КАРТОЧКА ПРОЕКТА,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ


Номер 14-50-00068

НазваниеМолекулярно-клеточные технологии для лечения социально значимых заболеваний

РуководительНикольский Николай Николаевич, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регионФедеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт цитологии Российской академии наук, г Санкт-Петербург

Года выполнения при поддержке РНФ 2014 - 2018 

КонкурсКонкурс 2014 г. на получение грантов по приоритетному направлению деятельности РНФ «Реализация комплексных научных программ организаций»


СтатусУспешно завершен


 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ


Аннотация
Институт цитологии РАН (ИНЦ РАН) является ведущей организацией в области клеточной биологии и клеточных технологий в Российской Федерации. При Институте работает Научный совет по клеточной биологии и иммунологии РАН и журнал «Цитология» (“Cell and Tissue Biology”) издательства «Наука». В Институте организован и функционирует Центр коллективного пользования - ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных», включающий Банк клеточных культур, в криохранилище которого находятся более 300 тысяч образцов клеточных культур человека и животных. Работа коллектива ИНЦ РАН направлена на расшифровку основных молекулярно-клеточных механизмов, обеспечивающих функционирование клеток и тканей. В последние годы получили развитие исследования по разработке клеточных технологий для регенеративной медицины, пониманию процессов, регулирующих злокачественный рост, старение и клеточную гибель. В сферу этих проблем вовлечено до 80% научных сотрудников Института. В качестве главных направлений развития Института цитологии РАН определены следующие: 1. Разработка новых клеточных технологий для регенеративной медицины, включающие проведение доклинических испытаний, клинических исследований и клиническое использование; 2. Разработка фундаментальных основ, определяющих путь реакции клеток, главным образом, стволовых клеток человека и животных, включая эмбриональные стволовые клетки человека в направлении пролиферации, дифференцировки, преждевременного старения или апоптотической гибели. 3. Поиск новых неспецифических антираковых агентов, в том числе способных оказывать воздействие на нормальные стволовые клетки и раковые стволовые клетки. Соответственно, в рамках проекта планируется организация работы по 3 направлениям: - Стволовые клетки – основа клеточных технологий - Эффекторные программы клеточного старения - Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств Основной объем работ запланирован в рамках первого направления, включающего как фундаментальные исследования, так и разработку клеточных технологий и организацию серийного выпуска клеточных продуктов. Необходимость фундаментальных исследований диктуется тем, что многие проблемы, связанные с получением, культивированием и использованием стволовых клеток остаются нерешенными. Красивая гипотеза о том, что в крови постоянно циркулируют стволовые клетки, которые могут узнавать зоны повреждения и дифференцироваться в соответствующие тканевые клетки, купируя повреждения, не нашла своего подтверждения. Поэтому простое введение недифференцированных стволовых клеток может давать положительный терапевтический эффект только за счет паракринной секреции биологически активных факторов, но не приводит к дифференцировке трансплантированных клеток в клетки поврежденной ткани. Для обеспечения заместительной терапии органов и тканей необходимо проводить предварительную дифференцировку клеток или их комитирование в заданном направлении in vitro, и невозможно обойтись без использования культивирования и наращивания клеточной массы вне организма. Возникает проблема возможных генетических и эпигенетических изменений и развития туморогенности в процессе культивирования. Одной из задач предлагаемого проекта является исследование функциональных свойств мезенхимных стволовых клеток (МСК) при культивировании для накопления клеточной массы, используемой в качестве трансплантационного материала и оценка его терапевтического эффекта. Основным источником МСК будут служить ткань эндометрия. Для изучения онкогенной безопасности будут получены эндометриальные МСК (эМСК) от разных доноров и исследована их генетическая стабильность с помощью кариотипического анализа. Будет проведен анализ устойчивости эМСК к мутагенам и канцерогенам. В опытах in vitro будет разработана модель децидуальной дифференцировки эМСК.. Экспериментальным животным, моделирующим синдром Ашермана, будут трансплантированы эМСК и исследована коррекция эндометрия по уровню фертильности и децидуализации. Синдром Ашермана сопровождается повреждением эндометрия у женщин и является одной из главных причин женского бесплодия. Уровень дифференцировки будет оценен по морфологическим признакам и молекулярным маркерам (синтез пролактина, PRL, и белка, связывающего инсулиноподобный фактор роста 1, IGFBP). Будет проведено сравнение коррекции нарушений эндометрия у экспериментальных животных при трансплантации эМСК человека и аутологичных клеток костного мозга крыс. Фундаментальные исследования функциональных свойств эМСК станут основой для разработки клеточных продуктов на основе эМСК для терапевтического использования в клинике: - клеточный продукт на основе клеток, выделенных из ткани мочеполовой системы кролика и культивируемых на модифицированной полилактидной матрице, с целью восстановления ткани мочевого пузыря; - способ восстановления роговицы глаза с использованием дермальных фибробластов, растущих на пористой ПТФЭ (политетрафторэтиленовой) мембране или на коллагеновом скаффолде; - клеточный продукт, представленный мезенхимными клетками костного мозга, направленными в остеогенную дифференцировку, и культивируемыми на матрице из деминерализованной кости; - способ заселения дермальными фибробластами пористого титанового имплантата и технологии его применения с целью протезирования ампутированных конечностей. В коллективе ИНЦ РАН накоплен большой опыт производства и передачи клеточных продуктов в клиники Санкт-Петербурга, РФ и стран СНГ для лечения ожогов, трофических язв и ран различной этиологии. На основе культивируемых клеток кожи человека, кератиноцитов и фибробластов и резорбируемых матриц из белков внеклеточного матрикса (коллагена I типа, фибрина плазмы крови человека или стандартного коммерческого препарата фибриногена) разработано пять клеточных продуктов. Все они эффективно зарекомендовали себя в клинической практике для заживления различных ран с повреждениями кожной поверхностью - ожогов различной степени (от незначительных до сверхкритических), трофических язв различного генеза (в том числе «диабетическая стопа» и результат радиационного облучения), свищи, пролежни, огнестрельные раны (всего более 500 пациентов). Клинический эффект подтвержден как в стационарных, так и амбулаторных условиях применения. На эти продукты составлена нормативно-техническая документация (Технические условия), проведены технические, токсикологические и клинические испытания. Для внедрения уже разработанных клеточных технологий в рамках проекта запланировано создание в ИНЦ РАН опытного лабораторного производства клеточных продуктов по международным стандартам GMP, где будут отрабатываться производственные технологии в целях коммерциализации уже созданных клеточных продуктов для обеспечения ими клинических потребностей. Запланирована организация криобанка охарактеризованных дермальных фибробластов для приготовления клеточных продуктов на основе культивируемых клеток кожи человека с целью заживления ран. В результате выполнения всего