КАРТОЧКА ПРОЕКТА,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ


Номер 14-16-00046

НазваниеРазработка фундаментальных основ комплексной технологии мониторинга биологически-активных соединений в кормах, биологических жидкостях животных и молочной продукции.

РуководительЗайцев Сергей Юрьевич, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регионфедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени К.И. Скрябина", г Москва

Годы выполнения при поддержке РНФ 2014 - 2016 

КонкурсКонкурс 2014 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами»

Область знания, основной код классификатора 06 - Сельскохозяйственные науки, 06-204 - Животноводство

Ключевые словаСкотоводство, продуктивные животные, зоотехния, ветеринария, корма, мониторинг, диагностика, биохимические показатели, кровь, молоко, поверхностное натяжение.

Код ГРНТИ68.39.01


СтатусУспешно завершен


 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ


Аннотация
Проект направлен на разработку фундаментальных основ комплексной зооветеринарной технологии для сельского хозяйства. Ключевыми элементами перспективной технологии будут служить методы контроля биологически-активных соединений (БАС) в кормах, биологических жидкостях животных и молочной продукции, разрабатываемых в рамках фундаментальных моделей и инновационных зооветеринарных подходов. В проекте особое внимание будет уделено фундаментальным вопросам создания систем, моделирующих биологические жидкости животных. Это важно для выявления роли отдельных БАС и поверхностно-активных веществ (ПАВ) в комплексе физиолого-биохимических и физико-химических свойств природных систем; влиянию типа кормления на рост и развитие, на обменные процессы в организме животных (в разные периоды онтогенеза животных); разработке комплексных диагностических подходов и методов исследования биологических жидкостей животных (крови, молока и других); для мониторинга физиолого-биохимического статуса (ФБС) животных и контроля качества полученной продукции. Корреляционные данные о взаимосвязи молочной продуктивности и ФБС; прогнозирование заболеваемости коров лейкозом на основании уровня молочной продуктивности и состояния обмена веществ; разработка новых систем диагностики и мониторинга заболеваний на ранних стадиях будут основополагающими достижениями. Внедрение этой технологии (систем, подходов и методов) положительно скажется на результатах хозяйственной деятельности животноводческих организаций. Важной составляющей интенсивного развития животноводства является нормированное кормление животных и производство полнорационных комбикормов (сбалансированных по уровню и соотношению питательных веществ в рационе, т.е. белков, жиров, углеводов и других БАС). Не только корма новых составов, но разные партии одного и того же корма различаются по питательности и соответственно по их калорийности. В производственных условиях энергетическую ценность всего ассортимента кормов определяют по табличным данным или расчётным методом. Поэтому задача разработки методики быстрого количественного мониторинга качества полученных кормов по составу БАС представляется научно и практически важной для повышения эффективности животноводства. Актуальность и важность работы обусловлена взаимосвязью фундаментальных и прикладных аспектов предлагаемого современного направления. В такой взаимосвязи следует выделить биохимические и биомедицинские аспекты проблемы изучения организмов животных на уровне биологических систем и молекулярных механизмов их функционирования, разработка новых методик для ранней диагностики нарушений физиолого-биохимических процессов в организме и внедрение указанных методик в зоотехническую и ветеринарную практику. Примером служит стремительный рост числа исследований в мире, направленных на создание структурно-функциональных моделей биохимических систем; изучение свойств модельных и природных систем биологических жидкостей; идентификацию биомаркеров, способных служить индикаторами начальных этапов метаболического стресса и, как следствие, ранних этапов развития заболевания животных. Предполагается провести междисциплинарное исследование «на стыке» сельскохозяйственных и естественных наук, физиологии и зоотехнии, биологии и ветеринарии, которое позволит впервые создать комплексную структурно-функциональную модель биологических жидкостей и заложить фундаментальные основы комплексной зооветеринарной технологии для рационального природопользования в сельском хозяйстве.

Ожидаемые результаты
По результатам работы за 3 года в рамках данного проекта планируется опубликовать 10 статьей, из них 5 статей в изданиях, индексируемых в базе данных «Web of Science» или «Scopus», 1 монография, 1 «ноу-хау» и 1 патент на изобретение. Материалы работы также предполагается использовать в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий для аспирантов и студентов ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. Предполагается создать базу данных на основе результатов собственных исследований, полученных за последнее десятилетие (авторским коллективом опубликовано более 40 научных работ, в том числе 16 в изданиях, индексируемых в базе данных «Web of Science» и «Scopus», получено более 10 «ноу-хау» и патентов на изобретения) с включением новых экспериментальных данных изменения об изменении динамического поверхностного натяжения (ДПН) биологических жидкостей и физиолого-биохимических параметров обмена веществ у разных видов животных (прежде всего для таких важных сельскохозяйственных животных как крупный рогатый скот) в постнатальном онтогенезе. Результаты мирового уровня ожидаются по следующим направлениям: а) выявлению особенностей изменения параметров динамического поверхностного натяжения крови и молока у указанных животных в онтогенезе; б) установлению взаимосвязи параметров ДПН с показателями разных типов обменов веществ и продуктивностью животных; в) определению корреляционных зависимостей между количеством БАС и параметрами ДПН как интегральной характеристикой свойств сыворотки крови и молока у животных и оценка их диагностической значимости. В результате проведённых исследований, будут получены новые данные о взаимосвязи физиолого-биохимического статуса и молочной продуктивности (прежде всего, биохимические показатели крови, характеризующие белковый, углеводный, жировой и минеральный обмен - всего более 20 показателей), а также содержание в крови потенциальных биомаркеров метаболического стресса (ненасыщенных жирных кислот, бета-оксимасляной кислоты, лептина, глюкозы и других) у высокопродуктивных молочных коров в период повышенной энергетической нагрузки на организм, обусловленной ростом и развитием плода, и лактацией. Будут установлены корреляционные взаимосвязи потенциальных биомаркеров с заболеваемостью коров (лейкозом), что будет выполняться на базе «центров коллективного пользования» ГНУ ВИЖ (совместно с их сотрудниками, включенными в проект). Разработка программно-аналитического комплекса для экспресс-оценки энергетической и питательной ценности кормов (по большому числу БАС) для важных сельскохозяйственных животных с применением комбинации физико-химических методов, включающих термоанализ, инфракрасную спектроскопию и другие будет выполняться на базе «центра коллективного пользования» РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева и ИБХ РАН (совместно с их сотрудниками). Такое многоплановое исследование будет содержать новые данные как для углубления теоретических представлений о взаимосвязи содержания конкретных БАВ и свойств сыворотки крови, кормов, молока, так и для решения прикладных проблем (выявления отклонений в состоянии организма животных на ранних стадиях патогенеза или при стрессовых нагрузках, что важно для своевременной диагностики заболеваний). Предполагается, что установленные закономерности изменения различных физиолого-биохимических параметров у указанных сельскохозяйственных животных в постнатальном онтогенезе могут служить стандартами сравнения для определения нормального состояния и использоваться в практике зоотехнии, биомедицины и ветеринарии. Полученные в 2014-2016 гг. результаты позволят выйти на мировой уровень науки и практики в области мониторинга особенностей роста и развития организма сельскохозяйственных животных и происходящих в нем изменениях в разные фазы постнатального онтогенеза. Установленные корреляционные взаимосвязи серии указанных показателей с физиолого-биохимическим статусом и заболеваемостью коров (прежде всего – лейкозом) будут безусловно важными как для эффективного развития экономики, так и для решения ряда проблем в социальной сфере по снабжению населения высококачественной молочной продукцией.


