Аннотация результатов, полученных в 2019 году
Серотонин (5-НТ) - важнейший нейротрансмиттер, обуславливающий широкий спектр функциональных эффектов в центральной нервной системе посредством активации гетерогенно экспрессирующихся рецепторов (Barnes, Sharp, 1999). Среди многочисленных 5-НТ рецепторов (14 типов и подтипов) особое внимание привлекает 5-НТ7 рецептор. Он был открыт позднее большинства 5-НТ рецепторов и до недавнего времени оставался одним из наименее изученных. Однако в последнее десятилетие интерес к 5-НТ7 рецептору резко возрос. Это связано с двумя обстоятельствами: (1) выявленной и нашедшей клиническое применение антидепрессантной активностью антагонистов 5-НТ7 рецепторов; (2) его участием в ауторегуляции функциональной активности 5-НТ системы мозга (Naumenko et al., 2014). Последнее важное свойство связано с взаимодействием 5-НТ7 рецепторов с основным ауторегулятором 5-НТ системы - 5-НТ1А рецепторами. Получены убедительные доказательства того, что 5-НТ рецепторы могут образовывать белок-белковые комплексы, взаимодействуя друг с другом. Было обнаружено, что 5-HT7 рецепторы формируют гетеродимеры с 5-HT1А рецепторами. Функционально, гетеродимеризация ингибирует связывание 5-HT1A рецепторов с Gi-белком, ослабляя обусловленную 5-HT1A рецепторами активацию калиевых каналов, и способствует интернализации 5-HT1A рецепторов, не оказывая влияния на опосредуемую 5-HT7 рецепторами передачу сигнала (Renner et al., 2012). Было предположено, что гетеродимеризация 5-НТ7 и 5-НТ1А рецепторов в области ядер шва среднего мозга, где, главным образом, локализованы пресинаптические 5-НТ1А ауторецепторы, регулирующие секрецию серотонина в синаптическую щель, может существенно влиять на функциональную активность серотониновой системы мозга и на поведение (Naumenko et al., 2014). В связи с вышесказанным целью первого этапа выполнения проекта было выявление эффектов сверхэкспрессии 5-НТ7 рецептора в области ядер шва среднего мозга (raphe nuclei) мышей линии C57Bl/6 на поведение и функциональное состояние серотониновой системы мозга. На основе имеющейся в лаборатории плазмидной ДНК pAAV SynH1-2_HTR7-EGFP, кодирующей серотониновый 5-НТ7 рецептор, а также зеленый флуоресцентный белок, были собраны адено-ассоциированные вирусные частицы. Адено-ассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду pAAV SynH1-2_HTR7-EGFP и соответствующий контроль (адено-ассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду pAAV-Syn(0.5)-EGFP-H1-2 без 5-НТ7 рецептора (AAV-Scr) или чистый буфер) вводили в область ядер шва среднего мозга самцам мышей линии С57BL/6. Через 5 недель после введения конструктов было обнаружено достоверное увеличение подвижности мышей из группы AVV-HTR7 по сравнению с группой, получившей буфер и группой AAV-Scr, в тесте «принудительное плавание». В тесте «подвешивание за хвост», «открытое поле» и «новый объект» мыши экспериментальной группы не отличались от контрольных. Эффективность экспрессии плазмиды pAAV SynH1-2_HTR7-EGFP в среднем мозге мышей была подтверждена при помощи флуоресцентной микроскопии и вестерн-блот анализа с антителами на зеленый флуоресцентный белок. У мышей, которым был введен вирусный конструкт «AAV-Syn(0.5)-HTR7-EGFP-H1-2», было