комплекса работ по данному направлению будет создана прочная фундаментальная база для исследования свойств стволовых клеток, используемых для трансплантации, позволяющая проводить всесторонний анализ возможных рисков и стабильности функционирования трансплантируемых органов и тканей. Одновременная организация серийного сертифицированного производства клеточных продуктов для целей трансплантации позволит обеспечить широкое клиническое применение уже разработанных продуктов (типа «Дермального эквивалента») и проводить клинические испытания вновь созданных клеточных продуктов (на основе стволовых клеток эндометрия и др.) Практическое использование разработанных продуктов позволит уже в ходе выполнения проекта спасать человеческие жизни в ситуациях критических и сверхкритических, и в перспективе - регенерировать ткани и органы в случаях, когда используемые стандартные методы лечения неэффективны. По направлению «Эффекторные программы клеточного старения» будет проведено сравнительное изучение ответа эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и мезенхимальных стволовых клеток эндометрия (эМСК) на действие ДНК-повреждающих и стресс-факторов, что может показать важные отличия между этими клетками в плане реализации программы клеточного старения. Будет проведена оценка эффекта воздействия антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина (NAC) в регулировании процесса старения эМСК, индуцированного стресс-факторами. Будет проведен анализ параметров клеточного старения, индуцированного в опухолевых клетках различного тканевого и видового происхождения, чувствительных и устойчивых к апоптозу, что позволит оценить риски возобновления пролиферации при удалении индукторов старения. Будет исследована роль mTOR сигнального пути в поддержании недифференцированного состояния ЭСК мыши и изменения его активности при дифференцировке ЭСК, вызванной удалением ростового фактора LIF, необходимого для поддержания плюрипотентного состояния этих клеток, а также роль комплексов mTORC1 и mTORC2 в регуляции отдельных этапов аутофагии. Будет проведен анализ временной и пространственной локализации киназы mTOR и анализ экспрессии аутофагических генов, вовлеченных в регуляцию mTOR-зависимой и mTOR-независимой аутофагии. Также будут получены данные о вкладе цитозольной деацетилазы HDAC6 (класс II), которая активирует аутофагию, направленную на утилизацию атипичных белковых агрегатов и поврежденных митохондрий. На заключительных этапах выполнения проекта будет проведена идентификация перекрестных сигнальных путей, регулирующих аутофагию и апоптоз, для разработки подходов усиления эффективности противоопухолевой терапии в клетках, устойчивых к апоптозу. Выяснение механизмов баланса между выживанием и клеточной гибелью в чувствительных и устойчивых к апоптозу опухолевых клетках принципиально необходимо для дальнейшей разработки новых подходов в лечении раковых заболеваний, с использованием модуляторов активности аутофагического процесса. Кроме того, будут изучены механизмы повышения чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам при совместном действии с различными ингибиторами аутофагии. По направлению «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств» планируемое исследование внесет вклад в разработку новых технологий противоопухолевой терапии, основанных на наших знаниях о функции молекулярных шаперонов (БТШ) и мутантного опухолевого супрессора р53 в раковых клетках. Будет продолжена разработка индукторов и ингибиторов экспрессии БТШ70, ожидаемым результатом будет получение веществ, подавляющих синтез шаперона БТШ70, и вызывающих гибель раковых клеток. Актуальным подходом к созданию противоопухолевых препаратов является подавление самой шаперонной функции БТШ70, что приводит к повышению чувствительности раковых клеток к стрессовым и лекарственным факторам. Кроме того, перспективным направлением проекта представляется поиск соединений, направленных на дестабилизацию мутантного р53 и/или восстановление его супрессорной функции. С этой целью мы планируем провести поиск соединений конвертирующих мутантный р53 в белок дикого типа и способных работать в сочетании с низкомолекулярными ингибиторами шаперонов БТШ70/БТШ90. Ожидается, что данный подход, в сочетании с биоинформатическим анализом in silico, позволит получить новый класс фармакогенных соединений (или их комбинаций) для создания противораковых терапий. Полученные соединения будут испытаны на различных клеточных моделях, включая стволовые раковые клетки, индуцированные к эпителиально-мезенхимному переходу. Ожидается, что наши новые данные позволят впервые показать роль шаперонов в динамике процесса метастазирования раковых клеток. Эти результаты будут иметь мировой приоритет. Отобранные соединения будут также протестированы в опухолевых моделях, основанных на бестимусных мышах, что делает данные исследования приоритетными в России. Наконец еще одной мишенью станет иммуномодуляторная функция БТШ70, покидающего раковую клетку; в этой работе планируется оценить способность отобранных соединений провоцировать внеклеточный транспорт белка и повышать чувствительность клеток к действию цитотоксических лимфоцитов. Ожидается, что подобные средства будут активировать систему врожденного и приобретенного противоопухолевого иммунитета. В течение всего срока выполнения проекта будет проведено 3-4 симпозиума с участием зарубежных и российских специалистов в различных областях онкологии. Все, вместе взятое, должно привести к появлению нового центра в Санкт-Петербурге, занимающего ведущую роль в изучении молекулярных основ онкологических заболеваний, одной из самых актуальных проблем биомедицины. Планируется закончить работы по наладке и приготовлению разработанных тест-систем с целью их продвижения на рынок высокотехнологичной продукции для фармакологии. Задачей такой деятельности является привлечение инвестиций для сертификации, патентования и введения подобных систем в исследовательские фармакологические компании. В результате исследований по нашему направлению будут разработаны 1-2 препарата или их комбинации, и важным звеном в их продвижении станет организация доклинических испытаний. Перечисленные направления относятся к «горячим точкам» современной биомедицины. Конечно, в рамках одного института, невозможно претендовать на решение поставленных глобальных задач. По нашим оценкам, в нашей стране сложилась ситуация, когда использование стволовых клеток для заместительной тканевой терапии и, особенно, реклама «чудесных свойств» стволовых клеток и якобы уже решенных проблем по созданию искусственных органов и тканей далеко опережают необходимые фундаментальные разработки в этой области, только на основе которых могут быть созданы перспективные и безопасные трансплантационные материалы. Поскольку работы в данной области весьма дороги и трудоемки, наиболее рациональным развивать и поддерживать данные исследования в научных центрах, обладающих опытом и трезвым взглядом на проблемы разработки и использования клеточных технологий для регенеративной медицины. Мы полагаем, что Институт цитологии РАН может рассматриваться в качестве такого центра. Кадровый потенциал Института может обеспечить соответствующее развитие работ, в том числе благодаря наличию в коллективе значительной прослойки молодых ученых, в основном прошедших через аспирантуру института. При соответствующей поддержке Институт сможет привлечь к перечисленным направлениям работы не менее 30 выпускников аспирантуры и других молодых специалистов и сохранить вовлеченность в эти работы новых аспирантов и значительного числа студентов ведущих петербургских ВУЗов.