 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ


Аннотация результатов, полученных в 2014 году
Раздел 1. За отчётный период разработана высокопроизводительная методика измерения динамического поверхностного натяжения (ДПН) и проведена её оптимизация для биологических жидкостей животных (в частности сыворотки крови и молока крупного рогатого скота). Модифицирован анализ полученных результатов измерения данных со специальной математической обработкой. Проведены систематические измерения ДПН сыворотки крови и молока крупного рогатого скота с использованием современного и высокочувствительного прибора ВРА-1Р (ФРГ). Определены поверхностно-активные свойства их компонентов в постнатальном онтогенезе по динамическому поверхностному натяжению. Для коров черно-пёстрой породы в возрасте 3-6 лет минимальные значения ДПН сыворотки крови (51,37-52,32 мН/м) получены для равновесного значения ДПН, а максимальные (70,69-71,63 мН/м) – для коротких времен – 0,02 с. Углы наклона тензиограмм составляли 8,19-9,31 мН•м-1с-1/2 и 5,49-6,47 мН•м-1с1/2 соответственно. У коров в возрасте от 2,5 до 5 лет наблюдалось плавное снижение значений ДПН при увеличении времени существования поверхности, лишь для животных в возрасте 1 года и 6 лет наблюдались особенности. Показатель λ1 зависит от возраста животных: от 1 года до 2,5 лет уменьшается на 56, 6%, от 2,5 до 4 лет изменяется в пределах ошибки и в среднем составляют 5,0±0,4 мН/м, для возраста 5 лет значения λ1 возрастают на 22%, а затем в возрасте 6 лет снижаются – на 40,9%. ДПН молока определяли для трех серий проб, разделенных по степени жирности (% жира < 2,5; % жира 2,5–4; % жира 4–6). Достоверные отличия в показателях ДПН обнаружены между первой и второй группой. Так, при снижении жирности молока все показатели ДПН тоже снизились: σ0 – на 3,6 % (p<0,01), σ1 – на 5,7 % (p<0,001), σ2 – на 3,4 % (p<0,05 ), σ3 – на 1 %; углы наклона: λ0 – на 3,7 % и λ1 – на 22 % (p<0,05). Раздел 2. Разработаны модельные липид-белковые, белок-солевые и липид-белок-солевые системы (на основе сывороточных белков, фосфолипидов и триглицеридов различных солей). Получены фундаментальные данные по трёхкомпонентным модельным биохимическим системам (т.е. липид-белок-солевым смесям) в концентрациях, приближенных к таковым в биологических жидкостях животных, что позволяет оценить вклад отдельных химических веществ (белки, липиды, соли) в суммарную поверхностную активность образца. Выявлена взаимосвязь между данными ДПН модельных систем и биологических жидкостей животных. Раздел 3. Изучены биохимические и клинические показатели крови высокопродуктивных молочных коров (n=107) в различные физиологические периоды (до отела, период раздоя и пик лактации). Выявлены достоверные различия в концентрации ряда метаболитов азотистого, углеводного и липидного обмена. Выполнен предварительный выбор показателей для оценки состояния метаболического стресса у высокопродуктивных коров, обусловленного лактацией. Установлены связи статуса коров по вирусу лейкоза (носители и не носители) с рядом биохимических и клинических показателей крови животных. Полученные данные будут использованы для разработки системы биомаркеров оценки состояния и коррекции обмена веществ, повышения устойчивости к заболеваниям у высокопродуктивных молочных коров. Раздел 4. Методом ближней инфракрасной спектроскопии (БИК) исследован химический состав льняной костры, которая является крупнотоннажным отходом льноперерабатывающей промышленности. Льняная костра получена после переработки льна-долгунца сорта ТОСТ 5 и Антей. Показано, что применение биорегуляторов Биопаг-Д и ЗСК на льне-долгунце повышает урожайность льносоломы на 9-12%, льнотресты – на 1,5-8%, волокна на фоне ЗСК – на 6-7%, увеличивается выход льняной костры более 2 ц/га по сравнению с контролем. С использованием БИК-спектроскопии установлено, что химический состав льняной костры удовлетворяет требованиям по качеству кормов. Содержание сырого протеина в зависимости от обработки биорегуляторами в льняной костре составляет 1,7-5,1%, сырого жира – 1,0-4,2%, сырой золы – 1,7-4,0%, сырой клетчатки – 51-65% при оптимальных концентрациях кальция 0,67-1,02% и фосфора – 0,15-0,27%. Обменная энергия льняной костры в расчете на воздушно-сухое вещество составляет в среднем 3-7 МДж/кг, что соответствует средним значениям данного показателя для соломы зерновых культур. Содержание кормовых единиц в 1 кг сухого вещества льняной костры 0,11-0,23 кг. Максимальное значение кормовых единиц наблюдается для костры сорта Антей при обработке Биопагом, а минимальное – для сорта ТОСТ 5, обработанного ЗСК. Данные по химическому составу и энергетической ценности льняной костры подтверждают возможность ее использования в качестве кормовой добавки для сельскохозяйственных животных.