выявлено увеличение уровня мРНК гена 5-HT7 серотонинового рецептора в среднем мозге по сравнению с контрольными животными. Повышение уровня мРНК гена 5-HT7 рецептора наблюдалось также во фронтальной коре. Кроме того, во фронтальной коре мышей экспериментальной группы снизился уровень мРНК 5-HT1A рецептора по сравнению с контрольными мышами. У мышей из группы AAV-HTR7 наблюдалась тенденция к повышению уровня белка 5-HT7 рецептора в среднем мозге. Уровень белка 5-HT1A рецептора не различался между группами. Также, сверхэкспрессия 5-НТ7 рецептора в среднем мозге привела к существенному повышению экспрессии гена, кодирующего транспортер серотонина (5-htt), осуществляющий обратный захват нейротрансмиттера из синаптической щели. Однако повышение экспрессии 5-НТ7 рецепторов в среднем мозге не оказала существенного влияния на экспрессию генов, кодирующих 5-НТ2А рецептор, ключевой фермент деградации серотонина – моноаминоксидазу А, и ключевой фермент биосинтеза серотонина в мозге – триптофангидроксилазу-2. Влияния сверхэкспрессии 5-НТ7 рецептора на уровень серотонина и его основного метаболита 5-ГИУК в коре, гиппокампе и среднем мозге не обнаружено. Таким образом, в данной работе было показано, что многократное искусственное усиление экспрессии 5-НТ7 рецептора в среднем мозге, с помощью рекомбинантного адено-ассоциированного вируса «AAV-Syn(0.5)-HTR7-EGFP-H1-2», приводит к снижению выраженности депрессивно-подобного поведения в тесте «принудительное плавание». Кроме того, введение конструкта, усиливающего экспрессию 5-НТ7 рецептора, приводит к повышению уровня мРНК 5-НТ7 рецептора и снижению уровня мРНК 5-НТ1А рецепторов префронтальной коре. Также сверэкспрессия 5-НТ7 рецептора приводит к существенному повышению экспрессии гена, кодирующего транспортер серотонина. В Институте Клеточной Нейрофизиологии при помощи lux-FRET было изучено влияние гетеродимеризации 5-НТ7 и 5-НТ1А рецепторов на опосредованные 5-НТ7 рецептором внутриклеточные сигнальные каскады. Было обнаружено, что гетеродимеризация 5-НТ1А и 5-НТ7 рецепторов не оказывает существенного влияния на опосредованные 5-HT7 рецепторами внутриклеточные процессы, в то время как опосредованный 5-НТ1А рецепторами внутриклеточный ответ значительно снижается (Prasad et al., 2019). Помимо запланированной работы была исследована роль посттрансляционного пальмитилирования 5-НТ1А рецептора в механизмах депрессии. Пальмитилирование – это присоединение жирной кислоты пальмитата к аминокислотным остаткам в области С-конца белковой цепи рецептора, осуществляемое специфическими ферментами – пальмитилтрансферазами. Было показано, что пальмитилирования 5-НТ1А рецептора необходимо для правильной локализации рецептора на мембране и для его нормального функционирования. Хронический стресс, приводящий к развитию депрессивно-подобного поведения у крыс, вызывает снижение пальмитилирования 5-НТ1А рецепторов. Нокдаун пальмитилтрансферазы DHHC21 во фронтальной коре мышей приводит к развитию у них депрессивно-подобного поведения. Кроме того, показано, что во фронтальной коре людей, страдавших депрессией и покончивших жизнь самоубийством, также наблюдается снижение пальмитилирования 5-НТ1А рецепторов (Gorinski et al., 2019).