Ожидаемые результаты
Осуществление проекта по направлению «Стволовые клетки – основа клеточных технологий» представляет собой комплекс мероприятий: «фундаментальные исследования стволовых клеток человек – разработка клеточных продуктов на основе стволовых клеток человека и фибробластов – организация опытного производства клеточных продуктов». В области фундаментальных исследований задачей предлагаемого проекта является исследование функциональных свойств мезенхимных стволовых клеток (МСК) при культивировании in vitro для накопления клеточной массы, используемой в качестве трансплантационного материала и оценка его терапевтического эффекта. Основным источником МСК будут служить МСК эндометрия (эМСК). Для изучения онкогенной безопасности будут получены эМСК от разных доноров и исследована их генетическая стабильность методами кариотипаического анализа и полнотранскриптомного секвенировния с последующим биоинформатическим анализом данных с целью выявления возможных проявлений онкогенности в транскриптоме в процессе культивирования. Будет проведен анализ устойчивости эМСК к мутагенам и канцерогенам. В опытах in vitro будет разработана модель децидуальной дифференцировки эМСК. На крысах с помощью хирургических методов будет создана модель синдрома Ашермана. Это заболевание у женщин вызывает повреждение эндометрия и является одной из главных причин женского бесплодия. Экспериментальным животным будут трансплантированы эМСК и исследована коррекция эндометрия по уровню фертильности и децидуализации. Уровень дифференцировки будет оценен по морфологическим признакам и молекулярным маркерам (синтез пролактина, PRL, и белка, связывающего инсулиноподобный фактор роста 1, IGFBP). Будет проведено сравнение коррекции нарушений эндометрия у экспериментальных животных при трансплантации эМСК человека и аутологичных клеток костного мозга крыс. При обнаружении положительного влияния стволовых клеток эндометрия человека на коррекцию дефектов эндометрия подопытных животных будут разработаны клеточные продукты для клинических испытаний. Кроме того, будут проведены фундаментальные исследования по разработке новых клеточных продуктов: 1) Разработка способов восстановления роговицы глаза с использованием дермальных фибробластов или клеток лимба, растущих на пористой ПТФЭ (политетрафторэтиленовой) мембране или на коллагеновом скаффолде. 2) Разработка клеточного продукта, представленного мезенхимными клетками костного мозга, направленными в остеогенную дифференцировку, и культивируемыми на матрице из полилактида, для восстановления нарушенной целостности костной ткани, в частности, при удалении доброкачественных новообразований. 3) Использование пористого титанового имплантата, заселенного дермальными фибробластами; разработка технологии его применения с целью протезирования ампутированных конечностей. Наконец, в рамках проекта запланировано создание последнего необходимого звена научно-технологической цепочки - опытного производства на базе ИНЦ РАН для создания клеточных продуктов по международным стандартам GMP, где будут отрабатываться производственные технологии в целях коммерциализации разработанных клеточных продуктов и результатов последующих разработок для обеспечения ими клинических потребностей, а также разрабатываться условия масштабирования производства. В результате выполнения всего комплекса работ по данному направлению будет создана прочная фундаментальная база для исследования свойств стволовых клеток, используемых для трансплантации, позволяющая проводить всесторонний анализ возможных рисков и стабильности функционирования трансплантируемых органов и тканей. Одновременная организация серийного сертифицированного производства клеточных продуктов для целей трансплантации позволит обеспечить широкое клиническое применение уже разработанных продуктов (в частности, дермального эквивалента) и проводить клинические испытания новых клеточных продуктов (на основе стволовых клеток эндометрия и др.). По направлению «Эффекторные программы клеточного старения» будет проведено сравнительное изучение ответа эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и мезенхимальных стволовых клеток эндометрия (эМСК) на действие ДНК-повреждающих и стресс-факторов, что может показать важные отличия между этими клетками в плане реализации программы клеточного старения. Будет проведена оценка эффекта воздействия антиоксиданта N-ацетил-L-цистеина (NAC) в регулировании процесса старения эМСК, индуцированного стресс-факторами. Будет проведен анализ параметров клеточного старения, индуцированного в опухолевых клетках различного тканевого и видового происхождения, чувствительных и устойчивых к апоптозу, что позволит оценить риски возобновления пролиферации при удалении индукторов старения. Будет использован широкий спектр маркеров старения , что позволит наиболее полно оценить риски возобновления пролиферации при удалении индукторов старения. Эти данные можно будет использовать для повышения эффективности противоопухолевой терапии и для улучшения культивирования стволовых клеток для регенеративной медицины. В ходе выполнения работы будет изучена роль mTOR-зависимой и mTOR-независимой аутофагии в регуляции пролиферации и клеточной гибели опухолевых клеток. НА основании этих данных для каждого типа аутофагии можно будет использовать наиболее адекватные модуляторы, что позволит переводить протективную форму аутофагии в деструктивную, т.е. вызывать их гибель. Будет закончена идентификация перекрестных сигнальных путей, регулирующих аутофагию и апоптоз, для разработки подходов усиления эффективности противоопухолевой терапии в клетках, устойчивых к апоптозу. Вызывая разобщение взаимодействия отдельных компонентов процессов апоптоза и аутофагии, можно усиливать апоптотическую или аутофагическую гибель клеток, в зависимости от используемых модуляторов, что несомненно является новым подходом для эффективной гибели опухолевых клеток. Это направление работы является принципиально новым и позволяет выяснить молекулярные механизмы блокирования репликативного старения соматических клеток путем модуляции mTOR-сигнального пути и активации аутофагии. Поскольку процесс образования iPS клеток факторами плюрипотентности идет через активацию программы клеточного старения, которое затем отменяется благодаря стохастическим процессам, направленное использование модуляторов mTOR позволит установить конкретные механизмы. Этот новый подход является перспективным для разработки способов получения линий первичных клеток, не обладающих свойствами трансформированных клеток, не имеющих хромосомных перестроек или дисфункций контрольных точек клеточного цикла (checkpoints). Данный метод может быть также полезен для получения стабильных линий от больных с различными заболеваниями, связанными с нарушениями процесса аутофагии, что имеет перспективы для медицины. По направлению «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств» планируемое исследование внесет вклад в разработку новых технологий противоопухолевой терапии, основанных на наших знаниях о функции молекулярных шаперонов (БТШ) и мутантного опухолевого супрессора р53 в раковых клетках. Эти белки, механизмы их экспрессии и взаимодействующие с ними полипептиды составят список мишеней для малых молекул, которые будут определены на основании скрининга доступных библиотек химических соединений. В первую группу таких соединений входят вещества, способные вызывать повышение или понижение экспрессии БТШ70. Наибольший интерес для нас представляют вещества, снижающие экспрессию гена БТШ70 и поэтому увеличивающие чувствительность раковых клеток к стрессовым факторам или лекарственным средствам. Насколько нам известно, специальных систем для анализа веществ, подавляющих экспрессию БТШ70, в мире пока нет. К веществам этой группы также относятся молекулы, способные повредить шаперонную функцию БТШ70; такого эффекта можно достичь изменением конформации шаперона или препятствуя его взаимодействиям с ко-шаперонами. Системы для скрининга подобных веществ представят собой совершенно новую, патентозащитную разработку. Разработав такие тесты и имея доступ к крупным библиотекам веществ (в частности Национального Института Здоровья США), мы сможем довольно быстро выявить компаунды с противоопухолевой активнстью. Вторую группу составят малые молекулы, способные модулировать степень связывания мутантной формы р53 шапероном БТШ70; очевидно, что подобное маскирование подавит про-онкогенной активности мутантного р53. Совершенно новой по принципу и воплощению станет тест-система для превращения мутантной формы р53 в нормально функционирующую; вещества, выявленные с помощью такого теста составят класс перспективных противоопухолевых лекарств. Все выявленные в ходе работ соединения будут подвергнуты испытаниям с использованием ряда клеточных и животных моделей солидных форм рака, в основном глиобластомы, меланомы и рака толстой кишки. Крайне важными мы считаем модели метастазирующих клеток меланомы и эпителиально-мезенхимного перехода. Кроме чисто научного интереса, мы рассчитываем извлечь практическую пользу, то есть получить информацию о последствиях расбалансирования функции БТШ70 в процессе ЭМП при действии разрабатываемых соединений. В результате данного этапа мы надеемся выделить несколько веществ, которые подавляют функцию обычных и стволовых раковых клеток, что, безусловно, станет открытием в данной области. В целом, решение задач проекта должно принести нам 1-2 препарата, обладающие способностью модулировать активность БТШ70 и мутантного р53 и, как следствие, показывающие противоопухолевую активность. Очень перспективным кажется использование иммуномодуляторной функции БТШ70 и его ко-стимуляторов; по нашим прогнозам такие технологии наиболее быстро приблизят коллектив к началу клинических испытаний, то есть к выходу в клинику. Наш проект выделяется своей масштабностью и охватом сразу нескольких, связанных друг с другом клеточных и молекулярных мишеней. Поскольку клеточные мишени представлены не только обычными раковыми, но и стволовыми раковыми клетками, включенными в процесс эпителиально-мезенхимного перехода, итоговый результат даст право говорить о разработке средств против метастазирования; такой результат, безусловно, внесет вклад в создание инновационных средств противораковой терапии. Мы считаем существенным, что часть поддержки Фонда будет передана на обучение молодых сотрудников; для этого в частности будет организован ежегодный симпозиум по молекулярной биологии.