 

Публикации

1. Белопухов С.Л., Дмитревская И.И., Калабашкина Е.В., Зайцев С.Ю. Применение БИК-анализа для исследования химического состава и энергетической плотности льняной костры Бутлеровские сообщения, Том 38, № 5, стр. 112-117 (год публикации - 2014).

2. Генералов А.А., Зайцев С.Ю., Свирщевская Е.В. Identification of intracellular target of photoactivated fluorescent dye TMR-NN-813 Acta Naturae, №1 SPECIAL ISSUE, p.22 (год публикации - 2014).

3. Довженко Н.А., Милаева И.В., Максимов В.И., Зайцев С.Ю. Model systems of animal blood serum Acta Naturae, №1 SPECIAL ISSUE, p.20 (год публикации - 2014).

4. Зайцев С.Ю, Шапошников М.Н., Соловьева Д.О., Царькова М.С. Флуоресцентные красители: свойства и применение в клеточной биологии Ветеринария, зоотехния и биотехнология, 2014. № 7. С. 73-85. (год публикации - 2014).

5. Зайцев С.Ю. Supramolecular biomimetic nanosised sistems at the interfaces:fundamentals and applications тезисы докладов "XXVI Международная чугаевская конференция по координационной химии", Выпуск КФУ, стр. 144 (год публикации - 2014).

6. Зайцев С.Ю., Милаева И.В., Довженко Н.А., Зарудная Е.Н. Модельные системы на основе поверхностно-активных и поверхностно-инактивных компонентов сыворотки крови Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии и биотехнологии, Выпуск МГАВМиБ, стр.141 (год публикации - 2014).

7. Зайцев С.Ю., Соловьева Д.О., Зайцев И.С. Multifunctional membranes based on photosensitive crown-enther derivatives with advanced properties Advances in Colloid and Interface Science, p.1-9 (год публикации - 2014).

8. Зайцев С.Ю., Шапошников М.Н., Соловьева Д.О., Зайцев И.С., Мёбиус Д. Interaction of the novel precursors of two fluorescent dyes with model phospholipid in monolayers Acta Naturae, №1 SPECIAL ISSUE, P. 47 (год публикации - 2014).

9. Соловьева Д.О., Ряжина И.С., Зайцев С.Ю. Supramolecular systems based on lipase and synthetic polymers тезисы докладов "XXVI Международная чугаевская конференция по координационной химии", Выпуск КФУ, стр. 543 (год публикации - 2014).

10. Т. О. Азарнова, Е. Н. Индюхова, В. И. Максимов, И.С. Ярцева, С.Ю. Зайцев, Найденский М. С. Реализация антиоксидантных свойств препарата «Йодофол» при выращивании яичных кур Ветеринария, зоотехния и биотехнология, № 8. С. 65-71. (год публикации - 2014).

11. Царькова М.С., Милаева И.В., Зарудная Е.Н., Довженко Н.А., Зайцев С.Ю. Interfacial tensiometry method for studing of the protein-lipid-salt mixtures as model blood systems тезисы докладов "XXVI Международная чугаевская конференция по координационной химии", Выпуск КФУ, стр. 548 (год публикации - 2014).

12. Ярцева И.С., Азарнова Т.О., Индюхова Е.Н., А.А. Антипов, М.С. Найденский, С.Ю. Зайцев Соотношение транспортных белков - церулоплазмина, трансферрина и состояние «красной крови» при использовании некоторых естественных метаболитов у цыплят кросса Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные, №3, С. 15-18. (год публикации - 2014).


