в агарозном геле для выявления олигоклональных полос (ОКП) иммуноглобулина G. Для определения диагностических характеристик метода измерений был проведен анализ ROC-кривой. По данным ROC-анализа наилучшими диагностическими характеристиками чувствительности и специфичности обладали Кл-СЛЦ (площадь под кривой (ППК) = 0.9374, отношение правдоподобия (ОП) = 9.718) и Q-каппа (ППК = 0.9441, ОП = 7.929). Концентрации Кл-СЛЦ, Лл-СЛЦ, Q-k и Q-λ были значимо выше в группах КИС-РС и КИС-КИС, чем в группе сравнения. При этом в группе пациентов с быстрой конверсией в РС (КИС-РС) все показатели легких цепей были значимо выше, чем в группе пациентов, не перешедших в РС (КИС-КИС). Количество ОКП-позитивных пациентов в группе КИС-КИС (43%) было значимо меньше, чем в группах КИС-РС (88%, p<0.0001) и группе ВЗ (75%, p=0,0340). Концентрации СЛЦ и их коэффициенты были значимо выше у ОКП-позитивных пациентов. Концентрации СЛЦ в группах КИС-РС и КИС-КИС были оценены отдельно для ОКП-позитивных и ОКП-негативных пациентов. Нами было выявлено значимоеповышение концентраций Кл-СЛЦ, но не Лл-СЛЦ в группе КИС-РС по сравнению с КИС-КИС у ОКП-позитивных пациентов (p=0.02 для Кл-СЛЦ; p=0.1031 для Лл-СЛЦ). При сравнении ОКП-негативных пациентов также было определено значимоеповышение концентраций Кл-СЛЦ и Лл-СЛЦ в группе КИС-РС по сравнению с КИС-КИС (р=0.0016 для Кл-СЛЦ; р=0.0344 для Лл-СЛЦ). Проведено детальное изучения параметров синтеза СЛЦ у ОКП-негативных пациентов. В группе КИС-РС среди ОКП-негативных пациентов повышенная концентрация (>0.103 мкг/мл) Кл-СЛЦ наблюдалась у 50% (n=6/12), что не встречалось ни у одного пациента из группы КИС-КИС. Учитывая наличие повышенного синтеза СЛЦ при отсутствии синтеза ОКП, мы сравнили чувствительность определения ОКП и СЛЦ отдельно и при наличии повышения хотя бы одного из этих показателей методом Хи-квадрат. Чувствительность определения ОКП составила 88% и значимо не отличалась от чувствительности при использовании обоих методов (94%, p=0.0934) (или ОКП-позитивный статус, или повышение СЛЦ). Чувствительность определения Кл-СЛЦ составляла 88% и также значимо не отличалась от показателя при использовании обоих методов (94%, p=0,1001). Наибольшую диагностическую ценность имеют СЛЦ каппа. Кл-СЛЦ и Q-k обладают достаточно высокой чувствительностью и специфичностью для диагностики КИС, использование СЛЦ как лабораторного маркера может повышать точность диагностики РС для ОКП-негативных пациентов, а также дает возможность косвенно оценить риск перехода КИС в ДРС в течении последующих 2 лет. Кроме этого, было отобрано 602 пациента, которые были разделены на 3 группы: первая группа (n=111) - пациенты с клинически изолированным синдромом (стадия дебюта) с переходом в рассеянный склероз в течении первых 2-ух лет, вторая (n = 49) - пациенты с клинически изолированным синдромом без перехода в рассеянный склероз в течении первых 2-ух лет, третья (n = 402) - пациенты с достоверным рассеянным склерозом. Концентрация СЛЦ каппа и лямбда в цереброспинальной жидкости были определены с помощью иммуноферментного анализа. Проводилось сравнение концентраций СЛЦ в ликворе в группах 1 и 2, анализ выживаемости Каплана-Мейера (для группы 1 как время до второго обострения, в группе 3 как время достижения 6 баллов по шкале EDSS), а также корреляция между концентрацией СЛЦ и баллом EDSS через 2 года после дебюта в группе 1 и с показателем MSSS в группе 3. Было обнаружено, что синтез свободных легких цепей значительно выше в первой группе, чем во второй. Концентрации Кл-СЛЦ в группе 1 коррелировала с баллом EDSS через 