 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ


Аннотация результатов, полученных в 2014 году
-

 

Публикации


Аннотация результатов, полученных в 2015 году
В соответствии с целями и задачами проекта Института цитологии РАН в 2015 году были проведены фундаментальные исследования в области молекулярной и клеточной биологии стволовых клеток, сгруппированные в три основных направления проекта - «Стволовые клетки – основа клеточных технологий», «Эффекторные программы клеточного старения» и «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств». Проведены мероприятия по развитию инфраструктуры Института, направленные на создание условий для работы с культурами клеток и разработки клеточных продуктов, соответствующих стандартам GMP. Получены и охарактеризованы новые линии мезенхимных стволовых клеток эндометрия (МСКэ) человека из десквамированного эндометрия менструальной крови здоровых доноров. Получены также клеточные линии МСКэ от двух доноров с диагнозом аденомиоз и двух доноров с диагнозом эндометриоз. Сравнительный анализ показал, что линии МСКэ от больного с аденомиозом по морфологическим и фенотипическим признакам не отличаются от линий МСКэ, полученых от здоровых доноров. В то же время, цитогенетический анализ выявил отличия кариотипа по 7 и 11 хромосом. Проведен анализ структуры кариотипа линии МСКэ № 2304 на разных этапах культивирования. Установлено, что выявляемые на ранних пассажах незначительные кариотипические отклонения носят случайный характер и нивелируются селективным отбором в процессе культивирования, в результате линия характеризуется нормальным кариотипом. Исследована устойчивость стволовых клеток человека к цитотоксическому стрессу, вызванному воздействием антиопухолевого препарата доксорубицина, к окислительному стрессу, вызванному действием перекиси водорода, и к тепловому шоку. Показана высокая устойчивость МСКэ к стрессовым воздействиям по сравнению с эмбриональными стволовыми клетками человека. Обнаружено, что субцитотоксические стрессовые воздействия индуцируют состояние преждевременного старения в культурах МСКэ, в отличие от культур эмбриональных стволовых клеток. Проведено полногеномное транскриптомное секвенирование клеток линии МСКэ от здорового донора при культивировании в нормальных условиях и клеток этой же линии после воздействия теплового стресса. Полученные результаты секвенирования находятся в процессе обработки, полномасштабный биоинформатический анализ запланирован на 2016 год. Проведен биоинформационный анализ полнотранскриптомных данных для сердца и печени человека и мыши. Показано, что активированные плоидностью гены обогащают биологические процессы, относящиеся к развитию, морфогенезу и биологии стволовых клеток (включая сигнальные пути Hippo, Pi3K, WNT, Hedgehog и TGF-β) в большей степени, чем подавленные плоидностью гены. Таким образом, полученные данные впервые показали, что полиплоидия может регулировать модули развития, повышая их активность. Проведен сравнительный анализ способности к децидуальной дифференцировке мезенхимных стволовых клеток эндометрия, костного мозга и жировой ткани человека по морфологическим признакам и секреции маркерных белков. Установлена высокая способность стволовых клеток эндометрия к направленной дифференцировке в децидуальном направлении при слабой выраженности дифференцировки клеток костного мозга и полном отсутствии признаков дифференцировки в культурах клеток жировой ткани. Полученные результаты позволяют рассматривать МСКэ как перспективный клеточный материал для терапии бесплодия. Впервые в стране выполнена трансплантация приготовленного коллагенового скаффолда, заселенным лимбальными клетками на модельную рану роговицы глаза кролика. В экспериментах по культивированию дермальных фибробластов на политетрафтор этиленовой мембране, которая не резорбирует, не прозрачна, гидрофильна и имеет отрицательный заряд поверхности, продемонстрирована способность клеток нормально адгезировать, расти и образовывать монослой. Кроме того, в экспериментах in vivo на кроликах показана возможность восстановления роговицы глаза в результате трансплантации такой мембраны, заселенной клетками. Исследовано формирование тканеподобных структур in vitro для регенеративной терапии на основе трехмерных полилактидных матриц различной архитектуры, определены оптимальные условия подготовки матриц, предназначенных для заселения клетками хондрогенной дифференцировки. Выбраны условия заселения матриц клетками. Создана тканеинженерная конструкция на основе полилактида и фиброина шелка, заселенная аллогенными мезенхимными стволовыми клетками костного мозга кролика, способствующая восстановлению поврежденной ткани мочевого пузыря, а также формированию васкуляризации, сходной с нативной тканью. В экспериментах in vivo показано, что при имплантации конструкции, содержащей клетки костного мозга, отмечены начальные этапы восстановления мочевого пузыря. Проведены исследования, нацеленные