Аннотация результатов, полученных в 2015 году
Раздел 1. За отчётный период на основе полученных результатов создана база данных по основным биохимическим параметрам крови у отдельных видов животных в онтогенезе (см. сайт ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина http://www.mgavm.ru/facultas/vbf/kafedras/chemistry/sience_work.php). Установлены основные закономерности изменения параметров крови трех видов животных (крупный рогатый скот, свиньи, куры) в онтогенезе, что соответствует мировому уровню исследований в данной области. В частности, у крупного рогатого скота с возрастом в крови наиболее значительные изменения происходят в уровне альбуминов и ряда липидов. Это отражается также на параметрах динамического поверхностного натяжения (ДПН) сыворотки крови, что является оригинальным подходом и не имеет аналогов в мире. При беременности животных ряд содержащихся в крови веществ существенно изменяется по количеству и по активности. Это приводит к определенным изменениям значений ДПН сыворотки крови стельных коров, что обнаружено впервые. У поросят самые существенные различия в параметрах крови наблюдаются после 60 суток. Например, уровень общего белка постепенно растет (начиная с 3-месячного возраста) и стабилизируется, достигая 73,2±2,5 г/л (к возрасту 7 месяцев). У цыплят в возрасте от 1 до 60 суток были определены значения основных биохимических и гематологических показателей (общий белок, глюкоза, общие липиды, фосфатидилхолин, лизоцим, эритроциты, гемоглобин, гематокрит, железо, медь, трансферрин, церулоплазмин и т.д.) сыворотки крови в сравнительном аспекте и выявлены их специфические изменения в процессе роста молодняка яичных кур. Такие изменения объясняются активным ростом животных, увеличением биосинтеза белка в их организме и связанными с ними физиолого-биохимическими процессами. По материалам исследования подготовлены документы для оформления «ноу-хау». Раздел 2. Получены результаты корреляционного анализа между параметрами ДПН молока коров и его основными биохимическими показателями (содержанием жира и белка), что позволит использовать взаимозаменяемость вышеуказанных показателей (при оценке биохимического статуса животных). В результате обработки экспериментальных данных были получены следующие диапазоны значений показателей: σ0 = 50,78-75,38 мН/м, σ1 = 52,20-75,42 мН/м, σ2 = 45,90-71,50 мН/м, σ3 = 40,38-67,34 мН/м, λ0=2,31-16,4 мН∙м-1с-1/2, λ1=0,97-17,34 мН∙м-1с-1/2, жир 2,35-5,01%, белок 2,75-4,84%. A modeling of the relationship between the milk DST and biochemical parameters has been carried out by regression analysis. Regression equations have been developed to calculate the fat and protein contents according to the DST parameters from the complete and simplified versions of the model. Посредством метода регрессионного анализа было осуществлено моделирование взаимосвязи ДПН с биохимическими параметрами молока. Разработаны регрессионные уравнения для расчета содержания жира и белка по данным ДПН с вариантами полной и упрощенной модели. Раздел 3. Совместно с ВИЖ им. К.И. Эрнста создана база данных по основным параметрам крови крупного рогатого скота больного лейкозом или с подозрением на заболевание лейкозом (см. сайт ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина http://www.mgavm.ru/facultas/vbf/kafedras/chemistry/sience_work.php). Определены различия в метаболических параметрах и профилях лейкоцитов в крови у коров, зараженных вирусом лейкоза КРС (сокр. BLV+) по сравнению с не инфицированными коровами (сокр. BLV-). В частности, в крови BLV+ коров повышено содержание: общего белка (+6,89 г/л), глобулинов (+6,95 г/л,), мочевины (+1,02 мМ/л), билирубина (+2,01 мМ/л), тогда как значительно понижено содержание: глюкозы (-0,50 мМ/л), триглицеридов (-0,04 мМ/л), щелочной фосфатазы (-63,1 ИЕ/л), АСТ (-1,56 ИЕ/л) по сравнению с BLV- коровами. Раздел 4. Получены новые композиции заданного состава как для улучшения сохранности кормов и их других показателей для использования в отдельных областях животноводства, так и для повышения качества, интенсивности развития и жизнеспособности молодняка кур яичных кроссов. Разработанная (совместно с ФГБОУ ВО РГАУ – МСХА имени К.А.Тимирязева) композиция биологически активных веществ (БАВ) использована для обработки костры, получающейся при первичной переработке льняной и пеньковой тресты. Применение этой композиции на основе культуральной жидкости позволяет повысить сроки хранения кормов и кормовых добавок за счет снижения скорости разложения органических веществ в 1,5-1,7 раза, повысить кормовую ценность обработанной костры до 0,3-0,4 корм.ед. Разработана композиция БАВ и методика ее использования в кормах для цыплят яичных кроссов; определены оптимальные концентрации БАВ (янтарная и аскорбиновая кислоты в дозах 20 мг/кг и 10 мг/кг), которые способствуют повышению естественной резистентности цыплят в онтогенезе. Разработан инновационный подход к визуализации структур клеток животных с использованием нового прекурсора, который способен к флуоресценции после фотоактивации. Полученные в 2015 г. результаты опубликованы в 6 статьях, 5 кратких сообщениях и 18 тезисах докладов на международных конференциях.

 

Публикации

1. E.N. Zarudnaya, S.Yu. Zaitsev Protein mixtures as model for animal biological fluids surface tension analysis «БИОЛОГИЯ – наука XXI ВЕКА»: 19-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых, Сборник тезисов. Пущино, С. 123-124 (год публикации - 2015).

2. E.N. Zarudnaya, S.Yu. Zaitsev Physical and biochemical characteristics of dairy cows depending of the number of lactations Digest II International VETistanbul Group Congress 2015, P. 488 (год публикации - 2015).

3. S.Y. Zaitsev Application of the correlations between the interfacial tensiometry and biochemical parameters of the animal blood for comprehensive diagnostics FEBS journal, v. 282, p.192 (год публикации - 2015).

4. S.Y. Zaitsev Innovate approaches in the biochemistry courses for student education in veterinary medicine, zootechnology and biology FEBS journal 282, V. 282, p.357 (год публикации - 2015).

5. Виноградова И.В., Гладырь Е.А., Иванова Л.А., Крамаренко А.С., Гусев И.В., Руков И.В., Гулюкин М.И., Зиновьева Н.А. Metabolic parameters of cows with different status for bovine leukemia Journal of Animal Science, V. 93, Suppl. s3, 326-327 (год публикации - 2015).

6. Е.Н. Зарудная, С.Ю. Зайцев Взаимосвязь тензиометрических и биохимических параметров с жирномолочностью коров Актуальные проблемы биологии, нанотехнологии и медицины: Материалы VI Международной научно-практической конференции, Ростов-на-Дону, с. 69-70 (год публикации - 2015).

7. Зайцев С.Ю. Кинетика образовании и диссоциации биохимических супрамолекулярных систем Химическая термодинамика и кинетика: сб. докл. Пятой Международн. научн. конф. Великий Новгород, С. 74-75. (год публикации - 2015).

8. Зайцев С.Ю., Довженко Н.А., Милаёва И.В., Зарудная Е.Н., Царькова М.С. Методические основы применения межфазной тензиометрии для исследования биологических жидкостей Проблемы биологии продуктивных животных, №2, С. 97-105 (год публикации - 2015).

9. И.В. Милаева, Н.А. Довженко, С.Ю. Зайцев Dynamic surface intention of blood serum of cows Digest II International VETistanbul Group Congress 2015, P. 290 (год публикации - 2015).

10. И.В. Милаева, С.Ю. Зайцев, Н.А. Довженко, Д.В. Царьков, М.С. Царькова Регрессионная модель в анализе связи динамического поверхностного натяжения с содержанием жира и белка в молоке коров Ветеринария, Зоотехния и Биотехнология, №3 С.67-76 (год публикации - 2015).

11. И.И. Дмитревская, С.Л. Белопухов, И.С. Прохоров, С.Ю. Зайцев Влияние нового регулятора роста и развития растений атоник плюс на химический состав и качество получаемой льнопродукции Плодородие, № 6, с. 13-14 (год публикации - 2015).

12. И.С. Ярцева, Т.О. Азарнова, С.Ю. Зайцев Some indicators of the quality of chickens by using natural metabolites Digest II International VETistanbul Group Congress 2015, P. 475 (год публикации - 2015).