2 года (r=0.3591, p=0.0006), а в группе 3 с баллом MSSS (r=0.1326, p=0.0347). Показано, что высокая концентрация Кл-СЛЦ не является фактором риска второго обострения в группе 1 (HR=0.8929, p=0.7175), но влияет на достижение балла EDSS 6.0 в группе 3 (HR=2.109, p=0.0316). Таким образом, нами было показано, что Кл-СЛЦ имеют прогностическое значение при краткосрочном и долгосрочном течении рассеянного склероза. Для выделения факторов трансформации клинически изолированного синдрома в РС нами была отобрана группа пациентов с КИС, у которых был проведен проведен анализ концентраций биомаркеров, а также анализ демографических и клинических данных. Была создана таблица для исследуемых пациентов с соответствующими демографическими и клиническими данными. В таблицу были включены данные о концентрации свободных легких цепей каппа и лямбда. Проведенный многопараметрический регрессионный анализ для определения степени влияния каждого биомаркера и клинических показателей на скорость конверсии в достоверный РРРС показал, что наибольший вклад вносят количество обострений за год, возраст пациента и конентрация Кл-СЛЦ. После постановки иммунометрического теста на определения показателей активации В-клеточного ростка, нами были получены предварительные показатели экстинкции, которые требуют дальнейшего анализа. В соответствие с заявленным планом, обсчет и полный анализ полученных данных планируется провести в 2017 году. Одним из дополнительных результатов было составление, валидирование и стандартизирование специализированного протокола магнитно-резонансной томографии. С помощью этого протокола были получены предварительные данные распространенности лептоменингеальных участков постконтрастного усиления МР-сигнала у пациентов с РРРС. На этапе стандартизации в исследованной группе у 20 пациентов были обнаружены лептоменингеальные участки постконтрастного усиления МР-сигнала. Проведение исследований по созданному МРТ протоколу на большей выборке пациентов и анализ полученных данных планируется в 2017 году. Таким образом, весь заявленный объем исследовательских работ на 2016 год был выполнен в полном объеме. Были получены все ожидаемые научные результаты, и опубликовано заявленное количество статьей в реферируемых журналах.

Аннотация результатов, полученных в 2017 году
Рассеянный склероз (РС) представляет собой аутоиммунное прогрессирующее нейродегенеративное заболевание центральной нервной системы (ЦНС). В настоящее время РС является одной из наиболее социально значимых проблем неврологии в связи с высокой распространенностью заболевания, а также его частым развитием у молодого работоспособного населения. Долгое время считалось, что Т-клеточный иммунный ответ является основным звеном патогенеза РС. На сегодняшний день известно, что В-клетки также играют активную роль не только в развитии рецидивов заболевания, но и в прогрессировании РС и нейродегенерации. Лимфоциты В-клеточного звена играют ключевую роль в патогенезе РС, участвуя в гуморальном и клеточном иммунном ответе. Значимая роль В-лимфоцитов в патогенезе РС подтверждается высокой эффективностью анти-В-клеточной терапии при этом заболевании. Повышение В-клеточных маркеров в ЦСЖ также подтверждает значимую роль клеток данного пула в патогенезе РС. Так, для РС характерно повышение локального синтеза иммуноглобулинов в ЦНС (интратекальный гуморальный ответ), изменение клональности интратекального иммунного ответа, увеличение концентрации свободных легких цепей (СЛЦ) иммуноглобулинов, а также феномен полиспецифического интратекального ответа. В ходе выполнения