Аннотация результатов, полученных в 2022 году
Расширение прогностического потенциала в ветеринарной пропедевтике генерализации бактериозов возможно на основе объективной оценки клинико-функциональных резервов организма при использовании оптимальной модели катионных белков гранулоцитов (КБ). Определение их функциональной активности позволяет критериально раскрывать динамическое развитие патогенеза гнойно-септических осложнений. Зрелые нейтрофилы периферической крови не способны к синтезу и накоплению КБ и, в ходе выполнения своих функций, только расходуют запасы данных биоцидных и регуляторных протеинов. В этой связи отработка методов оценки гранулоцитов по катионным белкам (КБ) представляет прогностическое значение, так как позволит оптимизировать и совершенствовать диагностику состояния и развития генерализованных осложнений. На сегодняшний день одним из ключевых вопросов остается установление методологий, позволяющих улучшить точность, воспроизводимость и/или клиническую ценность диагноза сепсиса. Попытка совместить факторы патогенности инфекционного агента и несостоятельность защитных механизмов макроорганизма нашла отражение в концепции PIRO. Отработка модели PIRO как комплексной оценки септических осложнений имеет перспективы прогностической ценности и направленности в тактике лечения. Целесообразность данной техники определяется фундаментальной обоснованностью. Проведенными исследованиями впервые разработан вариант клинической модели PIRO для стратификации животных (собак и кошек) с сепсисом. Применённая методология обеспечила разработку формулы iPIRO и критериев SIRS и MODS на достаточной референсной группе, что позволило определить перспективный алгоритм в прогностике септических осложнений. Установлено, что при показателях iPIRO выше 0,6 в 100 % случаев отмечалось увеличение палочкоядерных нейтрофилов, в 42,9 % дополнительно наблюдалось увеличение моноцитов, а в 28,6 % - тромбоцитов. В тяжелых случаях (iPIRO выше 0,7) возможно увеличение юных нейтрофилов. У животных (собак и кошек) с индексом iPIRO ниже 0,4 - дегенеративных отклонений у нейтрофилов не отмечалось, наблюдалось только общее увеличение лейкоцитов и процентное увеличение сегментоядерных нейтрофилов, в лейкограмме незначительно снижался процент лимфоцитов. У половины животных с iPIRO от 0,5 до 0,6 отмечали либо снижение общего числа лейкоцитов, либо увеличение процента палочкоядерных нейтрофилов при общем повышении количества лейкоцитов. Балльная оценка статуса животных позволяла выявлять генерализацию бактериозов с гнойно-септическими осложнениями на ранних стадиях развития. При оценке по показателям индекса отклонения от гомеостаза, iPIRO равный 0,25-1,1 балла свидетельствует о благоприятном прогнозе, отмечалась легкая степень заболевания; iPIRO=1,2-2,2 баллов - сомнительный прогноз, средняя или тяжелая степень сепсиса; iPIRO = 2,25 и более баллов - неблагоприятный прогноз, критическая степень болезни, переходящая в септический шок с последующей гибелью животного. При формировании вторичных гнойных очагов при патологии матки и яичников в группе с критической степенью тяжести общего состояния больного животного индекс показателя О (органная дисфункция) варьировал от 1 до 1,333, тяжелой и средней тяжести от 0,667 до 1, и легкой степенью - 0,333 соответственно. Клиническая манифестация синдрома полиорганной недостаточности (MODS) включала: снижение температуры тела, сердечной сократимости, сердечного выброса и кислородной доставки, вазоплегию, депрессию средней или сильной выраженности, эрозии и геморрагии в желудочно-кишечном тракте, почечную недостаточность с анурией/олигурией, повышение сосудистой проницаемости вследствие гипопротеинемии и гиповолемии, диффузный, инфильтративный отек легких и гипоксемию. Анемия, гипопротеинемия, коагулопатии, лактацидоз и гипогликемия являлись частыми симптомами MODS. Установлено, что при сбалансированном течении синдром компенсаторного противоспалительного ответа (CARS) подавлял системную воспалительную реакцию и приводил к восстановлению гомеостаза (период восстановления гомеостаза). При выраженности или продленном течении CARS наблюдалось развитие иммунодепрессии, клинически проявляющейся хронизацией или диссеминацией инфекции, нарушением процесса репарации, утяжелением эндотоксикоза и формированием поздней полиорганной недостаточности (период развития сепсиса). Тяжелый сепсис в единичных случаях переходил в септический шок. Разработанный нами перевод клинико-лабораторных данных в шкалу показателей PIRO и SAPS при обследовании животных с травмами мягких тканей, заболеваниями репродуктивных органов, при токсоплазмозе и панлейкопении кошек позволил усовершенствовать постановку быстрого прогноза возможных осложнений SIRS и развития сепсиса. В результате проведенных исследований разработана модель для принятия оперативных решений, основанная на прогностике возможных осложнений у животных, включающих оценку клинической манифестации SIRS, MODS и противоспалительного ответа CARS. Отработку оптимальных методов исследования катионных белков гранулоцитов (КБ) проводили с оценкой адаптивности, реализуемости, информативности и эффективности каждого из отмеченных в заявке методов. Оценена эффективность и адаптивность различных методик исследования функциональной активности КБ гранулоцитов. Определены два оптимальных метода оценки КБ в ветеринарной пропедевтике: определение катионных белков по Пигаревскому в модификации Нестеровой И.