Аннотация результатов, полученных в 2020 году
Серотонин (5-НТ) - важнейший нейротрансмиттер, обуславливающий широкий спектр функциональных эффектов в центральной нервной системе посредством активации гетерогенно экспрессирующихся рецепторов (Barnes, Sharp, 1999). Среди многочисленных 5-НТ рецепторов (14 типов и подтипов) особое внимание привлекает 5-НТ7 рецептор. Он был открыт позднее большинства 5-НТ рецепторов и до недавнего времени оставался одним из наименее изученных. Однако в последнее десятилетие интерес к 5-НТ7 рецептору резко возрос. Это связано с двумя обстоятельствами: (1) выявленной и нашедшей клиническое применение антидепрессантной активностью антагонистов 5-НТ7 рецепторов; (2) его участием в ауторегуляции функциональной активности 5-НТ системы мозга (Naumenko et al., 2014). Последнее важное свойство связано с взаимодействием 5-НТ7 рецепторов с основным ауторегулятором 5-НТ системы - 5-НТ1А рецепторами. Получены убедительные доказательства того, что 5-НТ рецепторы могут образовывать белок-белковые комплексы, взаимодействуя друг с другом. Было обнаружено, что 5-HT7 рецепторы формируют гетеродимеры с 5-HT1А рецепторами. Функционально, гетеродимеризация ингибирует связывание 5-HT1A рецепторов с Gi-белком, ослабляя обусловленную 5-HT1A рецепторами активацию калиевых каналов, и способствует интернализации 5-HT1A рецепторов, не оказывая влияния на опосредуемую 5-HT7 рецепторами передачу сигнала (Renner et al., 2012). Было предположено, что гетеродимеризация 5-НТ7 и 5-НТ1А рецепторов в области ядер шва среднего мозга, где, главным образом, локализованы пресинаптические 5-НТ1А ауторецепторы, регулирующие секрецию серотонина в синаптическую щель, может существенно влиять на функциональную активность серотониновой системы мозга и на поведение (Naumenko et al., 2014). Целью второго этапа выполнения проекта было выявление эффектов хронической алкоголизации на депрессивно-подобное поведение и функциональное состояние серотониновой системы мозга. Также было запланировано исследование влияния сверхэкспрессии 5-НТ7 рецептора в области ядер шва среднего мозга (raphe nuclei) мышей линии C57Bl/6J в модели хронической алкоголизации и мышей линии ASC – генетической модели «депрессии» на поведение и серотониновую систему мозга. Мы исследовали влияние хронического (6 недель) потребления 10% алкоголя на основные элементы 5-HT системы мозга мышей линии C57Bl/6: уровни 5-HT, 5-ГИУК, экспрессию триптофангидроксилазы-2 (Tph-2), 5-HT транспортера (5-HTT), 5-HT1A, 5-HT2A и 5-HT7 рецепторов. Прием алкоголя снижал уровень белка и увеличивал активность Tph-2, ключевого фермента биосинтеза серотонина в головном мозге, увеличивал уровень основного метаболита серотонина 5-ГИУК и соотношение 5-ГИУК / 5-НТ, а также уровень мРНК 5-HT7 рецептора в области ядер шва. В коре головного мозга уровень белка рецептора 5-HT2A был снижен, а увеличилось соотношение 5-ГИУК / 5-HT. Таким образом, выявлены вызванные алкоголем изменения в 5-HT системе в области ядер шва, где локализовано большинство клеточных тел 5-HT нейронов, а также в коре головного мозга. Адено-ассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду AAV SynH1-2_HTR7-EGFP и соответствующий контроль (адено-ассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду AAV-Syn(0.5)-EGFP-H1-2 без 5-НТ7 рецептора (AAV-Scr) или чистый буфер) вводили в область ядер шва среднего мозга самцам мышей линии С57BL/6 в модели хронической алкоголизации или самцам мышей линии ASC с генетической предрасположенностью к депрессивно-подобному поведению. Было обнаружено, что сверхэкспрессия 5-НТ7 рецепторов в среднем мозге приводит к снижению вызванной хроническим употреблением алкоголя агрессии. Через шесть недель после введения в средний мозг мышей