поставленных задач на 2017 год было проведено исследование оценки связи продукции СЛЦ с тяжестью течения РС и выраженностью основных радиологических маркеров активности заболевания. В исследовании участвовало 97 пациентов с диагнозом рецидивирующе-ремиттирующего РС (РРРС). У отобранных пациентов диагностическая люмбальная пункция выполнялась в течение первых 6 месяцев с момента дебюта заболевания. У пациентов была собрана информация за 2 года о количестве обострений, количестве новых очагов на МРТ на Т2 взвешенном изображении (ВИ), общем количестве контрастных очагов на Т1 ВИ (при выполнении МРТ 1 раз в год), рассчитан балл EDSS на момент дебюта заболевания и через 2 года от дебюта. Балл EDSS через 2 года учитывался только в период ремиссии и был стабильным в течение не менее 3х месяцев. У всех пациентов было проведено определение концентрации каппа и лямбда СЛЦ в ЦСЖ (К-СЛЦЦСЖ, Л-СЛЦЦСЖ) и в сыворотке крови (К-СЛЦСЫВ, Л-СЛЦСЫВ). Группа пациентов была разделена на подгруппы с высокой и низкой продукцией СЛЦ. В качестве порога повышения К-СЛЦЦСЖ было определено значение концентрации в 0,595 мкг/мл, а для повышения Л-СЛЦЦСЖ– 0,127 мкг/мл. Нами было обнаружено, что в изучаемой когорте пациентов тяжесть дебюта РС не отличалась у пациентов с высокими и низкими СЛЦ, однако при повышении К-СЛЦ не отмечалось значительного регресса симптоматики, что, вероятно, отражалось на величине балла EDSS через 2 года. Известно, что на степень инвалидизации влияет количество обострений, а также появление новых и контрастных очагов на МРТ. В нашем исследовании не было получено корреляций с этими показателями. Нами также было обнаружено, что высокие концентрации СЛЦ в СМЖ не влияют на риск более быстрого развития второго обострения в течение первых двух лет после КИС. Однако, нами было показано, что концентрация К-СЛЦЦСЖ и значения Q-К статистически значимо коррелируют с баллом EDSS через 2 года. Это может указывать на то, что активность В-лимфоцитов, определенная с помощью концентраций СЛЦ, связана с нейродегенеративным компонентом РС, например, через усугубление восстановления функций мозга после обострения. Также для оценки данных о структурных особенностях свободных легких цепей в 2017 году были получение концентрата свободных легких цепей от пациентов с РС. Кроме этого, за 2017 год была определена связь биомаркеров активации В-лимфоцитов и аксонального повреждения с риском трансформации КИС в достоверный РС в течение первых 2х лет заболевания. Для этого было собрано две группы пациентов: пациенты, конвертировавшиеся за 2 года из КИС в достоверный РС, были объединены в группу КИС-РС (n=40), а пациенты, у которых за 2 года не было получено данных за достоверный РС, составили группу КИС-КИС (n=25). Был проведен сравнительный анализ концентраций показателей СЛЦ, цитокинов и хемокинов, а также маркеров аксонального повреждения в группах КИС-РС и КИС-КИС. Нами не была получена статистически значимая разница между концентрациями цитокинов, хемокинов и маркеров аксонального повреждения у пациентов в группе КИС-КИС и КИС-РС. В исследуемой когорте пациентов концентрации СЛЦ каппа в СМЖ в группе КИС-РС были значимо выше, чем в группе КИС-КИС: 0.5208 (0.5289) мкг/мл, 0.1281 (0.1651), соответственно, р<0.0001. Также выявлено повышение концентраций СЛЦ лямбда в СМЖ в подгруппе с ранней конверсией КИС-РС по сравнению с КИС-КИС: 0.198 (0.3693), 0.056 (0.06), р=0.043. Таким образом, концентрации СЛЦ в СМЖ являются более надежным ранним предиктором конверсии КИС в достоверный РС, чем биомаркеры цитокиного звена, хемокины или маркеры