Аннотация результатов, полученных в 2017 году
Произведена закупка оборудования и расходных материалов для проведения исследований в рамках гранта. Созданы базы данных с пациентами с сахарным диабетом 1 типа, латентным аутоиммунным сахарным диабетом (LADA), аутоиммунными полигландулярными синдромами (FGC) 1,2,3,4 типов, пациентов с гипотиреозом, гипогликемическим синдромом, пациенток с хронической первичной надпочечниковой недостаточностью (ПНН) и синдромом поликистозных яичников (СПЯ). Разработаны дизайны исследований, протоколы обследования пациентов. Все запланированные исследования прошли экспертизу локального этического комитета. Получены первоначальные результаты по данным проведенных исследований. Блок 1. Сахарный диабет(СД) 1 типа и LADA, сочетание с аутоиммунными маркерами поражения других органов-мишеней. Роль витамина Д в дисрегуляции иммунной системы при аутоиммунных заболеваниях и течении и исходах беременности у женщин с СД 1 типа. • Проведено исследование аутоантител к цитоплазматическим структурам β-клеток (ICA), к глутаматдекарбоксилазе (GADA), к тирозинфосфатазе (IA-2A), к транспортеру цинка Т8 (ZnT8A), к инсулину (IAA) у пациентов с СД 1 типа и LADA. Полученные данные позволили оценить специфичность этих показателей для данных заболеваний. • Проведено определение гликопротеин фосфолипазы D (ГПЛД) у пациентов с впервые выявленным диабетом: СД1, LADA, СД2. Проведено определение антител к париетальным клеткам желудка, антинуклеарных антител, антител к циклическому цитруллинированному пептидупациентам с СД 1 типа. Проведено определение уровня витамина Д беременным пациенткам c СД 1 типа и 10 беременным из группы контроля без СД 1 типа. Проведен анализ предварительных результатов. Блок 2. Аутоиммунные полигландулярные синдромы (АПС). • Разработан дизайн исследования, произведена подборка выборки пациентов с АПС 1 типа, а также пациентов из группы контроля (пациенты с аутоиммунной алопецией, хроническим аутоиммунным тиреоидитом, пациентов с надпочечниковой недостаточностью с доказанной неиммунной этиологией). Доработана и обновлена база данных по АПС 1 типа. • Разработаны протоколы исследования антител к интерферонам-ω и интерферонам-α2 при помощи метода с использованием клеточной культуры HEK-blue IFN-α/β, подобраны среды, методы культивирования данных клеток, закуплены необходимые расходные материалы и оборудование. • Определены группы пациентов, которым необходимо проведение исследования антител к 21-гидроксилазе. • Проведено исследование антител к GAD, ICA, IA-2, ZnT8 у пациентов с АПС 1 типа, показана их связь с наличием у пациентов сахарного диабета, рассчитана специфичность и чувствительность использованных методов детекции данных антител. На основании полученных данных подготовлена статья. • Проведено молекулярно-генетическое обследование пациентов с АПС 2,3,4 типов и пациентов из группы контроля (полиморфизмы генов HLA II класса (System Human Leukocyte Antigen (HLA) Class I), CTLA-4 (cluster of differentiation 152) и PTPN22 (protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 22)). В ходе исследования при проведении молекулярно- генетического обследования пациентов с АПС 2,3,4 типов и пациентов из группы контроля без аутоиммунных заболеваний подтверждена стойкая ассоциация гаплотипов DR3-DQ2, DR4-DQ8, в особенности генотипа DR3/DR4, аллеля DQA1*0301, а также генотипа DQA1*0301/DQA1*0501, с развитием АПС взрослых в целом. При разделении групп на АПС с наличием ПНН (АПС 2 и 4 типов) и АПС без таковой (АПС 3 типа) выявлено наибольшее влияние на развитие ПНН в составе АПС гаплотипа DR3-DQ2 (DRB1*17-DQA1*0501-DQB1*0201), а также генотипа DR3/DR. Полученные результаты позволили определить благоприятные и неблагоприятные прогностические признаки в отношении развития ПНН. • Выполнен скрининг 5 пациенток с первичной ПНН; у всех подтверждено наличие дефицита дегидроэпиандростерона (ДГТ). Ни одна из больных не соответствовала критериям включения по результатам предварительного обследования, терапия не была инициирована. Блок 3. Тиреопатии аутоиммунной этиологии. • Обоснована клиническая значимость циркадианной и индивидуальной вариабельности уровня тиреотропного гормона(ТТГ) при субклиническом гипотиреозе и на фоне заместительной терапии гипотиреоза препаратами левотироксина (L-Т4). Показано, что сужение референсного интервала для уровня ТТГ (0,4 – 2,5 мЕд/л) приведет к необходимости учета суточной вариабельности уровня ТТГ при оценке функции щитовидной железы и значительному росту выявляемости гипотиреоза. • Рекомендовано ограничение времени забора крови для определения уровня ТТГ утренними часами (8:00-9:00) или разработка отдельных нормативов для уровня ТТГ в разные часы. • Обоснована клиническая значимость определения тиреоглобулина (ТГ) в комплексе с определением уровня антител к ТГ. Показано, что высокий уровень антител к ТГ в равной степени отрицательно влияет на точность определения ТГ как стандартным, так и высокочувствительным методом (ФЧ=0,2 нг/мл); отмечена прямая зависимость уменьшения числа достоверных результатов уровня ТГ по мере роста показателя концентрации АТ-ТГ. • Проведена разработка протоколов исследования уровней ТТГ, свободного трийодтиронина (св.