на разработку новых, онкогенно-безопасных, клеточных продуктов на основе индуцированных плюрипотентных клеток, несущих искусственные синтетические хромосомы альфоидного типа (alphoid-ИХ). Впервые произведен перенос, показаны стабильное поддержание и экспрессия синтетической хромосомы альфоидного типа (alphoid-ИХ) в мышиных эмбриональных стволовых клетках и их дифференцированных потомках в составе тератом и химерных животных. Результаты открывают широкие возможности для генотерапии и ткане-заместительной терапии на основе alphoid-ИХ. Исследовали молекулярные механизмы реализации программы клеточного старения в эмбриональных и мезенхимных стволовых клетках, а также в опухолевых Ras-экспрессирующих клетках. Изучена связь процессов старения и эффекторных программ - аутофагии и программированной клеточной гибели. В качесте индукторов клеточного старения использовали различные генотоксические агенты, ингибиторы гистон-деацетилаз (HDIs) и соединения, генерирующие активные формы кислорода. В качестве модуляторов аутофагии и клеточной гибели использовали ингибиторы mTOR и MEK/ERK сигнальных путей. Установлено, что независимо от клеточной модели, реализация клеточного старения зависит от нормального функционирования p53/p21Waf1-зависимого тумор-супрессорного пути и от уровня содержания активных форм кислорода (АФК). Среди исследованных эффекторных программ клеточного старения можно отметить реализацию в Ras-экспрессирующих опухолевых клетках при действии HDIs особой неканонической формы аутофагии, которая протекает на фоне высокой активности киназы mTOR. При этом, поздние стадии процесса аутофагии в стареющих клетках нарушены, в частности отсутствует слияние фагосом и лизосом. Этот тип аутофагии не связан с деградацией белков и органелл. Для поддержания жизнеспособности Ras-экспрессирующих клеток, индуцированных к старению обработкой HDIs (NaBut), требуется постоянная высокая активность киназ MEK/ERK. Подавление активности MEK/ERK вызывает гибель стареющих клеток, что может быть использовано как перспективный подход для терапии опухолей. Дисфункция р53-p21Waf1 пути, выражающаяся в разобщении передачи сигнала от р53 к экспрессии p21Waf1, является необходимым условием для поддержания самообновления и плюрипотентности мышиных мЭСК, что отличает эмбриональные стволовые клетки, которые не стареют, от мезенхимных стволовых клеток эндометрия (МСКэ). МСКэ имеют более ограниченный потенциал к дифференцировке, способны останавливаться в G1 фазе клеточного цикла и претерпевают старение. Установено, что LIF/STAT3 сигнальный путь вносит свой вклад в поддержание самообновления и плюрипотентности мЭСК, в том числе благодаря подавлению активности киназы mTOR через MEK/ERK/TSC2. В отличие от мЭСК, МСКэ реализуют программу клеточного старения при окислительном стрессе, вызванном действием перекиси водорода, благодаря накоплению АФК. Показано, что развитие программы старения в МСКэ в ответ на окислительный стресс можно предотвратить путём пульсовой обработки клеток антиоксидантом N-ацетил-L-цистеином. Это наблюдение может иметь практическое значение при длительном культивировании МСКэ. Одна из задач проекта заключалась в поиске факторов, вызывающих гибель обычных и стволовых раковых клеток. В качестве мишеней были выбраны белок теплового шока 70 кДа (механизм его синтеза и шаперонная активность) и опухолевый супрессор р53, мутантные формы которого соответствуют клеткам с высоко агрессивным фенотипом. Разработаны тест-системы для поиска веществ, нацеленных на подавление обеих мишеней. Выявлены низкомолекулярные ингибиторы БТШ70, часть этих веществ подавляет экспрессию гена БТШ70, а другая – шаперонную активность данного белка. Поскольку известно, что раковые стволовые клетки (РСК) характеризуются нарушениями в работе онкосуппрессорного гена р53 и/или его сигнальных путей, то подавление его экспрессии должно повышать чувствительность РСК к генотоксическим препаратам. Мутантный р53 образовывает агрегаты в клетках, которые стабилизируются в присутствии БТШ. Нами была разработана клеточная тест-система для скрининга химических соединений-диссоциаторов агрегатов мутантного р53, которые будут испытаны на РСК в комбинации с генотоксическими препаратами. В рамках реализации проекта проведены подготовительные мероприятия по созданию инфраструктуры опытного производства ИНЦ РАН по выпуску клеточных продуктов медицинского назначения. Разработан Проект блока «чистых» помещений площадью 130 кв. м, класса чистоты D, в соответствии со стандартом GMP, с локальными зонами класса C. Получено положительное заключение международной экспертизы ("GMProject") на соответствие Проекта требованиям стандарта GMP на стадии квалификации DQ (Design Qualification). Закуплены технологические элементы модуля «чистых» помещений, изготовленные по индивидуальному проекту и в соответствии с международными стандартами и оборудование для автоматизированного культивирования клеток – система Compact SelectT TAP.