аксонального повреждения. Были получены значимые корреляции между временем до развития второго обострения и концентрацией GM-CSF в сыворотке крови (r = -0.79, р=0.015), а также выявлен тренд для Q-каппа (r=0.672, p=0.0543). Для определения связи лептоменингеального воспаления с клиническими, лабораторными и радиологическими маркерами нейродегенерации и воспаления были отобраны 54 пациента с достоверным рассеянным склерозом, у которых было проведено определение концентрации каппа и лямбда СЛЦ в ЦСЖ, а также изоэлектрофокусирование IgG в ЦСЖ. Для определения лептоменингеальных очагов был создан протокол МРТ. Сразу после введения 0.1 ммоль/кг контрастного вещества (гадобутрол («Гадовист», Bayer AG, Leverkusen, Germany) проводилось исследования с помощью импульсной последовательности T1, а через 12 минут после введения – в импульсной последовательности FLAIR. Последняя импульсная последовательность применялась для определения лептоменингеальных участков пост-контрастного усиления МР-сигнала (ЛУКУМ). Для пациентов с РРРС было более характерно отсутствие ЛУКУМ, однако у пациентов с прогрессирующим вариантом течения встречаемость ЛУКУМ была примерно одинаковой. Для ЛУКУМ-позитивных пациентов было характерно нарастание встречаемости ЛУКУМ при увеличении длительности течения заболевания. Обратная картина наблюдалась в группе ЛУКУМ-негативных. Не было получено аналогичной зависимости от возраста начала заболевания. Медиана (межквартильный размах) балла EDSS в группе ЛУКУМ-позитивных пациентов была значимо выше, чем в группе ЛУКУМ-негативных пациентов. Индекс MSSS (медиана (межквартильный размах) значимо не отличался между группами. Не было получено разницы между группами по количеству обострений в течение 1 года и первых 5 лет течения заболевания. Количество контрастных очагов значимо не отличалось между подгруппами. Встречаемость очагов накопления контрастного вещества была одинаковой между подгруппами (50%). Нами не была получена статистически значимая разница между концентрациями СЛЦ, цитокинов, хемокинов и маркеров аксонального повреждения у пациентов в группе ЛУКУМ-позитивных пациентов и ЛУКУМ-негативных. У ЛУКУМ-негативных пациентов средний объем очагового поражения белого вещества составил 9545 (8103) мм3, а у ЛУКУМ-позитивных пациентов 16723 (12848) мм3 (р=0.0219). Объем очагового поражения серого вещества составил 500 (234) мм3 для ЛУКУМ-негативных и 1200 (312) мм3 для ЛУКУМ-позитивных (р=0.013). Был проведен анализ морфометрии головного мозга. У ЛУКУМ-позитивных пациентов по сравнению с ЛУКУМ-негативными пациентами было выявлено значимое уменьшение объема коры головного мозга (среднее ± SD: 435.8 ± 53.2 vs 452.1 ± 48.9, соответственно, р = 0.043, F = 2.529), увеличение общего объема желудочковой системы (среднее ± SD: 31.7 ± 16.8 vs 23.2 ± 8.9, соответственно, p = 0.039, F = 2.605), а также тренд к значимому уменьшению объема таламуса (среднее ± SD: 12.8 ± 1.7 vs 13.4 ± 1.6, соответственно, p = 0.051, F = 2.428). По всем остальным показателям не было показано значимых отличий между подгруппами. Таким образом, были выполнены все поставленные задачи.

Аннотация результатов, полученных в 2018 году