Т3), свободного тироксина (св.Т4), тиреоглобулина, антител к тиреопероксидазе, антител к тиреоглобулину для метода иммунохемилюминесцентного анализа (ИХЛА), определения йодурии церий-арсенитным методом. • Разработаны базовые методики для определения общих Т3 и Т4 в сыворотке крови методом ВЭЖХ-МС/МС (высокоэффективная жидкостная хроматография тандемная масс-спектрометрия), которые необходимы в дальнейшем для разработки метода определения свободных форм Т3 и Т4. Подготовлена база для определения ТТГ методом ВЭЖХ-МС/МС. Блок 4. Клинические и иммунологические характеристики аутоиммунных синдромов липодистрофии, разработка и внедрение новых методов диагностики. С учетом критериев включения и исключения начат набор пациентов (включено 10 пациентов с приобретенной парциальной липодистрофией и 10 пациентов с приобретенной генерализованной липодистрофией). Проводится стандартизация метода исследования уровня лептина и адипонектина, С3-комплемента, аутоантител. Блоки 5-10. Предотвращение инфертильности и обеспечение рождения здорового потомства у мужчин и женщин с эндокринопатиями, персонализированная репродуктивная реабилитация лиц с эндокринопатиями и их потомства. • Проведено определение содержание мелатонина в крови женщин репродуктивного возраста с СПЯ и группы контроля с помощью метода хромато-масс-спектрометрии, гормонального анализа крови: ЛГ, ФСГ, тестостерона на 5-7 день менструального цикла, выполнено УЗИ малого таза. • Разработана методика диагностики овуляторной дисфункции на основании результатов однократного лабораторного исследования уровня мелатонина и тестостерона независимо от дня менструального цикла. • Определены клинико-эпидемиологические характеристики нарушений половой и репродуктивной функций у женщин и мужчин с различными эндокринопатиями. • Показано, что свободные радикалы могут снижать качество спермы и подвижность сперматозоидов у пациентов с СД, возможно, в результате воздействия на митохондриальный апоптотический сигнальный путь. • Изучена частота акушерских осложнений СД. • Проведено параллельное секвенирование генов-кандидатов у пациентов с гестационнным сахарным диабетом, проводится анализ полученных данных. Блок 11. Болезнь Грейвса и эндокринная офтальмопатия: поиск общих патогенетических биомаркеров, определяющих дифференцированный подход к выбору метода лечения и прогноз заболевания. • Проведено изучение экспрессии рецептора ТТГ в ретробульбарной клетчатке и экстраокулярных мышцах. Получена более выраженная экспрессия рецептора ТТГ (рТТГ) в ткани ЭОП (эндокринная офтальмопатия) (рис. 1), по сравнению с нормой (контроль) – рис. 2, а также экспрессия рТТГ в ядрах РБК (что требует объяснения). Результаты повторились с использованием разных антител (NC и GT). Избыточная экспрессия рТТГ в тканях орбиты подтверждает его участие в аутоиммунном процессе при ЭОП. • Изучен уровень поверхностных маркеров лимфоцитов: в активную (40 пациентов) и неактивную (26 пациентов) фазу ЭОП. CD 25 (Т-лимфоциты с рецепторами к IL22. CD25 (T-лимфоциты с рецепторами к IL2) и DR+(LTDR) были достоверно выше у пациентов в активной фазе ЭОП p<0,001 и p<0.05, соответственно. CD 3,4,5,8,16,18,19,38,56,95 – различия были недостоверны (таблица 3). • Изучен полиморфизм гена интерлейкина 1В (провоспалительного цитокина) – установлено, что носители генотипа 511 С/Т и аллели Т у гена интерлейкина 1В находятся в группе риска по развитию ЭОП и болезни Грейвса. В рамках работы по гранту за отчетный период проведены 2 школы для молодых ученых: https://rae-org.ru/events/28112017-proydet-shkola-molodyh-uchenyh-po-grantu-rnf-autoimunnye-endokrinopatii-s и https://www.endocrincentr.ru/specialists/news/meropriyatiya/28112017g-proydet-shkola-molodyh-uchenyh-po-grantu-rnf-autoimunnye

Аннотация результатов, полученных в 2018 году
