Наконец, оценить, что именно происходит с мембраной нейрона при нагреве, с какой скоростью происходит деполяризация мембраны, как генерируется потенциал действия, можно исключительно методами классической нейрофизиологии, помещая в клетку электрод и прописывая токи через мембрану при активации TRPA1. Эти эксперименты позволили установить, что с помощью импульсного излучения мы можем генерировать потенциалы действия с частотой до 50 Гц. Это свидетельствует о том, что рецепторы, которые мы используем, не уступают по своим временным характеристикам каналородопсинам, используемым в оптогенетике. Эта часть работы была выполнена в сотрудничестве с группой Евгения Никитина из Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.
— А какие эксперименты вы ставили с реальными организмами?
— Значительная часть экспериментов по характеризации каналов TRPA1 змей в клетках млекопитающих и по квантовой термометрии была выполнена на культуре нейронов мыши. Но хороший метод должен работать и на уровне живого организма.
В мальке рыбы данио есть так называемые соматосенсорные нейроны, ответственные за чувствительность к прикосновениям. Их активация приводит к реакции избегания: рыба пытается уплыть, делая быстрый взмах хвостом. Мы получили мальков, которые несут в соматосенсорных нейронах ген TRPA1 гремучей змеи. В таких мальках получалось активировать реакцию избегания, не прибегая к механическому воздействию, но активируя нейроны инфракрасным лазером с диаметром светового пучка 60 мкм. Контрольные рыбы, не несущие ген TRPA1, были нечувствительны к воздействию ИК-излучения.
— Можно пару слов про финансирование работы?
— В данном проекте исключительно важен именно его междисциплинарный характер. Исследование не носило бы завершенный характер, если бы в нем не приняли участие коллективы с разной, взаимодополняющей экспертизой. Необходимо также особо отметить роль Российского научного фонда, поддержка которого по гранту 14-14-0747 составила основу финансирования проекта, а также Российского фонда фундаментальных исследований, поддержавшего работы по квантовой термометрии.
— Какие дальнейшие планы и перспективы у этой темы?
— Ведутся работы по смене ионной селективности TRPA1, чтобы каналы лучше пропускали одновалентные катионы натрия и калия и хуже — двухвалентный кальций. Это повысит избирательность стимуляции. Если же удастся заставить канал проводить анионы хлора, то с помощью этих каналов можно будет подавлять активность нейронов.
В настоящее время мы также работаем над термогенетической активацией сердечной мышцы, встраивая змеиные TRPA1 в кардиомиоциты. Кроме того, данные каналы позволят управлять динамикой ионов кальция в самых разных типах клеток. Все это, во-первых, создаст обширную методическую базу для применения термогенетики в нейробиологии и других фундаментальных областях науки, а во-вторых, создаст задел для новых терапевтических подходов. Инструменты оптогенетики уже используются в ряде клинических испытаний для восстановления функций утраченных нейронов. Преимущество термогенетики в том, что она применима не только для управления нейронами, но и для стимуляции кальций-зависимых процессов в других типах клеток.