13. М.А. Кордонская, А.М. Кондаков, И.В. Виноградова Сравнительная характеристика содержания ионов кальция в молоке здоровых и больных лейкозом коров Актуальные проблемы биологии в животноводстве: материалы шестой Международной научной конференции, посвященной 55-летию ВНИИФБиП, Боровск, 65-67 (год публикации - 2015).

14. М.Н. Шапошников, С.Ю. Зайцев Методические основы получения конъюгатов фотоактивируемого флуоресценного производного родамина с белками для исследования их внутриклеточного транспорта Химическая термодинамика и кинетика: сб. докл. Пятой Международн. научн. конф. Великий Новгород, С. 255-256. (год публикации - 2015).

15. М.С. Царькова, Н.А. Довженко, И.В. Милаева, С.Ю. Зайцев, Д.В. Царьков Статистическая обработка данных тензиометрии молока с использованием модифицированной модели регрессионного анализа VI Международная научная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» г. Боровск, с. 110-111 (год публикации - 2015).

16. М.С. Царькова, С.Ю. Зайцев, Н.А. Довженко, И.В. Милаева, М.А. Дымкова, О.Н. Пустовая Зависимость параметров динамического поверхностного натяжения молока коров от содержания в нем жира и белка VI Международная научная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» г. Боровск, C. 111-112 (год публикации - 2015).

17. Н.А. Довженко, И.В. Милаева, М.С. Царькова, С.Ю. Зайцев Измерение динамического поверхностного натяжения молока коров VI Международная научная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» г. Боровск, С. 49-50 (год публикации - 2015).

18. Н.А. Довженко, И.В. Милаёва, О.А. Воронина, М.С. Царькова, С.Ю. Зайцев Закономерности измерения тензиометрических параметров молока зависимости от содержания в нем жира Актуальные проблемы биологии, нанотехнологии и медицины: Материалы VI Международной научно-практической конференции, Ростов-на-Дону, с. 67-68 (год публикации - 2015).

19. Н.А. Довженко, И.В. Милаёва, О.Н. Пустовая, М.С. Дымкова, Н.В. Сивкин, М.С. Царькова, С.Ю. Зайцев Измерение динамического поверхностного натяжения проб молока Химическая термодинамика и кинетика: сб. докл. Пятой Международн. научн. конф. Великий Новгород, С. 65-67 (год публикации - 2015).

20. Н.А. Довженко, С.Ю. Зайцев, В.И. Максимов The interconnection of protein metabolism and parameters of DPN in cats Digest II International VETistanbul Group Congress 2015, P.119 (год публикации - 2015).

21. О.А. Воронина, Д.В. Лабинова, К.С. Прокушина, М.С. Прозорова, А.С. Уварова, Е.М. Зимина, Н.В. Моисеева, И.В. Виноградова Физико-химические характеристики жировых шариков молока в зависимости от жирности пробы Химическая термодинамика и кинетика: сб. докл. Пятой Международн. научн. конф. Великий Новгород, С. 46-47 (год публикации - 2015).

22. О.А. Воронина, К.С. Прокушина, М.С. Царькова Correlation of the content of fat in milk with parameter of fatty balls Digest II International VETistanbul Group Congress 2015, Saint-Petersburg, P. 469 (год публикации - 2015).

23. С.Ю. Зайцев, Б.Брениг Сравнительный анализ биохимических и физико-химических методов и параметров крови животных Ветеринария, Зоотехния и Биотехнология, №9 С.43-49 (год публикации - 2015).

24. С.Ю. Зайцев, М.Н. Шапошников The photoactivated fluorescent dye for probing cellular organlles and lipid monolayers FEBS journal 282, V. 282, p. 148 (год публикации - 2015).

25. С.Ю. Зайцев, М.Н. Шапошников, Д.О. Соловьева, И.С. Зайцев, Д. Мёбиус Cell Staining by Photo-activated Dye and Its Conjugate with Chitosan Cell Biochemistry and Biophysics, V. 71 (3), P. 1475-1481. (год публикации - 2015).

26. С.Ю. Зайцев, Н.А. Довженко, Д.В. Царьков, М.С. Царькова, И.В. Милаева The regression analysis for interfacial tensiometry data of natural milk FEBS journal 282, p. 303-304 (год публикации - 2015).

27. С.Ю. Зайцев, Н.А. Довженко, И.В. Милаева, Е.Н, Зарудная, М.С. Царькова Применение межфазной тензиометрии для исследования биологических жидкостей животных VI Международная научная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» г. Боровск, С. 53-54 (год публикации - 2015).

28. С.Ю. Зайцев, Н.А. Довженко, И.В. Милаева, О.Н. Пустовая, М.С. Дымкова, Н.В. Сивкин Тензиометрические параметры молока коров в зависимости от содержания жира и белка Ветеринария, Зоотехния и Биотехнология, №2, С.47-52 (год публикации - 2015).

29. С.Ю. Зайцев, Н.А. Довженко, Н.В. Сивкин Dynamic surface intention of milk of cows of different fat content Digest II International VETistanbul Group Congress 2015, P. 486 (год публикации - 2015).