Всемирная организация здравоохранения назвала ХХI столетие веком аутоиммунных заболеваний: каждые 5-10 лет число страдающих ими в мире удваивается. Разрабатываются и внедряются панели молекулярных и клеточных биомаркеров для ранней диагностики, оценки прогноза и эффективности терапии эндокринных аутоиммунных заболеваний. За время работы в рамках гранта диагностировано 17 новых пациентов с аутоиммунным полигляндулярным синдромом (АПС) 1 типа, учитывая крайнюю редкость данного заболевания, данное число пациентов является внушительным. Проведен анализ атипичных и стертых форм АПС 1 типа в российской когорте пациентов, на основании чего расширяются возможности для рождения здоровых детей в ядерных семьях с АП-синдромами при помощи молекулярно-генетических технологий, гормонально-метаболического контроля и предимплантационной диагностики. База пациентов с АП-синдромами 2 и других типов, характеризующихся надпочечниковой недостаточностью, алопецией, витилиго и рядом других аутоиммунных заболеваний пополнилась 57 пациентами и 10 их родственниками первой линии родства. Биобанк пополнен образцами ДНК всех вновь выявленных пациентов и крови пациентов, как впервые, так и повторно обследованных. В итоге за 2018г. биобанк пополнен 98 образцами сыворотки крови пациентов с аутоиммунными эндокринопатиями. Отработан метод определение антител к 21-гидроксилазе иммуноферментным анализом с помощью коммерческого набора фирмы BioVendor (Czech Republic). Чувствительность метода подтверждена исследованием антител в тех же образцах сыворотки пациентов, в которых ранее проводилось исследование антител к 21-гидроксилазе радиоиммунным методом совместно с лабораторией Университета Бергена, Норвегия. Сравнительный анализ показал высокую чувствительность данного метода. Проведено исследование антител к 21-гидроксилазе у 66 пациентов с АПС и пациентов с изолированной первичной надпочечниковой недостаточностью. По результатам исследования антител к 21 гидроксилазе у пациентов в группе пациентов с АПС 1 типа (43 пациента) показаны высокие значения специфичности, чувствительности и прогностической ценности данного метода. Специфичность метода составила 82%, чувствительность – 81%, прогностическая ценность положительного результата – 93% , прогностическая ценность отрицательного результата- 60%. Подобраны и подготовлены образцы сывороток крови пациентов для исследования антител к интерферонам- омега и –альфа2. Кроме того проведены подготовительные эксперименты для проведения исследования клеточной культурой HEK-blue IFNα/γ cells (Invivogen). Суммированы данные по встречаемости аутоиммунного сахарного диабета у пациентов с АПС 1 типа, его частоте и иммунологических характеристиках. Отработан принцип преемственности в наблюдении за пациентами с АП-синдромами «от детского эндокринолога к взрослому», разработаны и внедрены стандартизованные алгоритмы диагностики, лечения и пожизненного наблюдения пациентов с АПС, что позволит продлить жизнь таким больным на 10-20 лет, минимизировать риск развития осложнения от отдельных компонентов синдромов (например, аутоиммунной гипогликемии, хронической надпочечниковой недостаточности и др.). Так у пациентов с аутоиммунными гипогликемиями впервые в России внедрена диагностическая система непрерывного мониторирования гликемии (СНМ). На фоне пробы с длительным голоданием у пациентов с подозрением на гипогликемический синдром (ГГС) данная диагностическая методика уменьшает длительность обследования в среднем на 20,2 ч, трудозатраты среднего медицинского персонала минимум в 2 раза, точность измерения гликемии у СНМ выше при высоких показателях гликемии (колебания в среднем +0,07 ммоль/л), чем при низких показателях гликемии (колебания в среднем +1,11 ммоль/л), стоимость измерения гликемии по СНМ достоверно не отличается от измерения с помощью глюкометра (6000 и 5936 рублей, соответственно). У 19,2% пациентов (n=5) с ГГС, на основании значимого повышения уровня антител к инсулину (АТ-ИРИ – в 80% (n=4)) или к его рецептору (АТ-рИРИ – в 20%), предположено наличие аутоиммунной гипогликемии. У больного с повышенными АТ-ИРИ выявлены аллели, ассоциированные с развитием инсулинового аутоиммунного синдрома (HLA-DRB1*03, DRB1*04). В рамках блока по исследованию аутоиммунных тиреопатий и эндокринной офтальмопатии проведена стандартизация методики определения свободных Т3 и Т4 методом ВЭЖХ-МС/МС, доказавшая большую чувствительность, чем используемые в рутинной практике методы. Результаты представлены в статье «Роль высокоэффективной жидкостной хроматографии – тандемной масс-спектрометрии в оптимизации диагностики и лечения заболеваний щитовидной железы». Вестник российской академии медицинских наук. 2018;73(4):279-284. https://doi.org/10.15690/vramn984). Разработан