 

Публикации

1. Абкин С.В., Остроумова О.С., Комарова Е.Ю., Шевцов М.А., Мешалкина Д.А., Маргулис Б.А., Гужова И.В. Phloretin increases the anti-tumor efficacy of intratumorally delivered heat shock protein 70 kDa (HSP70) in a murine model of melanoma Cancer Immunology Immunotherapy, 65(1), 83-92. (год публикации - 2016).

2. Александрова О.И., Околов И.Н., Тахтаев Ю.В., Хорольская Ю.И., Хинтуба Т.С., Блинова М.И. Сравнительная оценка цитотоксичности антимикробных глазных капель. Офтальмологические ведомости, т.VIII, № 1: 89-98 (год публикации - 2015).

3. Александрова О.И., Хорольская Ю.В., Майчук Д.Ю, Блинова М.И. Исследование общей цитотоксичности антибиотиков аминогликозидного и фторхинолонового ряда на клеточных культурах. Вестник офтальмологии, № 5: 43-53 (год публикации - 2015).

4. Анацкая О.В., Эренпрейса Е.А., Никольский Н.Н., Виноградов А.Е. Попарно-перекрестное сравнение транскриптомов млекопитающих в исследовании влияния полиплоидии на активность экспрессии генных модулей развития Цитология, т. 57, № 12, с. 899-908 (год публикации - 2015).

5. Бильдюг Н.Б., Воронкина И.В., Смагина Л.В., Юдинцева Н.М., Пинаев Г.П. Матриксные металлопротеиназы в первичной культуре кардиомиоцитов Биохимия, том 80, вып. 10, с. 1596 – 1605 (год публикации - 2015).

6. Блинова М.И., Юдинцева Н.М., Вершевская Е.А., Джанаева З. Н., Астахов Ю.С., Томсон В.В., Потокин И.Л., Галибин О.В., Пинаев Г.П. Возможность культивирования фибробластов дермы человека на искусственной пористой мембране из политетрафторэтилена, предназначенной для склеропластики. Гены и клетки, т. Х, № 1 , с. 48 - 54 (год публикации - 2015).

7. Бородкина А.В., Шатрова А.Н., Дерябин П.И., Грюкова А.A., Никольский Н.Н., Бурова Е.Б. Tetraploidization or autophagy: the ultimate fate of senescent human endometrial stem cells under ATM or p53 inhibition. Cell Cycle, 15(1), 117-127. (год публикации - 2016).

8. Васильева Е., Шувалов О., Гарабаджи А., Мелино Г, Барлев Н. Genome-editing tools for stem cell biology Cell Death and Disease, 6: e1831 (год публикации - 2015).

9. Виноградов А.Е. Accelerated pathway evolution in mouse-like rodents involves cell Mammalian Genome, Volume 26, Issue 11, pp 609-618 (год публикации - 2015).

10. Виноградов А.Е. Consolidation of slow or fast but not moderately evolving genes at the level of pathways and processes. Gene, 561(1):30-34 (год публикации - 2015).

11. Гордеев С., Быкова Т., Зубова С., Мартынова М, Поспелов В., Поспелова Т. mTOR kinase inhibitor (pp242) induces mitophagy terminated by apoptotic cell death of E1A-Ras transformed cells Oncotarget, 6(42), 44905. (год публикации - 2015).

12. Гужова И., Шевцов М., Комарова Е., Мешалкина Д., Кисель Е., Маргулис Б. Targeting tumor cells with Hsp70 chaperone European Journal of Cancer, 13 (1): 20 (год публикации - 2015).

13. Дакс А.А., Петухов А.В., Шувалов О.Ю., Васильева Е.А., Мелино Д., Барлев Н.А., Федорова О.А. Онкосупрессор р63 регулирует экспрессию убиквитинлигазы Pirh2. Цитология, т. 57, № 12: 876-879 (год публикации - 2015).

14. Дерябин П.И., Бородкина А.В., Никольский Н.Н., Бурова Е.Б. Взаимное влияние р53/р21 и МАР-киназных сигнальных путей в эндометриальных стволовых клетках человека в условиях окислительного стресса. Цитология, 57(11): 788-795 (год публикации - 2015).

15. Домнина А.П., Новикова П.В., Фридлянская И.И., Шилина М.А., Зенин В.В., Никольский Н.Н. Индукция децидуальной дифференцировки в эндометриальных мезенхимных стволовых клетках. Цитология, т. 57, № 12, с. 880-884 (год публикации - 2015).

16. Евтеева И.Н., Старкова Т.Ю., Артемов А.В., Барлев Н.А. Применение коммерческого фирменного прибора DUAL GEL MODULE для двухмерного электрофореза в ПААГ Цитология, т. 57 № 11, стр. 838-842 (год публикации - 2015).