генетического конструкта “AAV_5-HT7-EGFP” уровень мРНК 5-НТ7 рецептора ожидаемо повысился в группе «5-НТ7_Этанол». Во фронтальной коре и гиппокампе достоверных изменений обнаружено не было. При этом уровень экспрессии белка 5-НТ7 рецепторов достоверно не изменился (F3,20<1, это связано с низкой специфичностью антител, доступных сегодня на рынке, было опробовано несколько вариантов разных производителей), хотя наблюдается экспрессия eGFP весом 79 кДа, что соответствует комплексу eGFP+5-НТ7 и свидетельствует о наличии сверхэкспрессии 5-НТ7 рецепторов на мембране нейронов. Для 5-НТ1А рецепторов было обнаружено достоверное повышение в группе «Буфер_Этанол» по сравнению с остальными группами, такой же эффект был обнаружен и для 5-НТ транспортера. Однако в целом, сверхэкспрессия 5-НТ7 рецепторов в среднем мозге мышей, подвергавшихся хроническому потреблению алкоголя, не оказала значительного влияния как на вызванные этанолом изменения паттернов экспрессии ключевых элементов серотониновой системы мозга, так и на уровни 5-НТ и его метаболита 5-ГИУК в исследованных структурах мозга. Через 5 недель после введения генетического конструкта в средний мозг мышам линии ASC с генетической предрасположенностью к депрессивно-подобному поведению был обнаружен антидепрессивный эффект, отражающийся в достоверном увеличении подвижности мышей в тесте Порсолта из опытной группы AAV_HTR7 по сравнению с контрольными группами. При этом было обнаружено, что сверхэкспрессия гена 5-НТ7 рецептора в среднем мозге не повлияла на двигательную активность в тесте открытого поля. В среднем мозге мышей, которым был введен вирусный конструкт «AAV_Syn_HTR7-EGFP», было найдено достоверное повышение уровня мРНК гена 5-НТ7 рецептора. Кроме того, было выявлено снижение мРНК гена Htr7 в гиппокампе. При этом сверхэкспрессия 5-НТ7 не оказала значительного влияния на экспрессию ключевых генов серотониновой системы мозга. Однако сверхэкспрессия гена 5-НТ7 серотонинового рецептора привела к повышению уровня 5-ГИУК в префронтальной коре и в гиппокампе исследуемых животных. Сверхэкспрессия гена 5-НТ7 серотонинового рецептора достоверно повысила индекс метаболизма серотонина у опытной группы в коре, гиппокампе и среднем мозге. Полученные данные по увеличению индекса метаболизма серотонина в коре, гиппокампе и среднем мозге у животных опытной группы подтверждают влияние сверхэкспрессии гена 5-НТ7 рецептора в среднем мозге на серотониновую систему и согласуются с данными по снижению депрессивно-подобного поведения в тесте «принудительное плавание» у мышей ASC, получивших векторный конструкт с целевым геном. Сверхэкспрессия гена 5-НТ7 серотонинового рецептора также не оказала значительного влияния на уровни белков ключевых элементов серотониновой системы мозга. В результате показан эффект сверхэкспрессии гена Htr7 на депрессивно-подобное поведение на модели генетической депрессии – мышах линии ASC, что в очередной раз подтверждает гипотезу о роли гетеродимеризации 5-НТ1А и 5-НТ7 рецепторов в механизмах депрессии. При депрессии увеличивается количество гомодимеров 5-НТ1А / 5-НТ1А, высвобождение серотонина в синаптическую щель снижается, а искусственно увеличенное количество 5–HT7 рецепторов повышает количество 5-HT7/5-HT1A гетеродимеров, приводя к даунрегуляции пресинаптических 5-НТ1А рецепторы и, как следствие, снижение их ингибирующего влияния на секрецию серотонина. В Институте Клеточной Нейрофизиологии при помощи lux-FRET было изучено влияние гетеродимеризации 5-НТ7 и 5-НТ1А рецепторов на опосредованные 5-НТ7 рецептором внутриклеточные сигнальные каскады. Было обнаружено, что гетеродимеризация 5-НТ1А и 5-НТ7 рецепторов не оказывает существенного влияния на опосредованные 5-HT7 рецепторами внутриклеточные процессы.