Изучение влияния В-клеток на течение РС является одной из наиболее актуальных проблем в области рассеянного склероза. В клинических исследованиях продемонстрирована высокая эффективность деплеции В-клеток с помощью моноклональных антител, в том числе при прогрессирующих формах РС. В патоморфологических исследованиях показано, что В-лимфоциты инфильтрируют ткани головного мозга в очагах демиелинизации и в области лептоменингеальных лимфоидных фолликулов, формируя зоны, где поддерживается клональная пролиферация и созревание аутореактивных Т- и В-лимфоцитов. Наличие подобных структур важно с точки зрения определения тактики лечения, так как оно ассоциировано с более ранним и быстрым прогрессированием инвалидизации. Активация В-клеточного звена спровождается повышенной интратекальной продукцией иммуноглобулинов в цереброспинальной жидкости. Лёгкие цепи каппа и лямбда (k-СЛЦ и λ-СЛЦ соответственно) являются структурной частью молекулы иммунолобулинов. СЛЦ могут быть ранним прогностическим маркером для РС. Ранее нами было показано, что пациенты с РС, имевшие большие концентрации k-СЛЦ быстрее достигали необратимой инвалидизации, чем пациенты с низкими концентрациями k-СЛЦ. Эти данные могут отражать возможную взаимосвязь между СЛЦ и нейродегенерацией. Изменение третичной и четвертичной структуры белков могут приводить к приобретению ими токсических свойств. Одним из примеров являются прионные белки, а также цепи иммуноглобулинов при болезни легких и тяжелых цепей. В связи с тем, что в ходе нашей работы мы обнаружили связь между интратекальной концентрацией свободных лёгких цепей у пациентов с РС, уровнем ивалидизации и объемами головного мозга, одним из предположений является возможное прямое участие свободных легких цепей в повреждении нейронов и ингибирования ремиелинизации. Для этого, в ходе исследования была оценена структура свободных легких цепей с использование метода электрофореза. Для оценки структуры свободных легких цепей была проведена очистка СЛЦ каппа и лямбда из пулированных образцов ликвора 10 доноров без неврологических заболеваний (1 группа), из пулированных образцов ликвора 10 пациентов с РРРС. Очистка СЛЦ проводилась с использованием колоночного адсорбционного метода с использованием моноклональных антител к «скрытому» эпитопу. После элюации белков концетрация оценивалась с помощью спектрофотометрии. После проведения электрофореза и визуализации полученных полос каппа и лямбда СЛЦ, было проведено сравнение молекулярной массы полученных продуктов между группой 1 и группой 2. При электрофорезе каппа СЛЦ пациентов с РС наблюдается удвоение бэнда, что может говорить об изменении структуры СЛЦ у пациентов с РС. Полиспецифический интратекальный гуморальный иммунный ответ против нейротропных вирусов (вируса кори (Measles), краснухи (Rubella) и ветряной оспы (varicella-Zoster) впервые был описан в 1992 году Felgenhauer. Интратекальные специфические антитела при РС синтезируются также ко многим другим возбудителям, таким как Herpes simplex virus (25%), Borrelia species (25%), Chlamydia species (30%), Toxoplasma gondii (10%). Особенностью этого иммунного ответа является поликлональная активация зрелых В-лимфоцитов в ЦНС и интратекальный синтез антител к анамнестическим антигенам. Феномен получил название MRZ-реакции (MRZR). Сообщалось, что MRZR является наиболее диагностически значимым маркером РС, специфичность которого, по некоторым данным, составляет более 95%. Следует отметить, что синтез MRZ-антител не связан с интратекальной репликацией самих вирусов, что неоднократно подтверждалось отрицательными данными полимеразной цепной реакции (ПЦР) ЦСЖ пациентов с РС. Иммуноглобулины, продуцируемые против нейротропных вирусов, входят в состав олигоклонального пула IgG (ОП-IgG) в цереброспинальной жидкости и составляют лишь 2% от общего содержания IgG в ЦСЖ. Интратекальный иммунный ответ против нейротропных вирусов является анамнестическим, так как имеется связь между уровнем иммунизации в популяции к