и внедрен в практику мультидисциплинарный подход к диагностике и лечению эндокринной офтальмопатии, позволяющий избежать потери зрения у 80% пациентов. Результаты изложены в статье International Medical Case Reports Journal «Orbital decompression in the system of treatment for complicated thyroid eye disease: case report and literature review». В рамках блока «предотвращение инфертильности и обеспечение рождения здорового потомства у мужчин и женщин с эндокринопатиями, персонализированная репродуктивная реабилитация лиц с эндокринопатиями и их потомства» выполнено исследование антиоксидантного статуса и изучение возможности коррекции овуляторной дисфункции у пациенток с нормогонадотропным гипогонадизмом. Изучено содержание мелатонина в фолликулярной жидкости с помощью метода хроматомасс-спектрометрии, подтверждено наличие высокой концентрации мелатонина в доминантных фолликулах здоровых яичников, и его сниженный уровень в атретичных фолликулах пациенток с СПЯ. Проведен анализ уровня мелатонина в суточной моче и слюне, выявлено статистически значимое повышение уровня мелатонина в слюне в 3.00 ночи и 6-сульфатоксимелатонина в суточной моче у пациенток с СПЯ независимо от ИМТ по сравнению со здоровыми женщинами. Установлено, что комплексная терапия синтетическим аналогом мелатонина и комбинированными оральными контрацептивами у пациенток с СПЯ повышает эффективность консервативной терапии и позволяет преодолеть кломифен-резистентность в последующих циклах стимуляции овуляции с помощью кломифена цитрата. Статистически значимо у женщин с сахарным диабетом 1 типа и женщин без сахарного диабета различались уровень АМГ, количество антральных фолликулов, HbA1C, в то же время параметры оставались в референсных пределах. Отмечалась выраженная отрицательная зависимость между уровнями HbA1C % и АМГ. Для больных сахарным диабетом 1 типа молодого репродуктивного возраста характерно снижение показателей овариального резерва по сравнению со здоровыми женщинами, в связи с чем необходимо рекомендовать более раннее планирование беременности для сохранения возможности применения вспомогательных репродуктивных технологий при длительных безуспешных попытках естественного зачатия. В рамках выполненной работы разработан и получен патент на изобретение № 2650627 «Способ диагностики ановуляции».

Аннотация результатов, полученных в 2019 году
Доказано, что для аутоиммунных эндокринопатий с полиорганными поражениями характерны иммунологические и генетические особенности, оценка которых может иметь практическое применение для прогнозирования и диагностики заболеваний, а также определения методов их лечения Сконструированы и изготовлены экспериментальные серии биочипов для мультиплексной детекции аутоантител в сыворотке крови (AuAbs-001 и AuAbs-002). Сконструирована и апробирована проявляющая система для проведения иммуноанализа на основе антивидовых антител против классов G и M иммуноглобулинов человека. Проверены неспецифические и перекрестные взаимодействия, все образцы дополнительно проанализированы методами контроля. Определены необходимые иммунореагенты : TPO, TG, TSHR, NIS, GAD, IAA, ICA, IA2, ZnT8, P450scc, 3-βHSD, FSHR, 21OH, P450c17, IFN-omega, IFN-alpha2, NALP5, IL-22. Впервые в России разработан и внедрен в практику метод исследования нейтрализующих антител к интерферонам-α (в частности, к интерферону-ω) с использованием клеточной культуры HEK-blue IFN-α/β cells. Исследование подтвердило высокую специфичность и чувствительной антител к интерферону-омега для диагностики аутоиммунного полигландулярного синдрома 1 типа (100% специфичность, 100% чувствительность). Установлено, что антитела к 21-гидроксилазе являются высокоспецифичными и чувствительными маркерами исключительно аутоиммунной первичной хронической надпочечниковой недостаточности и не выявляются при прочих формах заболевания. Показана высокая прогностическая ценность метода исследования уровня антител к 21-гидроксилаза для диагностики жизнеугожающего заболевания - надпочечниковой недостаточности в группах риска. Метод демонстрирует высокую чувствительность (95%) и специфичность (100%) как у детей, так и у взрослых и позволяет проводить дифференциальную диагностику аутоиммунной надпочечниковой недостаточности и по прошествии длительного периода после ее манифестации. Получены результаты о диагностической значимости определения уровня АТ к Р450с21 в диагностике аутоиммунной надпочечниковой недостаточности: чувствительность 94%, 95% ДИ [85%; 94%], специфичность – 100%, 95% ДИ [85,2%; 100%], прогностическая ценность