17. Зубова С.Г., Быкова Т.В. Регуляция mTOR сигнального пути в макрофагах при различных патологиях. Цитология, 57(11): 755-760 (год публикации - 2015).

18. Иготти М.В., Филиппова Е.А., Гнедина О.О., Светликова С.Б. Влияние ингибиторов гистоновых деацетилаз и роль Gadd45 в репарации ДНК. Цитология, 57(4): 247-253 (год публикации - 2015).

19. Кольцова А., Яковлева Т., Полянская Г. Derivation and maintaince of new human embryonic stem cell subline SC6-FF in allogenic feeder-free culture conditions. HUMAN GENE THERAPY, 26 (10):A90-A90 (год публикации - 2015).

20. Кольцова А.М., Зенин В.В., Яковлева Т.К., Полянская Г.Г. Характеристика новой линии мезенхимальных стволовых клеток, выделенных из эмбриональных стволовых клеток человека Цитология, том 57, № 11, с. 761-770 (год публикации - 2015).

21. Крылова Т.А., Мусорина А.С., Зенин В.В., Полянская Г.Г. Характеристика клеточных сфероидов, полученных из линий мезенхимных стволовых клеток, выделенных из костного мозга и зачатка конечности раннего эмбриона человека. Цитология, т. 57, № 7 480-490 (год публикации - 2015).

22. Лисковых М., Пономарцев С., Попова Е., Бадер М., Куприна Н., Ларионов В., Аленина Н., Томилин А. Stable maintenance of de novo assembled human artificial chromosomes in embryonic stem cells and their differentiated progeny in mice. Cell Cycle, 14(8):1268-1273 (год публикации - 2015).

23. Михайлова Е., Лазарев В., Никотина А., Маргулис Б, Гужова И. Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase augments the intercellular transmission and toxicity of polyglutamine aggregates in a cell model of Huntington disease. Journal of Neurochemistry, 136(5), 1052-1063. (год публикации - 2016).

24. Нащёкина Ю.,Веселова Т., Никонов П., Блинова М. The study of the effect of polylactide scaffold and bone marrow stromal cells on reparative bone formation of the defect in the rabbit's mandible. Human Gene Therapy, 26 (10):A84-A84 (год публикации - 2015).

25. Нащекина Ю.А., Б.А. Маргулис, С.К. Гордеев, М.И. Блинова, И.В. Гужова Использование наноалмазных композитов в качестве матриксов для культивирования фибробластов кожи человека Гены и клетки, т. Х, № 1, с. (год публикации - 2015).

26. Орлова Н., Виноградова Т., Муравцев А., Блам Н., Семенова Н., Юденцева Н., Нащёкина Ю., Блинова М., Шевцов М., Витовская М., Заболотных Н., Шейхов М. Application of allogeneic cells of different origin for bladder reconstruction. Human Gene Therapy, 26 (10):A85-A85 (год публикации - 2015).

27. Панюшев Н.В., Тентлер Д.Г. Альфа-актинины и сигнальные пути Цитология, т. 57, № 12, с. 862-867 (год публикации - 2015).

28. Петров Ю.П., Негуляев Ю.А., Цупкина Н.В. Особенности распластывания клеток NCTCклон 929 после пересева Цитология, т. 57, № 5, с. 370-378 (год публикации - 2015).

29. Суворова И., Гигораш Б., Чуйкин И., Поспелова Т., Поспелов В. G1 checkpoint is compromised in mouse ESCs due to functional uncoupling of p53-p21Waf1 signaling Cell Cycle, 15(1), 52-63. (год публикации - 2016).

30. Сударикова А.В., ... Amiloride-insensitive sodium channels are directly regulated by actin cytoskeleton dynamics in human lymphoma cells Biochemical and Biophysical Research Communications, 461 (1): 54-58 (год публикации - 2015).

31. Тимин Г.В., Лахина Ю.С., Гуляев Д.А., Толкунова Е.Н. Изучение происхождения глиом человека на клеточных линиях и образцах опухолей Цитология, т. 57, № 12, с. 893-898 (год публикации - 2015).

32. Фридлянская И., Алексенко Л., Никольский Н. Senescence as a general cellular response to stress: A mini-review Experimental Gerontology, 72: 124–128 (год публикации - 2015).

33. Черепкова М., Синёва Г., Поспелов В. Leukemia inhibitory factor (LIF) withdrawal activates mTOR signaling pathway in mouse embryonic stem cells through the MEK/ERK/TSC2 pathway Cell Death and Disease, 7(1), e2050. (год публикации - 2016).

34. Шатрова А., Бородкина А., Никольский Н., Бурова Е. Antioxidant-Dependent Prevention of H2O2-Induced Premature Senescence in Human Endometrial Stem Cells Cell Biology: Research & Therapy, 4: 2 (год публикации - 2015).

35. Шевцов М., Галибин О., Юдинцева Н., Иванова А., Потокин И., Блинова М., Питктн М. Porous titanium pylon seeded with autologous fibroblasts or mesenchymal stem cells (MSCs) for direct skeletal attachment of limb prostheses Human Gene Therapy, 26 (10):A84-A85 (год публикации - 2015).

36. Шевцов М., Николаев Б, Яковлева Л., Пар М., Марченко Я., Елисеев И., Добродумов А., Злобина О., Жахов А., Ищенко А., Питкин Е., Малтоф Г 70-kDa heat shock protein coated magnetic nanocarriers as a nanovaccine for induction of anti-tumor immune response in experimental glioma Journal of Controlled Release., 220 (Pt A): 329-340 (год публикации - 2015).

37. Шевцов М., Николаев Б., Рыжов В, Яковлева Л., Добродумов А., Марченко И., Маргулис Б., Питкин Е, Михрина А., Гужова И., Малтоф Г Detection of experimental myocardium infarction in rats by MRI using heat shock protein 70 conjugated superparamagnetic iron oxide nanoparticle Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine, 12(3), 611-621 (год публикации - 2016).

38. Шевцов М., Николаев Б., Яковлева Л., Добродумов А., Марченко Я., Маргулис Б., Гужова И. Immunotherapy of experimental glioblastoma with 70-kDa heat shock protein magnetic nanoparticles Human Gene Therapy, 26 (10):A57-A57 (год публикации - 2015).