В. и определение активности миелопероксидазы нейтрофильных гранулоцитов. Используя, установленные в результативности адаптированные методики были проведены следующие исследования по оценке системного потенциала на моделях аутэкологических форм (собаки в условиях питомника) и прогностической ценности определения активности КБ гранулоцитов для высокопродуктивных коров при послеродовых эндометритах. Так, у бездомных собак в условиях питомника по сравнению с домашними, поступившими в питомник, наблюдалось достоверно повышенное содержание катионных белков нейтрофилов, что указывает на адаптационные потенциалы организма. В группе больных коров прослеживалась тенденция к повышению вязкости, гипохромии и нейтрофилии, но достоверной разницы в показателях выявлено не было. В биохимическом профиле отмечено достоверное уменьшение альбуминово-глобулинового соотношения в группе животных, больных острым эндометритом. Других изменений не выявлено, что позволяет полагать о высокорезервных потенциалах внутренних систем жизнедеятельности у крупного рогатого скота и определяет тесты на катионных белках гранулоцитов, как перспективные. В ходе проведенного нами анализа изменений содержания катионных белков в нейтрофилах установлено, что в крови группы коров, больных острым эндометритом, происходит достоверное увеличение количества нейтрофилов со средним и высоким уровнем содержания КБ по показателю среднего цитохимического коэффициента (СЦК) на 16,3 % относительно СЦК в группе здоровых животных. Так, в группе больных животных М = 2,14 ± 0,24, в группе здоровых животных М = 1,84 ± 0,31. Определение уровня активности катионных белков нейтрофилов в качестве маркера системной активации нейтрофилов в практике подтверждения патогенетической роли иммунозависимых процессов в ответ на неблагоприятные воздействия и при прогностике генерализации бактериозов в ветеринарной пропедевтике проявило свои методологические достоинства. Отмеченное отсутствие маркерной динамики в клинико-гематологических показателях при гнойно-септических послеродовых осложнениях у коров делают тесты на катионные белки особенно прогностически ценными. По результатам исследований подготовлены методические рекомендации на тему «Методы определения активности катионных белков гранулоцитов», опубликовано 11 статей, из которых 3 - в ведущих российских научных журналах ветеринарного профиля, а также подготовлены и приняты к публикации материалы 3 научных статей в издания, индексируемые в международных базах цитирования (Scopus).

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
Прогностика на основе катионных белков при гнойно-септической патологии (флегмоны) у ценных племенных продуктивных четко подтвердила перспективность ветеринарно-технологического применения, базирующегося на результатах фундаментальных и модельных исследований с коррелятивной контролируемостью методами оценки прогноза по специальным шкалам CARS, SIRS, SAPS и PIRO при ряде патологий у собак и кошек. Расширение прогностического потенциала в ветеринарной пропедевтике генерализации бактериозов базируется на объективной оценке иммунофункциональных резервов организма с использованием оптимальной модели катионных белков гранулоцитов (КБ). Определение их функциональной активности позволит критериально раскрывать динамическое развитие патогенеза гнойно-септических осложнений. Развивая концепцию применения исследований КБ НГ в области прогностических исследований ветеринарной пропедевтики в отчетный период были апробированы на модельных животных (собаки, кошки) прогностические шкалы (формулы) при ряде инфекционных, хирургических и акушерско-гинекологических заболеваний, основанные на стратифицированных методиках PIRO и SAPS с учётом показателей SIRS, MODS и CARS в их коррелятивной зависимости с значениями среднего цитохимического коэффициентв (СЦК) и среднего цитохимического индекса (СЦИ), отработанными на основе апробированных и адаптированных для ветеринарии методов оценки активности катионных белков гранулоцитов по Пигаревскому в модификации Нестеровой И.