положительного результата – 100%, 95% ДИ [90%; 100%], прогностическая ценность отрицательного результата – 91%, 95% ДИ [77%; 91%]. Модифицировано мониторирование гликемии в диагностике гипогликемического синдрома, в том числе при аутоиммунных гипогликемиях. Применение системы непрерывного мониторирования глюкозы (СНМ) позволяет уменьшить длительность пробы с голоданием в среднем на 16ч), трудозатраты среднего медицинского персонала - в 3 раза. Затраты при измерении гликемии по СНМ достоверно не отличаются от таковых при рутинном измерении глюкозы. У пациентов с манифестировавшим АПС взрослых отягощенная наследственность по аутоиммунным заболеваниям выявлена в 45,1 % случаев, из них - в 15,6 % случаев родственники пациентов также имели АПС 2,3 типов (p=0.01). При проведении полного экзомного секвенирования ядерной по наличию АПС 2 типа семьи однояйцевых близнецов выявлена компаунд-гетерозиготность в 5’-области гена-кандидата VTCN1, кодирующего белок- ингибитор активации Т-клеток - c.-66 C>T rs61759536 MAF=0.01 и c.-21C>A rs117000061 MAF=0.002. По результатам полного экзомного секвенирования трех ядерных по АПС 2 типа семей проведено исследование генов, отличающихся от референсного генома и встречающихся в популяции с частотой менее 2%. Выявлены полиморфизмы генов, отвечающие за развитие сочетанной аутоиммунной патологии - варианты гена KIR2DL1, встречающиеся во всех трех семьях (генетический риск сочетанного развития СД 1 типа и целиакии модифицирован посредством HLA-C и рецепторов, содержащих иммуноглобулин- подобные домены (KIRs). Показано, что к развитию аутоиммунной патологии в данных семьях причастны полиморфизмы генов TNFRS8, RBCK1, PRKDC. Доказано, что по содержанию регуляторных B лимфоцитов (Breg) пациенты с аутоиммунным полигляндулярным синдромом взрослых (АПС-2) достоверно отличаются от здоровых лиц резко сниженным содержанием Breg в сыворотке крови (составляет 0,62% в сравнении с 5,56% у здоровых). У носителей антител содержание Breg также достоверно снижено в сравнении с контролем. Это может свидетельствовать о нарушении функционирования регуляторных В клеток у пациентов как с клинически проявляющимся аутоиммунными заболеваниями, так и при состоянии, предшествующем развитию болезни и являться ее прогностическим признаком Определено, что при АПС-2 содержание В клеток достоверно выше, чем у здоровых - 14%, что может говорить о недостаточности компенсаторных механизмов иммунитета. Показательно значительное повышение содержания В-клеток у носителей антитиреоидных антител (18,2% при p<0.05), что может служить одним из диагностических критериев на доклинических стадиях болезни. Среди обследованных «условно здоровых» лиц в 48% случаев выявлено бессимптомное носительство антитиреоидных и/или диабетических антител, при этом наиболее часто выявляется носительство антител к тиреопероксидазе (ТПО) и к тирозинфосфатазе (IA 2). Проведен анализ динамики цитокинов и рецепторов к цитокинам (IL-2R, IL-6R, TNF-α RI и TNF-α RII) в крови пациентов с учетом клинических вариантов течения аутоиммунной эндокринной офтальмопатии на фоне стандартизированной терапии глюкокортикоидами. Высокая специфичность, прогностическая ценность и прямая корреляция сывороточного уровня TNF-α (критический уровень ≥ 29 пг/мл по данным ROC-анализа) с тяжестью течения аутоиммунного процесса при ЭО позволяет отнести этот цитокин к предикторам прогрессирования аутоиммунного процесса в тканях орбит, и исследовать его при стратегическом планировании лечения этой когорты пациентов с учётом клинических, гормональных, офтальмологических показателей, данных МСКТ. Сформирована база данных пациентов с СД 1 и LADA, СД2 и группа контроля, включавшее определение аутоантител к цитоплазматическим структурам β-клеток (ICA), к глутаматдекарбоксилазе (GADA), к тирозинфосфатазе (IA-2A), к транспортеру цинка Т8 (ZnT8A), АТ к ТПО, АТ к рецептору ТТГ, АТ к париетальным клеткам желудка, антинуклеарных антител (АНА), антител к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП)). При анализе зависимости овариального резерва от сроков манифестации СД1 установлено, что при манифестации СД1 до пубертата овариальный резерв, оцененный по уровню АМГ, оказался ниже, чем у больных с манифестацией СД1 после пубертата. Для больных СД1 молодого репродуктивного возраста характерно снижение показателей овариального резерва по сравнению со здоровыми женщинами. Указанные изменения наряду с данными о более высокой частоте неблагоприятных исходов беременности у больных СД1 следует учитывать при консультировании больных СД1 гинекологом и эндокринологом.