Аннотация результатов, полученных в 2016 году
В 2016 году по разделу 1 были не только завершены работы по совместному изучению основных биохимических параметров и показателей динамического поверхностного натяжения (ДПН) крови коров, но и проведен регрессионный анализ для определения статистической зависимости между ними. Основное внимание было уделено выявлению взаимосвязи показателей ДПН с содержанием белков и липидов в сыворотке крови коров. Установлены следующие закономерности: [Общий белок] = 0,64 σ0 – 0,46 σ1 – 0,43 σ2 + 0,31 λ1 + 76,4; p-value (%):<2,5; [Альбумин] = 0,98 σ0 – 0,25 σ1 – 0,39 σ2 + 0,01 σ3 – 0,22 λ0 + 10,22; p-value (%): <0,01; [Триглицериды] = – 0,11 σ1 + 0,14 σ2 – 0,1 σ3 – 0,09 λ1 + 5,79; p-value (%): <<0,01; [Холестерол] = 0,25 σ1 – 0,22 σ2 – 0,1 λ0 + 0,12 λ1 + 0,71; p-value (%): <<0,01. Эти и ряд других параметров: креатинин, кальций, хлор, калий и некоторые ферменты (аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, щелочная фосфатаза) могут быть выражены регрессионными уравнениями с вероятностью «p-value» в диапазоне 0,01-0,8%, а значит, существенно влияют на параметры ДПН сыворотки крови и могут быть определены через ДПН. Впервые проведен корреляционный анализ между параметрами ДПН сыворотки крови и соответствующими параметрами молока коров. Сильные корреляционные связи (от -0,873 до -0,995) отмечаются между показателями ДПН молока и крови у глубокостельных коров. Такие сильные корреляции свидетельствуют об однотипности процессов адсорбции основных компонентов крови и молока (как важнейших биологических жидкостей) на границе раздела фаз. Для животных других возрастов и репродуктивного периода отмечены средние корреляционные связи разного знака, что связано с изменениями во всех видах обменов. Указанные эффекты подтверждены данными проведенного корреляционного анализа между соответствующими биохимическими показателями крови и составом молока коров. Таким образом, комплексное использование методов биохимического анализа и определения ДПН таких биологических жидкостей позволяет всесторонне оценивать метаболические изменения в организме коров в зависимости от возраста и стадии лактации. Впервые получены метаболические параметры сыворотки крови коз, выраженные в биохимических и ДПН показателях в зависимости от периода репродуктивного цикла и возраста. Биохимический анализ сыворотки крови показал наибольшую интенсивность белкового и липидного обменов у коз во время пика лактации по сравнению с сухостойными на последнем месяце сукозности. Выявлена взаимосвязь между данными ДПН и биохимическими показателями сыворотки крови. Наибольшее количество сильных и средних взаимосвязей отмечается: обратных между уровнем холестерола в крови с σ0 (r=-0,80), σ1 (r=-0,72), σ2 (r=-0,39); уровнем общего белка с σ2 (r=-0,56) и σ3 (r=-0,62); альбуминов с σ1 (r=-0,42), σ2 (r=-0,74) и σ3 (r=-0,90); активностью АлАТ со значениями σ2 (r=-0,47) и σ3 (r=-0,63); прямых между концентрацией общего белка и значениями λ0 (r=0,62) и λ1 (r=0,84); уровнем альбуминов с λ0 (r=0,46) и λ1 (r=0,68); уровнем мочевины и σ1 (r=0,36), σ2 (r=0,43) у коз. По разделу 2 совместно с ВИЖ им. Л.К. Эрнста в ходе проведения корреляционного анализа установлена связь потенциальных биомаркеров лейкоза (ВЛКРС) с биохимическими показателями сыворотки крови у коров чёрно-пёстрой породы. Так, в сыворотке крови коров, носителей ВЛКРС, уровень неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) обратно коррелирует с уровнем холестерола (r=-0,39), а также с количеством альбуминов (r=-0,33), с триглицеридами (r=-0,09), а прямо - с общим билирубином (r=0,22). Уровень общего белка разнонаправленно коррелирует с уровнем альбуминов и глобулинов (r=-0,44, r=0,96). В сыворотке крови здоровых коров сильных (r>0,69) и средних (0,3<r<0,69) корреляционных связей выявлено больше. Уровень общего белка коррелирует с уровнем глобулинов (r=0,95), уровень мочевины с уровнем креатинина (r=0,68), уровень триглицеридов с уровнем холестерина (r=0,48). Интересным является сильная обратная корреляционная связь (r=-0,83), между уровнем глюкозы и НЭЖК в сыворотке крови здоровых коров. Уменьшение уровня НЭЖК в крови можно рассматривать как показатель снижения использования жиров при высоком содержании углеводов в крови. В сыворотке крови коров, носителей ВЛКРС, такой связи не выявлено, что может служить одним из критериев оценки ФБС коров. Совместно с ВИЖ им. Л.К. Эрнста сформирована база данных корреляционного анализа между уровнем основных биохимических показателей и нескольких потенциальных биомаркеров лейкоза в сыворотке крови крупного рогатого скота. По разделу 3: А) совместно с ФГБОУ ВО РГАУ – МСХА имени К.А. Тимирязева разработан лабораторный аналитический комплекс (со специальной компьютерной программой) для экспресс-оценки химического состава кормов, их энергетической и питательной ценности для крупного рогатого скота на основе метода ближней инфракрасной спектроскопии и термического анализа. На все оборудование разработаны, согласованы и утверждены технические условия ТУ 6630-002-00492931-2016. Впервые получены спектральные характеристики различных образцов костры, кормов и кормовых добавок на ее основе, создан банк данных по 700 образцам и более 3500 показателям. Разработаны методики для оценки пищевой ценности и содержания в костре и других кормах: протеина, жира, крахмала, клетчатки, золы, кальция, фосфора, сахара, влаги, а также оценки содержания аминокислот (лизина, метионина, триптофана, треонина, суммы метионин+цистеин, аргинина). Установлено, что содержание клетчатки в образцах костры варьирует от 43 до 59 %, протеина 1,2-4,5 %, общая сумма жиров 1,5-4,8 %, зола 2-6%, Са – 0,1-0,7 %, Р – 0,2-0,9 %, К – 0,1-0,4%, содержатся макро- и микроэлементы, в т.ч. обладающие физиологической активностью: Na, K, Ca, Mg, Fe – 700-2500 мг/кг; Ni, Si, Zn, Al, Ba, Mn, Cr, Sn - 5-30 мг/кг; Cu, Pb, Co, Li - 1,5-0,1 мг/кг и других. Установлено, что применение костры в опытах по кормлению крупного рогатого скота позволяет увеличить питательность продукта до 0,4 корм. ед. в 1 кг, при этом перевариваемость клетчатки увеличивается до 60%. Рекомендовано введение в рацион животных костры до 1,0 кг для увеличения питательной и энергетической ценности кормов. Разработаны методические рекомендации по расчету энергетической и питательной ценности кормов (содержащих костру) на основе данных, получаемых с использованием разработанного аналитического комплекса (см. сайт ФГБОУ ВО РГАУ – МСХА имени К.А. Тимирязева http://www.timacad.ru/faculty/chem/fizchem/index.php). По разделу 3: Б) установлено, что трансовариальная обработка разработанной нами композицией БАВ состава: коламин, янтарная кислота и серин (КЯС) положительно влияет на показатели биоконтроля инкубации. Например, за счет снижения отходов инкубации возросли показатели выводимости яиц от 2,42% до 7,46 % и вывода цыплят от 2,57% до 8,45 %; отмечается увеличение живой массы цыплят суточного возраста на 1,85-16,23%, а также уменьшение массы желточного мешка с остаточным желтком на 6,54-17,11% (в сравнении с контролем), что свидетельствует о лучшем усвоении питательных веществ. Таким образом, КЯС эффективны в отношении профилактики стресса в эмбриогенезе кур, т.к. способны улучшать резистентность опытных цыплят в сравнении с контролем. Сформирована база данных по основным показателям крови у цыплят при действии наиболее распространенных промышленных стрессоров (см. сайт ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина http://www.mgavm.ru/facultas/vbf/kafedras/chemistry/sience_work.php). Дополнительно к плану впервые установлены некоторые различия в биохимических показателях молока овцематок романовской породы и овцематок, являющихся гибридами (F2) архара (горного барана, Ovis ammon) и чистопородных овец романовской породы (Ovis aries), выведенных в ВИЖ им. Л.К. Эрнста. Начаты работы по определению параметров ДПН молока овцематок романовской породы и F2 гибридов (методом ВРА) в зависимости от дня лактации (совместно с ВИЖ им. Л.К. Эрнста). Полученные в 2016 г. результаты мирового уровня опубликованы в статьях, кратких сообщениях и тезисах докладов на конференциях: например, Zaitsev S. Yu. Dynamic surface tension measurements as general approach to the analysis of animal blood plasma and serum. Advances in Colloid and Interface Science. 2016 (IF 7.813) doi:10.1016/j.cis.2016.06.007 , P.201–213; монография Зайцева С.Ю. 2016; материалы V съезда физиологов СНГ и V съезда биохимиков России 2016 г.; FEBS Congress 2015, 2016 гг. и т.п.), что указывает на международный уровень и высокое качество выполнения работы. В 2016 г. по результатам исследований проведенных на предыдущем этапе работы, получены следующие РИД: 1) патент РФ № 2600820 «Способ определения жира и белка в молоке по результатам динамического поверхностного натяжения», авторы: Царькова М.С., Зайцев С.Ю., Довженко Н.А., Милаёва И.В., Воронина О.А., Царьков Д.В., (приоритет от 09.12.2015); опубликовано 27.10.2016 БИ № 30; 2) ноу-хау «Усовершенствованное проведение анализа крови методом межфазной тензиометрии на приборе PAT-1P», авторы: Зайцев С.Ю., Царькова М.С., Довженко Н.А., Милаёва И.В., Воронина О.А. (приоритет от 01.12.2015); распоряжение №206 Ректора ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина о введении режима коммерческой тайны от 29.11.2016. Подготовлены и опубликованы: 1) Белопyxов С.Л., Дмитpевскaя И.И., Зaйцeв С.Ю. Методические рекомендации по расчету энергической и питательной ценности кормов, содержащих костру, на аналитическом комплексе. М.: Изд-во РГАУ – МСХА имени К.А. Тимирязева. 2016. 34 с. 2) Технические условия. TУ 6630-002-00492931-2016. Лабораторный аналитический комплекс для экспресс-оценки энергетической и питательной ценности кормов для крупного рогатого скота (срок введения 30 ноября 2016 г.). По результатам научного исследования в октябре 2016 г. коллективом получена Золотая медаль и диплом 1 степени на Международной Агропромышленной выставке Золотая осень-2016 (Москва), проводимой Министерством сельского хозяйства.( http://goldenautumn.moscow/exhibitors/contest-programme/ ). Таким образом, разработаны фундаментальные основы комплексной технологии мониторинга БАВ в кормах, биологических жидкостях (крови и молока), на примере коров. Учитывая замечания рецензента по отчету 2015 года, нами была не только доработана комплексная технология на примере коров, но и разработана инновационная технология для птицеводства. В случае продолжения данного проекта на 2017-2018 годы, будет проведена разработка комплексной технологии на примере овец и коз.