Аннотация результатов, полученных в 2021 году
Серотонин (5-НТ) - важнейший нейротрансмиттер, обуславливающий широкий спектр функциональных эффектов в центральной нервной системе посредством активации гетерогенно экспрессирующихся рецепторов (Barnes, Sharp, 1999). Среди многочисленных 5-НТ рецепторов (14 типов и подтипов) особое внимание привлекает 5-НТ7 рецептор. Он был открыт позднее большинства 5-НТ рецепторов и до недавнего времени оставался одним из наименее изученных. Однако в последнее десятилетие интерес к 5-НТ7 рецептору резко возрос. Это связано с двумя обстоятельствами: (1) выявленной и нашедшей клиническое применение антидепрессантной активностью антагонистов 5-НТ7 рецепторов; (2) его участием в ауторегуляции функциональной активности 5-НТ системы мозга (Naumenko et al., 2014). Последнее важное свойство связано с взаимодействием 5-НТ7 рецепторов с основным ауторегулятором 5-НТ системы - 5-НТ1А рецепторами. Получены убедительные доказательства того, что 5-НТ рецепторы могут образовывать белок-белковые комплексы, взаимодействуя друг с другом. Было обнаружено, что 5-HT7 рецепторы формируют гетеродимеры с 5-HT1А рецепторами. Функционально, гетеродимеризация ингибирует связывание 5-HT1A рецепторов с Gi-белком, ослабляя обусловленную 5-HT1A рецепторами активацию калиевых каналов, и способствует интернализации 5-HT1A рецепторов, не оказывая влияния на опосредуемую 5-HT7 рецепторами передачу сигнала (Renner et al., 2012). Было предположено, что гетеродимеризация 5-НТ7 и 5-НТ1А рецепторов в области ядер шва среднего мозга, где, главным образом, локализованы пресинаптические 5-НТ1А ауторецепторы, регулирующие секрецию серотонина в синаптическую щель, может существенно влиять на функциональную активность серотониновой системы мозга и на поведение (Naumenko et al., 2014). Целью третьего этапа выполнения проекта было выявление эффектов содержания животных в условиях сокращенного светового дня на поведение и функциональное состояние серотониновой системы мозга. Также было запланировано исследование влияния сверхэкспрессии 5-НТ7 рецептора в области ядер шва среднего мозга (raphe nuclei) мышей линии C57Bl/6J в модели сезонного аффективного расстройства, вызванного содержанием в условиях сокращенного светового дня. В Лаборатории профессора Понимаскина было запланировано исследование гетеродимеризации 5-HT1A и 5-HT7 рецепторов in vivo у мышей с депрессивным поведением (в модели депрессивно-подобного поведения, вызванного хроническим непредсказуемым стрессом). В предварительных экспериментах на первичной культуре гиппокампальных нейронов мыши была верифицирована работа вирусного конструкта AAV_Syn_HTR7-EGFP, обеспечивающего экспрессию 5-НТ7 рецептора. Также в предварительных экспериментах при помощи флуоресцентной микроскопии были верифицированы координаты места введения конструкта. Также было проведено иммуногистохимическое исследование, включающее окрашивание серотониновых нейронов антителами против триптофангидроксилазы-2 (TPH2) для подтверждения экспрессии плазмид в серотониновых нейронах ядра дорсального шва вместе со всеми нейронами в месте инъекции. Было исследовано влияние содержания мышей в условиях сокращенного светового периода (4 часа свет/20 темнота) на различные виды поведения и на экспрессию ключевых элементов серотониновой системы мозга. Содержание мышей при коротком световом дне привело к снижению пройденного пути в тесте «открытое поле» и к повышению времени неподвижности (параметр, регистрируемый вручную) в тесте «принудительное плавание» по сравнению с контрольными животными, в то время как подвижность животных (отражение скорости изменения силуэта, автоматически регистрируемый параметр) не изменилась. При этом различий во времени, проведенном в центре арены в тесте «открытое поле» не обнаружено. В тесте «темная-светлая камера» у мышей опытной группы снизился уровень тревожности, отражаемый параметром доли времени, проведенного в светлом отсеке. Не было обнаружено эффектов короткого светового дня на процент предпочтения нового объекта. Было обнаружено, что короткий световой день достоверно снижает