В. и определения активности миелопероксидазы НГ по Sato, Методы оценки КБ в референсной выборке на животных-компаньонах и высокоценных племенных продуктивных животных (крупный рогатый скот) проявили свою валидность и позволили сформулировать прогностические критерии при гнойно-септических патологиях генерализации бактериозов, которые определяют в ветеринарной пропедевтике терапевтическую тактику и технологические решения. Полученные материалы по гематологическим и биохимическим исследованиям показали, отсутствие строгой закономерности и прогностической цельности при пиометре у собак. Исследование гематологических и биохимических изменений у больных собак не выявило ярких маркерных тенденций, в то же время, разница между здоровыми и больными животными, в среднем по СЦК, была высоко достоверной. Показатели, использованные по каждой особи из группы больных (n=30) и группы здоровых (n=30) использованы для оценки CARS, SIRS, SAPS и PIRO, полученные результаты были сравнены с анамнезом и действительным исходом заболевания, сопоставляемые шкалы проанализированы методами обратной корреляции и парной линейной регрессии, что дало возможность сделать вывод о прогностической достоверности значений СЦК / СЦИ в пропедевтике ряда заболеваний у собак, осложняемых гнойно-инфекционным патогенезом. Исследования на модели кошек - в рандомизированной группе больных животных панлейкопенией и аналоговой контрольной группе здоровых животных, позволило установить высоко достоверную разницу значений СЦК и их коррелятивную связь с развитием генерализации осложнений и исходом заболевания. В диагностических системах PIRO и SAPS с учётом показателей SIRS, MODS и CARS были подтверждены прогностические протоколы, коэффициент детерминации по SAPS с СЦК r2 равен 0.738 при средней ошибке аппроксимации (65.4 %) характеризует адекватность регрессионной модели. Примененные исследования на больших выборках в группах аналогов высокопродуктивных племенных коров на модели гнойно-хирургической патологии (флегмоны) позволили установить прогностическое значение показателя СЦК в комбинации со значениями SAPS. У коров с флегмонами концентрация катионных белков в нейтрофилах оказалась достоверно ниже, чем у здоровых, что в классической гнойно-септической нозологии позволяет характеризовать выраженное исчерпание бактерицидных резервов кислороднезависимых систем нейтрофилов и неблагоприятное течение процесса. На основании полученных данных проведен коррелятивный анализ значений SAPS и СЦК между группами больных и здоровых животных, где коэффициент корреляции (r) равен -0,633, что говорит об обратной связи между исследуемыми показателями и определяет тесноту связи по шкале Чеддока, как заметную. Интеграция данных СЦК с системой оценки тяжести состояния животного (SAPS) подчеркивает важность комплексного подхода к прогнозированию осложнений. Подход к использованию СЦК и SAPS в качестве части комплексной оценки риска осложнений при флегмоне у коров представляет собой важный шаг в направлении улучшения ветеринарной диагностики и прогностической медицины. В прототипных исследованиях у молодняка крс по модельной схеме отмечена тенденция к повышению лейкоцитов, а, именно, сегментоядерных нейтрофилов, что указывает на активный фагоцитарный процесс. В биохимическом профиле отмечено достоверное снижение общего белка и альбуминов, других достоверных изменений не выявлено, что определяет нецелесообразным разработку шкалы PIRO для прогностики генерализации бактериозов на фоне кишечных вирозов у молодняка КРС (см. таблицы 15 и 16 приложения 1.6.). Цитохимические исследования на содержание КБ в НГ в контрольной группе и группе больных телят показало отсутствие достоверной разницы (таблица 17). Полученные результаты не позволяют применить iPIRO с прогностической целью в данных клинических и технологических целях. Мы считаем, что ротавирусная диарея у телят в случае неблагоприятного течения провоцирует токсические осложнения, организм неонатального молодяка крс не реализует септической патогенетики, что и отображают прототипные данные по КБ. Подана и находится на экспертизе по существу заявка на изобретение № 2023106681 от 22.03.2023 «СПОСОБ ПРОГНОСТИКИ ГЕНЕРАЛИЗАЦИИ ПОСЛЕРОДОВЫХ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У КОРОВ». Разработаны, прошли экспертизу и опубликованы методические рекомендации "Методы определения активности катионных белков гранулоцитов". Подготовлена и опубликована монография, обобщающая полученные данные и систематизирующая фундаментальные сведения в иммуногенезе и иммунореактивности нейтрофильных гранулоцитов в реакциях катионных белков: Пименов Н.В., Лаптев С.В., Марзанова С.Н., Брылина В.Е., Пермякова К.Ю. "Катионные белки гранулоцитов в прогностике гнойно-септических патологий в ветеринарной пропедевтике генерализации бактериозов" (объемом 11 п.л.). Раскрыты механизмы реакции нейтрофильных гранулоцитов на гнойно-септический процесс и развития иммунотропных изменений, связанных с потенциалом цитохимических взаимодействий иммунокомпетентных клеток, а также сформированы референсные значения iPIRO и СЦК, которые могут быть использованы в ветеринарной пропедевтике. Приведены исследования в области патогенетики сепсива в ветеринарной пропедевтике, адаптированы современные диагностические шкалы на основе собственных исследований, предложены формулы прогностической оценки в ключевых категориях современной концепции сепсиса и раскрыта роль катионных белков нейтрофильных гранулоцитов как маркерной системы прогностической оценки генерализации бактериозов в клинической ветеринарии мелких домашних животных и продуктивном скотоводстве. Опубликованы 3 научных статьи в изданиях, индексируемых Scopus, 2 - в изданиях, индексируемых RSCI, ещё 5 публикаций, индексируемых в РИНЦ. Результаты апробированы на международных и национальных конференциях.