конкретному возбудителю и количеством положительных результатов интратекального синтеза антител при РС к данному инфекционному агенту. В настоящем исследовании проведено сравнение диагностической чувствительности и специфичности нескольких лабораторных показателей, отражающих активацию В-клеточного иммунного ответа и применимых к диагностике РС. Показано, что специфичность показателя олигоклонального синтеза иммуноглобулинов (ОП-IgG), который на сегодняшний день включен в диагностические критерии McDonald 2017 года, а также индекс IgG и СЛЦ-Ig каппа и лямбда - не превышают значение 90%, в то время как показатели специфичности теста MRZ-2 и MRZ-3 обладают специфичностью в 92% и 100% соответственно. Важно, что положительная MRZR вовсе не свойственна острым заболеваниям ЦНС и редко наблюдается при хронических воспалительных и невоспалительных заболеваниях ЦНС. Что касается чувствительности метода, по данным различных источников у 90-100% пациентов с РС обнаруживается интратекальный синтез антител против какого-либо одного из трех вирусных агентов (MRZR-1), у 40-80% - против двух (MRZR-2) и лишь у 20-40% пациентов с РС обнаруживается IgG против всех трех вирусов. В нашем исследовании получены следующие данные: антитела против 1 вирусного агента выявлены в 25,7% случаев, антитела к двум вирусным агентам преобладали в группе РС и составили 48,6%, антитела к 3 вирусным агентам отмечены в 22,9% случаев. Нам удалось выявить достоверное увеличение интратекального синтеза антител к вирусу кори и краснухи в группе РС, а также достоверное увеличение интратекального синтеза всех трех групп антител (корь/краснуха/ветряная оспа). Была выявлена корреляция показателей MRZR с уровнем EDSS среди пациентов с РС: самые высокие показатели EDSS были зарегистрированы среди пациентов, имеющих интратекальные антитела против 3х вирусных агентов, а самые низкие показатели EDSS были среди MRZ – негативных пациентов. В то же время, нам не удалось выявить значимых различий между показателями MRZR и количеством обострений за 1 год и 5 лет, количеством контрастных очагов по результатам МРТ головного мозга, возрастом дебюта заболевания, а также длительностью течения РС и количеством дней болезни на момент проведения люмбальной пункции. В группе РС выявлены 3 пациента (8,57%), у которых были отрицательные результаты СЛЦ-IgG каппа/лямбда и ОП-IgG, однако MRZR была положительная. Интересным может оказаться тот факт, что положительная MRZR может выявляться в отсутствие ОП-IgG у 1/3 пациентов с рецидивирующе-ремиттирующим РС и у 2/3 пациентов со вторично- и первично-прогрессирующими формами. Таким образом, MRZR может быть положительна среди OП-IgG - негативных пациентов с разными формами течения РС, что указывает на возможность комплексного использования этих лабораторных тестов, как дополняющих друг друга. СЛЦ-IgG каппа/лямбда, MRZR и олигоклональный синтез иммуноглобулинов представляют собой проявления единого феномена - интратекальный синтез иммуноглобулинов в пределах ЦНС. Однако, ввиду различных показателей чувствительности этих тестов, а также в связи с разнообразием клинических форм РС, диагностическая значимость лабораторных методов исследования на разных этапах формирования болезни может быть неоднозначной. Так, отмечено, что MRZR встречалась статистически значимо чаще у пациентов с КИС, который трансформировался через 2 года в достоверный РС . Сочетание положительных анализов на ОП-IgG и положительная MRZR при наличии 2 и более очагов на МРТ обладали наибольшей диагностической значимостью положительного результата, чем сочетания