уровень мРНК 5-НТ1А рецептора в среднем мозге, но не в других исследованных структурах. Уровень мРНК гена 5-НТ7 рецептора на фоне сокращенного светового дня изменился только в гипоталамусе у опытной группы, а в остальных исследованных структурах мозга остался без изменений. Не было обнаружено влияния короткого светового дня на экспрессию 5-НТ2А рецептора. Также сокращенная продолжительность светового дня не оказала влияния на уровень белка 5-НТ1А рецептора и 5-НТ7 рецептора в среднем мозге мышей. Никаких достоверных различий не было найдено в уровнях мРНК TPH2 и 5-НТТ и белка в среднем мозге. Короткий световой день достоверно снизил уровень серотонина в гипоталамусе, повысил уровень 5-ГИУК и их соотношение 5-ГИУК/5-НТ. В префронтальной коре уровень серотонина также снизился, соотношение 5-ГИУК/5-НТ достоверно повысилось. В гиппокампе на фоне короткого светового дня уровень 5-ГИУК повысился, а уровень серотонина также снизился, а соотношение 5-ГИУК/5-НТ повысилось. В то же время короткий световой день не оказал влияния на обмен серотонина и его основного метаболита 5-ГИУК в среднем мозге. Для исследования влияния сверхэкспрессии 5-НТ7 рецепторов в области ядер шва среднего мозга в модели сезонного аффективного расстройства, вызванного содержанием в условиях сокращенного светового дня, аденоассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду AAV SynH1-2_HTR7-EGFP, и соответствующий контроль (аденоассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду AAV-Syn(0.5)-EGFP-H1-2 без 5-НТ7 рецептора, или чистый буфер) вводили в область ядер шва среднего мозга (координаты AP-3; L-2; DV+4мм; angle 38 deg; rotation 40 deg) (Slotnick and Leonard 1975) самцам мышей линии C57Bl/6J. В течение четырех недель мыши содержались в условиях сокращенного светового периода (4 часа свет/20 темнота). Поведенческое тестирование было начато через четыре недели после введения генетического конструкта, после чего животные декапитировались, и в структурах мозга (кора, гиппокамп и область ядер шва среднего мозга) анализировались уровень мРНК и белков ключевых рецепторов серотониновой системы мозга (5-НТ7, 5-НТ1А и 5-НТ2А рецепторов). В среднем мозге также изучалось состояние ключевого фермента биосинтеза серотонина – триптофангидроксилазы – 2 (Tph2), серотонинового транспортера (5-Htt), осуществляющего захват серотонина из синаптической щели. Содержание 5-НТ и его основного метаболита 5-гидроксииндолуксусной кислоты (5-ГИУК) в структурах мозга исследуемых животных было исследовано методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Введение AAV_Syn_HTR7-EGFP в область ядер шва среднего мозга на фоне короткого светового дня привело к снижению времени неподвижности группы 5-HT7-EGFP в тесте «принудительное плавание» по сравнению с контрольными животными, в то время как подвижность животных не изменилась. При этом различий в пройденном пути и доле времени, проведенного в центре арены в тесте «открытое поле» не обнаружено. Введение AAV_Syn_HTR7-EGFP в область ядер шва среднего мозга на фоне короткого светового дня не оказало влияния на уровень тревожности в тесте «темная-светлая камера»: процент времени, проведенного в светлом отсеке, у мышей опытной группы достоверно не отличался от контрольной группы. Также не различалась процент предпочтения нового объекта по отношению к старому в тесте «новый объект». У мышей из опытной группы уровень мРНК 5-НТ7 рецептора был значительно повышен в среднем мозге, в отличие от гиппокампа, префронтальной коры и гипоталамуса, где эффектов на экспрессию гена 5-НТ7 рецептора (Htr7) обнаружено не было. Вирусный конструкт вызвал сверхэкспрессию 5-НТ7 рецептора почти в 100 раз по сравнению с контролем. Уровень мРНК 5-НТ1А рецептора не изменился ни в одной из исследованных структур. Также не изменилась экспрессия 5-НТ2А рецептора. Введение AAV_Syn_HTR7-EGFP в область ядер шва среднего мозга на фоне короткого светового дня вызвало достоверное снижение уровня белка 5-НТ1А рецептора у опытной группы. Экзогенный (привнесенный нами) белок 5-НТ7 рецептора был обнаружен в среднем мозге благодаря антителам против