Аннотация результатов, полученных в 2020 году
• Оптимизация тактики ведения пациентов с СД, LADA, беременных с СД1 – ранняя диагностика сопутствующей аутоиммунной патологии, дефицита витамина Д, и как следствие, cвоевременная модификация и интенсификация терапии, что улучшит прогноз пациентов с аутоиммунными заболеваниями. • Аутоиммунные полигландулярные синдромы. Коррекция андрогенодефицита у женщин. Оптимизирован алгоритм лечения пациенток с надпочечниковой недостаточностью для использования в клинической практике. Препарат дегидроэпиандростерона рекомендован для лечения пациенток с надпочечниковой недостаточностью и с низким качеством жизни. Диагностика надпочечниковой недостаточности. Лабораторная диагностика надпочечниковой недостаточности. Проведение модифицированного инсулинотолерантного теста позволит сократить финансовые затраты при обследовании пациентов с подозрением на надпочечниковую недостаточность. При наличии противопоказаний к проведению данной пробы в качестве исследований второго ряда возможно определение кортизола утренней слюны и/или соотношения кортизол/АКТГ крови утром. Данная информация будет отражена во всероссийских клинических рекомендациях РАЭ по диагностике и лечению пациентов с надпочечниковой недостаточностью. Аутоантитела к 21-гидроксилазе как диагностический маркер первичной аутоиммунной надпочечниковой недостаточности у взрослых пациентов. Представленные данные подтверждают необходимость выполнения анализа крови на АТ к Р450с21 для дифференциальной диагностики причин первичной надпочечниковой недостаточности. Внедрение данного метода в практическое здравоохранение РФ позволит существенно сократить использование визуализирующих методов диагностики АНН, а соответственно лучевую нагрузку на пациента и финансовые затраты на обследование. Молекулярное профилирование сывороточных аутоантител, характерных для аутоиммунных заболеваний эндокринного генеза Разработанный и заявленный для патентования метод мультиплексного иммуноанализа на гидрогелевом биочипе для выявления аутоантител, характеризующих аутоиммунный полигландулярный синдром, является основой для создания тест-системы «АПС-БИОЧИП». Дальнейшая регистрация набора реагентов в Росздравнадзоре как медицинского изделия и его применение в практическом здравоохранении позволит проводить скрининг аутоиммунных эндокринопатий у пациентов из группы риска и выявлять скомпрометированных пациентов за несколько лет до появления симптомов заболевания. Благодаря значительно меньшей стоимости исследования по сравнению с рутинными методами, обследование может быть внедрено и систему диспансеризации населения в целом. Тем самым следует ожидать устойчивого социально-экономического эффекта от применения созданной технологии за счет снижения инвалидизации населения и сокращения бюджетных ассигнований на лечение. Распространенность эндокринной аутоиммунной патологии в когорте взрослых пациентов с витилиго (выполнено в рамках договора о научном сотрудничестве с Московским научно-практическим центром дерматовенерологии и косметологии). Представленные данные определяют необходимость информирования врачей о высокой вероятности ассоциации витилиго с эндокринной аутоиммунной патологией, особенно, с тиреопатиями. Таким пациентам показано ежегодное скрининговое обследование на предмет наличия аутоиммунной эндокринной патологии, особенно заболеваний щитовидной железы. Данная информация будет отражена во всероссийских клинических рекомендациях по диагностике и лечению пациентов с витилиго. Генетические предикторы АПС взрослых с манифестацией в детском возрасте полученные данные показали, что мутация AIRE является не таким редким предиктором АПС взрослых, как представлялось ранее. Все пациентам с АПС взрослых целесообразно проводить секвенирование AIRE после получения положительного иммунологического тестирования на антитела к интерферонам I типа. Принимая во внимание возможное развитие заболевания в гетерозиготном варианте, всем пациентам репродуктивного возраста следует разъяснять возможности предимплантационной диагностики. Данная информация будет отражена во всероссийских клинических рекомендациях по диагностике и лечению пациентов с аутоиммунным эндокринопатиям. Создан научный задел для поиска новых генетических предикторов АПС 2 типа. Так, не исключается, что обнаруженный вариант гена PTPN22 характерен для АПС 2 типа, особенно с агрессивным течением (манифестация заболевания в детском возрасте). Для проверки данного предположения требуется обследование семей с ребенком, больным АПС без мутации в гене AIRE. Кроме того, направлением дальнейших исследований будет подтверждение патогенности впервые описанной мутации c.1613G>A гена AIRE. Также, с учётом впервые описанной комбинации