 

Публикации

1. - Научная работа сотрудников кафедры химии под руководством профессора Зайцева С.Ю. по проекту Российского Научного Фонда 14-16-00046. газета "К знаниям", №9 (2385) 20 октября 2016г., с. 4 (год публикации - ).

2. - Измерение поверхностного натяжения сыворотки крови поможет в диагностике состояния животных Индикатор. Интернет-издание (электронное СМИ), Индикатор. Биология, 17 ноября 2016 года (год публикации - ).

3. Д. Соловьева, Е. Зарудная, С. Зайцев. Integral metabolism parameters of dairy goats during reproductive cycle periods. FEBS Journal, 283 (Suppl. 1) (2016) 178 (год публикации - 2016).

4. Довженко Н.А., Воронина О.А., Милаёва И.В., Царькова М.С., Зайцев С.Ю. МЕТОД ТЕНЗИОМЕТРИИ ДЛЯ ОЦЕНКИ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МОЛОКА. XX Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, том 4, с.258 (год публикации - 2016).

5. Е.Н. Зарудная, С.Ю. Зайцев Межфазная тензиометрия как экспресс-метод лабораторной диагностики в ветеринарии. ACTA NATURAE, СПЕЦВЫПУСК, том 2, 132 (год публикации - 2016).

6. Е.Н. Зарудная, С.Ю. Зайцев, И.И. Кочиш Биохимический профиль крови молочных коз в зависимости от периода репродуктивного цикла. ACTA NATURAE, СПЕЦВЫПУСК, том 1, 193 (год публикации - 2016).

7. Зайцев С. Ю. Dynamic surface tension measurements as general approach to the analysis of animal blood plasma and serum Advances in Colloid and Interface Science, v. 235, P. 201–213. (год публикации - 2016).

8. Зайцев С.Ю. Blood as super-complex colloid system – tensiometry approach. VIIIth INTERNATIONAL SYMPOSIUM «DESIGN AND SYNTHESIS OF SUPRAMOLECULAR ARCHITECTURES», IInd YOUTH SCHOOL ON SUPRAMOLECULAR AND COORDINATION CHEMISTRY., program &abstracts, p. 41, O-5 (год публикации - 2016).