других показателей. MRZR обладает высокой специфичностью в качестве лабораторного диагностического теста у пациентов с РС. Использование MRZR для диагностики сложных случаев – у пациентов с отрицательными значениями других лабораторных диагностических показателей (СЛЦ Ig каппа/лямбда, ОП-IgG в ЦСЖ) представляется целесообразным для подтверждения диагноза РС. Комплексная оценка интратекального иммунного ответа является перспективной для повышения точности диагностики и оценки тяжести течения РС. Было предпринято исследование по оценке связи концентраций СЛЦ с атрофией головного мозга у пациентов с рассеянным склерозом. В ходе исследования были собраны основные демографические, клинические и анамнестические данные для 92 пациентов с рассеянным склерозом. Всем пациентам выполнялась МРТ головного мозга непосредственно перед забором цереброспинальной жидкости. Дополнительно, подгруппе из 20 пациентов выполнялась МРТ для оценки скорости атрофии головного мозга через 1 год. При морфометрическом исследовании основных структур ЦНС был рассчитан нормализованный объём головного мозга (НОМ), объём серого (ОСВ) и белого вещества (ОБВ). Для достижения целей исследования были измерены ассоциации k-СЛЦ и λ-СЛЦ в ЦСЖ, Q-k и Q-λ с НОМ, ОСВ с ОБВ. Мы выявили статистически значимые корреляции k-СЛЦ в ЦСЖ с НОМ (r=-0.311, p=0.003) и ОСВ (r=- 0.213, p=0.0423), но не с ОБВ (r=0.043, p=0.671). Выявлены корреляции Q-k с НОМ (r=-0.340, p=0.006), но не с ОБВ (r=-0.123, p=0.367) или ОСВ (r=0.014, p=0.897). Для дальнейшего изучения данных корреляций СЛЦ с объёмами головного мозга, исследуемая популяция была подразделена в соответствии с уровнем k-СЛЦЦСЖ, λ-СЛЦЦСЖ, Q-k и Q-λ на субпопуляции 25-го и 75-го перцентиля (25-k-СЛЦЦСЖ/75-k-СЛЦЦСЖ;25-λ-СЛЦЦСЖ/75-λ-СЛЦЦСЖ; 25-Q-k/75-Q-k; 25-Q-λ/75-Q-λ). Затем объёмы головного мозга были сравнены между 25-м и 75-м перцентильными подгруппами Возраст и длительность течения РС не имели статистически значимой разницы между подгруппами (p=0.45 и p=0.76 соответственно). Мы выявили статистически значимые различия в НОМ и ОСВ между подгруппами 25-k-СЛЦЦСЖ и 75-k-СЛЦЦСЖ (p=0.0047, p=0.0297 соответственно), НОМ между подгруппами 25-Q-k и 75-Q-k (p=0.038) и НОМ, ОБВ между подгруппами 25-Q-λ и 75-Q-λ (p= 0.0446, p=0.0026 соответственно). В проспективной группе пациентов с РС мы выявили обратную корреляцию процента изменения объема головного мозга (PBVC) с каппа СЛЦ в ЦСЖ (r=-0.4853, p=0.0301) и Q-k (r= -0.6132, p= 0.0224). Нами было проведено исследование с целью провести сравнительную характеристику профиля субпопуляций В-лимфоцитов и Т-фолликулярных хелперов периферической крови у пациентов с лептоменингеальными очагами постконтрастного усиления МР-сигнала (ЛОКУС) и без них, а также изучить взаимосвязи лимфоцитов периферической крови с биомаркерами интратекального воспаления у ЛОКУС-позитивных и ЛОКУС-отрицательных пациентов. В исследование были включены 52 пациента с РС и 20 здоровых доноров. Лимфоциты в периферической крови определяли с помощью методики проточной цитометрии в соответствии с рекомендациями производителя. Забор крови осуществлялся одновременно с забором ликвора не ранее, чем за 3 месяца до выполнения МРТ. МРТ головного мозга ыполняли в соответствии с определенным ранее протоколом для детекции ЛОКУС. Не было показано значимых различий между ЛОКУС-отрицательными (группа 1) и ЛОКУС-положительными (группа 2) пациентами по абсолютным концентрациям субпопуляций Bm1-Вm5 клеток. Анализ относительных концентраций лимфоцитов продемонстрировал статистически значимое снижение субпопуляций