мутаций в гене AIRE (c.821delG и aka c.769C>T) у пациента с атипичным течением АПС 1 типа, необходимо продолжить изучение фенотип-генотипических корреляций при данном заболевании. Требуется накопление клинических данных для последующей стратификации риска развития АПС. Аутоиммунные гипогликемии. Сравнение различных наборов для иммуноанализа в диагностике преднамеренного введения аналогов инсулина своевременная диагностика преднамеренного введения аналогов инсулина позволит предотвратить необоснованное проведение многочисленных визуализирующих исследований для поиска причины гипоинсулинемической гипогликемии, в том числе дорогостоящих и с лучевой нагрузкой, и оказать соответствующую психиатрическую/психологическую помощь. Поиск аллелей генов системы HLA и клинических показателей, ассоциированных со среднетяжелым и тяжелым течением COVID-19 Идентификация индивидуумов с высоким риском тяжелого и среднетяжелого течения COVID-19 имеет крайне важное значение для: 1) разработки стратегий лечения и профилактических мероприятий, 2) определения очередности вакцинации и показаний к ней в сомнительных случаях, 3) подбора специалистов для работы с больными COVID-19. Аутоиммунные гипогликемии. Модификация мониторирования гликемии в диагностике гипогликемического синдрома, в том числе аутоиммунных гипогликемий. СНМ рекомендована как дополнительный метод диагностики, а также контроля эффективности лечения НДГ для использования в системе здравоохранения. Применение СНМ для диагностики и контроля эффективности терапии НДГ позволяет избежать неоднократных инвазивных вмешательств (заборов крови из пальца) и значительно снижает трудозатраты медперсонала при обследовании пациента. Фенотип-генотипические особенности аутоиммунных гипогликемий. Исследование антител к инсулину (АТ-ИРИ) Для болезни Хирата характерна преимущественно постпрандиальная гипогликемия. При генетическом исследовании в 67% случаев определяется аллель DQA1*03:01. Прочие критерии установления диагноза требуют уточнения. Исследование антител к рецептору инсулина (АТ-рИРИ) носительство АТ- рИРИ является не таким редким феноменом, как представлялось ранее и вероятно имеет многофакторную этиологию. Не исключается, что пациенты-носители находятся в латентной фазе тяжелого синдрома инсулинорезистентности типа В, поэтому требуют тщательного наблюдения, а механизм действия и патогенез формирования АТ-рИРИ накопления данных и дальнейшего изучения. Учитывая равнозначное повышение АТ-рИРИ как у больных, так и у здоровых, применять исследование данного показателя в первичной диагностике НДГ не целесообразно. Пролонгированный пероральный глюкозотолерантный тест (пПГТТ) в диагностике аутоиммунных гипогликемий пПГТТ рекомендован как дополнительный метод диагностики аутоиммунной НДГ для использования в системе здравоохранения. пПГТТ позволяет в короткие сроки и в амбулаторном режиме определить степень нарушения углеводного обмена у пациентов-антителоносителей на момент исследования, когда можно выделять активную, неактивную и промежуточную фазы, в зависимости от выявления гипергликемии, гипогликемии, эугликемии и тенденции к гипогликемии соответственно, что может определять характер рекомендаций по питанию и дальнейшему обследованию. Пациенты-антителоносители (АТ-ИРИ/АТ-рИРИ), с отклонениями в ходе теста требуют более тщательного наблюдения и своевременной коррекции нарушений углеводного обмена. Такие больные в группе риска манифестации как аутоиммунных форм гипогликемии (Болезнь Хирата и Синдром инсулинорезистентности тип В), так и сахарного диабета. Определено, что нагрузка глюкозой не является основным методом диагностики аутоиммунных гипогликемий. При отсутствии нарушений в ходе теста, целесообразно проводить контроль гликемии с помощью СНМ гликемии в течение нескольких дней. Аутоиммунные формы гипогликемии встречаются относительно редко, в связи с чем, показано проведение дальнейших исследований и накопление данных для последующего анализа. Формирование групп риска развития манифестных форм АПС у взрослых пациентов (пациенты с одним аутоиммунным заболеванием- болезнью Грейвса; пациенты с латентными формами АПС, родственники пациентов из ядерных семей по наличию АПС взрослых) на основании проводимых молекулярно-генетических и иммунологических исследований позволяет применить персонифицированный подход к обследованию и ведению данных групп пациентов, своевременно выявлять риски развития тяжелых эндокринных заболеваний в рамках АПС взрослых. Доказана целесообразность обследования пациентов с болезнью Грейвса на предмет рисков развития СД 1 типа, пернициозной анемии, целиакии, в особенности в группе риска – среди пациентов с отягощенным наследственным анамнезом по аутоиммунным заболеваниям, а также при наличии