9. Зайцев С.Ю., Фролова Л.А., Максимов В.И., Еремеев Н.Л., Лисицына А.А., Царькова М.С. Peculiaraties of the graduate and post-graduate training in direction «Biochemistry» at the veterinary-biological faculty. The XX Mendeleev Congress on general and applied chemistry, volume 5, p.73 (год публикации - 2016).

10. Зайцев С.Ю., Царькова М.С., Довженко Н.А., Милаёва И.В., Воронина О.А. «Усовершенствованное проведение анализа крови методом межфазной тензиометрии на приборе PAT-1P» -, распоряжение №206 Ректора ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина о введении режима коммерческой тайны от 29.11.2016. (год публикации - ).

11. И. С. Луговая, Т. О. Азарнова, М. С. Царькова, Л. А. Фролова, С. Ю. Зайцев. Влияние янтарной и аскорбиновой кислот на сохранность, естественную резистентность и динамику живой массы яичных цыплят. Ветеринария, зоотехния и биотехнология, № 9, с.19-24 (год публикации - 2016).

12. К. Прокушина, С. Зайцев, И. Гусев The correlation between biochemical and dynamic surface tension parameters of calves blood serum. FEBS Journal, 283 (Suppl. 1) (2016) 171 (год публикации - 2016).

13. М.С. Царькова, О.А. Воронина, Н.А. Довженко, И.В. Милаева, Д.В. Царьков, С.Ю. Зайцев Correlations of the interfacial tensiometry and biochemistry data of the natural milk by regression analysis method. 6th International Colloids Conference., 2016, Berlin, [P080]. (год публикации - 2016).

14. Михаил Н. Шапошников, Илья С. Зайцев, Сергей Ю. Зайцев Conjugates of the fluorescent dyes with the natural polyelectrolytes for molrcular transport visualization. 11-th International Symposium on Polyelectrolytes, Moscow 2016. Poster 88. p. 200. (год публикации - 2016).

15. Н. Довженко, М. Царькова, Д. Царьков, С. Зайцев. Regression analysis as quantitative method for determination of DST parameters of cow milk using its fat and protein contents. FEBS Journal, 283 (Suppl. 1) (2016) 233 (год публикации - 2016).

16. О. Воронина, Н. Довженко, К. Прокушина, С. Зайцев, М. Царькова, А. Савина. Correlation between the dynamic surface tension and parameters of cattle milk. FEBS Journal, 283 (Suppl. 1) (2016) 235 (год публикации - 2016).

17. Оксана А. Воронина, Марина С. Царькова, Сергей Ю. Зайцев Nutrition influence on blood colloid and biochemistry parameters of the lactating cow Biosciences Biotechnology Research Asia (BBRA), Vol.14, No.1, p.89-92. (год публикации - 2017).

18. С. Ю. Зайцев Interfacial Tensiometry Method for the Analysis of Model Systems in Comparison with Blood as the Most Important Biological Liquid MOSCOW UNIVERSITY CHEMISTRY BULLETIN, Vol. 71 No. 3 2016, 205-208 (год публикации - 2016).

19. С.Л. Белопухов, И.И. Дмитревская, Е.А. Гришина Физико-химические свойства органо-минерального комплекса из растительных остатков льняной костры. Агрохимия, № 6, с. 20 – 28 (год публикации - 2016).

20. С.Ю. Зайцев Lipid-protein particles in cow milk as natural colloid systems. 6th International Colloids Conference., 2016, Berlin, [P078]. (год публикации - 2016).

21. С.Ю. Зайцев Параметры динамического поверхностного натяжения растворов белок-липид-соль как систем моделирующих плазму крови. ВЕСТНИК МОСКОВСКОГО УНИВЕРСИТЕТА, СЕР. 2. ХИМИЯ. 2017. Т. 58. № 2, c. 97-103. (год публикации - 2017).

22. С.Ю. Зайцев Физико-химические методы исследования биополимеров плазмы и сыворотки крови животных. ACTA NATURAE, СПЕЦВЫПУСК, том 2, 90-91. (год публикации - 2016).

23. С.Ю. Зайцев Methods for animal blood plasma and serum analysis achievements and promises. BIOSCIENCES BIOTECHNOLOGY RESEARCH ASIA, vol. 13, № 04, 2016 (год публикации - 2016).

24. С.Ю. Зайцев Тензиометрический и биохимический анализ крови животных: фундаментальные и прикладные аспекты. Издательство «Сельскохозяйственные технологии», Москва, Издательство «Сельскохозяйственные технологии», 2016. – 192 с. (год публикации - 2016).

25. С.Ю. Зайцев Interfacial tensiometry of lipid-protein-salt model systems and cattle blood analysis as promising diagnostic method. 6th International Colloids Conference, 2016, Berlin, [P073]. (год публикации - 2016).

26. С.Ю. Зайцев, Е.Н. Зарудная, В.И. Максимов Закономерности изменения тензиометрических параметров молока коров в зависимости от периода лактации. ACTA NATURAE, СПЕЦВЫПУСК, том 1, 195 (год публикации - 2016).

27. Сергей Ю. Зайцев Functional polymer multilayers with immobilized biologically active compounds. 11-th International Symposium on Polyelectrolytes, Moscow 2016. Poster 116. p. 228. (год публикации - 2016).

28. Царькова М.С., Зайцев С.Ю., Довженко Н.А., Воронина О.А., Милаёва И.В., Царьков Д.В. «Способ определения жира и белка в молоке по результатам динамического поверхностного натяжения» -, опубликовано 27.10.16, БИ № 30 (год публикации - ).

29. Шапошников М.Н., Б.В. Яненко, Зайцев С.Ю. Synthesis cetylamide of rhodamine B. VIIIth INTERNATIONAL SYMPOSIUM «DESIGN AND SYNTHESIS OF SUPRAMOLECULAR ARCHITECTURES», IInd YOUTH SCHOOL ON SUPRAMOLECULAR AND COORDINATION CHEMISTRY., program &abstracts, p. 66, Y-8. (год публикации - 2016).


Возможность практического использования результатов
не указано