ранних зрелых (eBm5, р= 0,0381), зрелых В-лимфоцитов (Bm5, p= 0,0177), циркулирующих плазмабластов (р=0.005), клеток памяти с переключенным фенотипом (IgDdimCD27high, р=0.0262) в группе ЛОКУС-позитивных пациентов по сравнению с ЛОКУС-негативными. Никаких значимых различий между группами 1 и 2 не было обнаружено среди наивных зрелых и зрелых активных субпопуляций В-клеток памяти. По сравнению с контрольной группой, не было отмечено значимых изменений абсолютных и относительных концентраций в группе 1 и 2. Для оценки взаимосвязи концентраций В-клеток и фолликулярных Т-хелперов был проведен корреляционный анализ их концентраций в зависимости от ЛОКУС-статуса. В группе ЛОКУС-позитивных пациентов выявлены следующие корреляции: наивных Bm1-лимфоцитов с Tfh2 (r = 0.6443, p=0.0009), Tfh17 (r = 0.5267, p=0.0098), Tfh17/Tfh22 (r = 0.6028, p=0.0023), Tfh1 (r = 0.4891, p = 0.0179); зрелых Bm5 лимфоцитов с Tfh2 (r = 0.5296, p=0.0093), Tfh17 (r = 0.4941, p=0.0166), Tfh17/Tfh22 (r = 0.4368, p=0.0.037), Tfh1 (r = 0.5375, p = 0.0081); клеток памяти с непереключенным фенотипом с Tfh2 (r = 0.5573, p = 0.0057), Tfh17/Tfh22 (r = 0.5099, p = 0.0129) и Tfh1 (r = 0.5168, p = 0.0116); клеток памяти с переключенным фенотипом с Tfh2 (r = 0.4457, р = 0.0331), Tfh1 (r = 0.4951, p = 0.0163). Для выполнения целей исследования в цереброспинальной жидкости были измерены фактор, активирующего В-лимфоциты (BAFF) и маркеров межклеточного взаимодействия (CD40L), а также продуктов активации В-лимфоцитов (свободные легкие цепи иммуноглобулинов каппа и лямбда (к-СЛЦЦСЖ, л-СЛЦЦСЖ). Показано наличие значимых корреляций только в группе ЛОКУС-позитивных пациентов. k-СЛЦЦСЖ демонстрировали значимую обратную корреляцию с концентрацией активированных зрелых CD38-CD27 В-клеток (r = -0.5878, p=0.0237) и В-клеток памяти в непереключенным фенотипом (r = -0.7527, p = 0.0018). Концентрации BAFF коррелировали с концентрациями клеток памяти с переключенных фенотипом (r = -0.6434, p = 0.0278). Среди клинических показателей наибольшее значение имели корреляции с количеством очагов накопления контрастного вещества, что было показано в группе ЛОКУС-позитивных пациентов, но не в группе ЛОКУС-негативных. Выявлены значимые прямые корреляции с наивными Bm1 (r = 0.556, p = 0.0166), ранними зрелыми eBm5 (r = 0.5634, p = 0.0149), зрелыми Bm5 (r = 0.6749, p = 0.0021), B-клетками памяти с переключенным (r=0.6353, p=0.0046) и не переключённым фенотипом (r = 0.5362, p = 0.0218), зрелыми активированными В-лимфоцитами (r = 0.4966, p = 0.0361). Отмечены значимые обратные корреляции контрастных очагов в белом веществе на Т1 ВИ с переходными Bm2 (r = -0.5548, p = 0.0169), Bm2-1 (r = -0.6414, p = 0.0041), а также с наивными В-лимфоцитами (r = -0.5743, p = 0.0127), с наивными зрелыми зрелыми В-клетками (r = -0.6353, p = 0.0046). Для определения влияния ЛОКУС на прогрессирование нейродегенеративных изменений производилась оценка процента изменения объема головного мозга через 1 год. В исследование было включено 42 пациента с достоверным рассеянным склерозом. Медиана (межквартильный размах) возраста пациентов составила 46 (23.7) лет. Соотношение мужчин/женщин составило 1:1.6 (26/42 (62%) женщин). Дисперсионный анализ не показал значимого влияния ЛОКУС на скорость атрофии головного мозга через 1 год. Значимыми факторами для модели являлись длительность течения заболевания (F = 4.541, p = 0.0382) и возраст (F = 14.993, p = 0.0003). На такой исход могли появлиять относительно небольшая продолжительность измерения атрофии и относительно небольшой размер исследовательской группы.