предрасполагающих гаплотипов и гетерозиготного генотипа DR3-DQ2/DR4-DQ8 HLA II класса. В клиническую практику внедрен новый метод диагностики аутоиммунного полигландулярного синдрома 1 типа – метод определения антител к интерферону-омега при помощи культуры клеток HEK-blue IFN-α/β cells. Данный метод возможно рекомендовать для скрининга пациентов с полигландулярного синдрома. • Была проведена работа по усовершенствованию методики определения Т4св и Т3св в сыворотке крови методом ВЭЖХ-МС/МС. Был модифицирован хроматографический метод, в результате чего удалось снизить нижний предел количественного определения до 0.1 пг/мл каждого из определяемых компонентов. Также были внесены изменения в методику пробоподготовки, а именно, в стадию ультрафильтрации. На начальных этапах работы в результате продолжительного двухстадийного этапа центрифугирования сыворотки на центрифужных фильтрах (порядка 3 часов) примерно в 5% случаев наблюдалось прохождение белковой составляющей сыворотки, которая переносит в фильтрат существенные количества анализируемых компонентов. Такая ситуация была связана как с разрывом мембран, так и с прохождением тяжёлых белков через мембрану под действием центробежной силы. Нивелировать эти процессы удалось при помощи уменьшения времени центрифугирования с 3 часов до 1 часа, а также снижением центробежной силы с 2000g до 1500 g. В результате объём конечного фильтрата снизился примерно в три раза по сравнению с исходной методикой, однако повышение чувствительности метода позволило полностью его скомпенсировать. Получены коэффициенты корреляции. Определен референсный интервал определения свободных фракций методом ВЭЖХ-МС/МС. Идентификация медиаторов аутоиммунного воспаления у пациентов с эндокринной офтальмопатией. Разработка научно-обоснованных подходов к диагностике, персонифицированному лечению и прогнозированию её исходов. Повсеместное внедрение в практику мультидисциплинарного подхода к диагностике и лечению эндокринной офтальмопатии, позволяющего избежать потери зрения у 80% пациентов, способно сократить экономические потери, связанные с оказанием дорогостоящей медицинской помощи и реабилитации пациентов, потерявших зрение, а также с инвалидизацией и ограничением или потерей трудоспособности таких пациентов. Комплексная оценка изменений тканей орбит при ЭОП при помощи анализа и сопоставления клинических симптомов, томографических признаков, уровней цитокинов и их солюбилизированных рецепторов способно улучшить понимание характера течения ЭОП у конкретного пациента и более точно определять оптимальное время начала пульс-терапии глюкокортикостероидами, увеличивая ее эффективность и улучшая отдаленные исходы. Кроме того, всесторонняя оценка выраженности воспалительного процесса и фиброза в тканях орбит у пациентов с ЭОП позволит точнее прогнозировать течение заболевания и проводить терапию радиоактивным йодом по поводу болезни Грейвса с минимизацией риска ухудшения симптомов ЭОП. Это закономерно приведет к уменьшению частоты и сроков госпитализации в специализированные стационары, снижению затрат материальных и человеческих ресурсов, а также уменьшению сроков временной нетрудоспособности пациентов с ЭОП и частоты их инвалидизации. • На основании изучения клинических данных пациентов с синдромами липодистрофии предложен алгоритм диагностики аутоиммунных синдромов липодистрофии, включающий в себя сбор анамнеза и семейного анамнеза, оценку распределния подкожно-жировой клетчатки, проведение калиперометрии, оценки состава тела методом денситометрии Total body, исследование уровней адипонектина и лептина, проведение молекулярно-генетического исследования. Также разработан алгоритм обследования пациентов с аутоиммунными синдромами липодистрофии, включающий в себя ежегодный скрининг дислипидемии, сахарного диабета, хронической болезни почек, неалкогольной жировой болезни печени и стеатогепатита. Предложенные по результатам исследования методы диагностики способствуют более раннему выявлению таких редких и недостаточно изученных заболеваний, как синдромы липодистрофии, в том числе их аутоиммунных форм, более раннему началу патогенетического лечения и профилактике тяжелых социально значимых осложнений. • В рамках проекта полностью проведена разработка протокола исследования овариального резерва у женщин с СД 1 репродуктивного возраста; женщин положительных по носительству АТА в состоянии эутиреоза репродуктивного возраста, как предиктора повышения показателя репродуктивных потерь; проведен сравнительный анализ патологии плаценты и маточно-плацентарного кровообращения при СД 1, 2 и ГСД; исследован уровень мелатонина у пациенток с синдромом поликистозных яичников (СПЯ) и здоровых женщин в суточной моче, слюне и фолликулярной жидкости.