EGFP, которые детектируют EGFP метку на химерном белке 5-НТ7-EGFP с массой 79 кДа. Обнаружить сам рецептор на этом молекулярном весе с помощью широкого диапазона антител против 5-НТ7 не удалось. Это связано с низкой специфичностью доступных в настоящее время антител к 5-НТ7 рецептору: Демирева Е. Ю. с коллегами (Demireva, 2019) протестировали 10 коммерчески доступных антител к 5-НТ7 рецептору, чтобы подтвердить отсутствие этого рецептора у созданных ими крыс с нокаутом 5-НТ7(-/-) и ни одно из антител не выявило потерю сигнала в тканях по 5-НТ7 рецептору. Никаких достоверных различий не было найдено в уровнях мРНК TPH2 и 5-НТТ и их белкового продукта среднем мозге. Сверхэкспрессия 5-НТ7 рецептора в области ядер шва среднего мозга на фоне короткого светового дня достоверно повысила уровень 5-НТ в среднем мозге, однако без изменений остались уровень 5-ГИУК и их соотношение 5-ГИУК/5-НТ. В гипоталамусе у опытной группы 5-НТ7-EGFP достоверно повысился коэффициент метаболизма серотонина 5-ГИУК/5-НТ, однако сложно сказать за счет какого компонента, поскольку уровни 5-НТ и 5-ГИУК не изменились. В префронтальной коре уровни 5-НТ, 5-ГИУК и 5-ГИУК/5-НТ остались без изменения, как и в гиппокампе. В лаборатории профессора Понимаскина также была выполнена вся запланированная работа. В 2021 году была исследована гетеродимеризация 5-HT1A и 5-HT7 рецепторов in vivo у мышей с депрессивным поведением. Принимая во внимание функциональную роль гетеродимеризации между 5-HT1A и 5-HT7 рецепторами, полученной в экспериментах in vitro, мы исследовали, может ли уровень гетеродимеризации изменяться при депрессии. С этой целью мы объединили процедуру хронического непредсказуемого стресса (Chronic Unpredictable Stress, CUS) у мышей C57Bl/6J с последующим применением Proximity Ligation Assay. Эффективность протокола CUS была подтверждена путем мониторинга массы тела, предпочтения сахарозы и теста «принудительное плавание». Животных с ангедонией отбирали на основании более низкого потребления сахарозы по сравнению с контрольными животными и животными, устойчивыми к стрессу. Ангедонический фенотип, который оценивали с помощью теста предпочтения сахарозы, дополнительно проверяли путем выполнения теста «принудительное плавание». В соответствии с результатами, полученными в тесте предпочтения сахарозы, неподвижность ангедонических мышей в тесте «принудительное плавание» была увеличена по сравнению с животными, не подвергавшимися стрессу. Примечательно, что потребление сахарозы и поведение в тесте «принудительное плавание» устойчивых к стрессу мышей были аналогичны контрольным животным, не подвергавшимся стрессу, но изменения в их массе тела соответствовали группе, подверженной стрессу. Поскольку префронтальная кора участвует в патогенезе депрессии, мы проанализировали гетеродимеризацию 5-HT1A и 5-HT7 рецепторов в префронтальной коре после применения протокола CUS. Количественная оценка PLA-положительных пятен на клетку показывает, что количество гетеродимеров 5-HT1A / 5-HT7 значительно снизилось у чувствительных к стрессу животных по сравнению с контролем и стрессоустойчивых групп, тогда как между контрольными и устойчивыми животными не наблюдалось значительных различий. Кроме того, мы наблюдали, что гетеродимеризация 5-HT1A и 5-HT7 рецепторов была снижена в области зубчатой извилины гиппокампа чувствительных к стрессу мышей C57Bl/6J по сравнению с устойчивыми к стрессу животными. Примечательно, что плотность гетерокомплексов 5-HT1A / 5-HT7 в базальных условиях в гиппокампе была примерно в 25 раз ниже по сравнению с префронтальной корой. Чтобы проверить уровень образования гетерокомплексов 5-HT1A / 5-HT7 в среднем мозге, мы сосредоточили внимание на области дорсального ядра шва. Учитывая, что тела серотонинергических клеток расположены в ядрах шва, было проведено дополнительное окрашивание на серотонинэргические нейроны. Не было значительных изменений в гетеродимеризации 5-HT1A / 5-HT7 рецепторов как после нормализации количества пятен 5-HT1A / 5-HT7 к общему количеству клеток в поле зрения, так и к серотонинергическим нейронам между различными группами.