39. Шевцов М., Смагина Л., Кудрявцева Т., Петленко С, Воронкина И G lu-Trp-ONa or its aGlu-Trp-ONa or its acylated analogue (R-Glu-Trp-ONa) administration enhances the wound healing in the model of chronic skin wounds in rabbits Drug Design, Development and Therapy, 2015:9 1717–1727 (год публикации - 2015).

40. Шилина М.А., Домнина А.П., Кожухарова И.В., Зенин В.В., Анисимов С.В., Никольский Н.Н., Гринчук Т.М. Характеристика культуры эндометриальных мезенхимных стволовых клеток, полученных от пациентки с аденомиозом. Цитология, т. 57, № 11, с. 771-779 (год публикации - 2015).

41. Шувалов О., Петухов А, Дакс А, Фёдоова О, Ермаков А, Мелино Г, Барлев НА. Current Genome Editing Tools in Gene Therapy: New Approaches to Treat Cancer Carrent Gene Therapy, 15 (5): 511-529 (год публикации - 2015).

42. Шувалов О.Ю., Федорова О.А., Петухов А.В., Дакс А.А., Васильва Е.А., Григорьева Т.А., Иванов Г.С., Барлев Н.А. Негативные регуляторы онкосупрессора Р53 в контексте направленной противоопухолевый терапии Цитология, т. 57, № 12, с. 847-854 (год публикации - 2015).

43. Юдинцева Н., Нащекина Ю., Блинова М, Шевцов М., Орлова Н., Виноградова Т., Муравьёв А. Application of allogenic bone marrow stromal cells on the urology Human Gene Therapy, 26 (10):A86-A86 (год публикации - 2015).


Аннотация результатов, полученных в 2016 году
В соответствии с целями и задачами проекта Института цитологии РАН в 2016 году были проведены фундаментальные исследования в области молекулярной и клеточной биологии стволовых клеток, сгруппированные в три основных направления проекта - «Стволовые клетки – основа клеточных технологий», «Эффекторные программы клеточного старения» и «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств». Работы выполнялись в соответствии с планом исследований по каждому направлению. Основные задачи направления «Стволовые клетки – основа клеточных технологий» связаны с исследованием генетических, регуляторных и метаболических характеристик стволовых клеток, образующих основу новых клеточных технологий, а также с разработкой клеточных продуктов на основе стволовых клеток и организацией опытного производства клеточных продуктов. Объектами проводимых исследований и материалом для разрабатываемых клеточных продуктов служат мультипотентные и плюрипотентные стволовые клетки человека. В рамках программы по исследованию мультипотентных мезенхимных стволовых клеток человека в 2016 году проводились работы по анализу генетической стабильности эндометриальных мезенхимных стволовых клеток человека в процессе их культивирования и под влиянием стрессовых воздействий. Геномный блок исследований включал 3 аналитических подхода: молекулярное кариотипирование, хромосомный анализ и полнотранскриптомное секвенирование клеток. Проведенный анализ показал, что обнаруженные после стрессовых воздействий или в процессе длительного (15 пассажей) культивирования клеток хромосомные аберрации не сопровождались изменением структуры ДНК на молекулярном уровне. Мониторинг функционального состояния этих клеток не выявил признаков злокачественной трансформации, для всех 14 исследуемых клеточных линий наблюдался эффект репликативного старения. Биоинформатический анализ данных полнотранскриптомного секвенирования потомков мезенхимных стволовых клеток, переживших тепловой шок, показал, что клетки-потомки имеют нормальный баланс активности модулей канцеронегеза и туморсупрессии, а также модулей пролиферации и старения. Исследование путей энергетического обмена подтверждает отсутствие в клетках-потомках эффекта Варбурга - метболической перестройки, характерной для онкогенной трансформации. В дополнение к геномному блоку исследований, в 2016 г. проводились исследования сигнальных и метаболических путей, поддерживающих функционал мезенхимных стволовых клеток в культуре. Одно из направлений работы было посвящено изучению ионных и мембранных механизмов клеточной сигнализации, в том числе кальций-зависимых сигнальных путей. В эндометриальных мезенхимных стволовых клетках, с помощью метода патч-кламп, идентифицированы механозависимые кальций-проницаемые каналы. Получены данные о функциональном сопряжении между механозависимыми кальциевыми каналами и кальций-зависимыми калиевыми каналами высокой проводимости. Сделан вывод о том, что локальные изменения концентрации внутриклеточного кальция могут являться функциональной связкой между внешними механическими воздействиями и различными кальций-зависимыми молекулами в стволовых клетках. Помимо работ, нацеленных на изучение функциональных свойств стволовых клеток в культуре, в план проекта на 2016 год были включены исследования по оценке корректирующего влияния стволовых клеток на экспериментальные патологии при трансплантации животным, моделирующим заболевания человека. На экспериментальных животных (крысах) разработана модель синдрома Ашермана, характеризующегося нарушением структуры и истончением эндометриальной ткани. Анализ частоты наступления беременности экспериментальных животных показал, что трансплантация эндометриальных стволовых клеток человека оказывает терапевтический эффект и позволяет преодолеть бесплодие животных, вызванное синдромом Ашермана. Полученные данные указывают на перспективность использования эндометриальных стволовых клеток для клинических испытаний с целью коррекции нарушений эндометрия и преодоления женского бесплодия. Проведенный в 2016 г. комплекс работ по изучению мезенхимных стволовых клеток эндометрия человека был направлен на расширение уже существующих возможностей по использованию клеточных технологий в клинике. В то же время, в рамках проекта были запланированы поисковые исследования, нацеленные на разработку принципиально новых, еще не существующих клеточных и генно-терапевтических технологий. В наибольшей степени это относится к комплексу работ с индуцированными плюрипотентными стволовыми (иПС) клетками человека. В рамках программы по исследованию возможности переноса нового поколения синтетических хромосом альфоидного типа (alphoid-ИХ) в иПСК человека, предложена модификация метода microcell-mediated chromosome transfer (ММСТ), которая в сравнении с традиционной увеличивает в 6 раз эффективность переноса alphoid-ИХ в различные клеточные линии. Значимой частью программы по исследованию иПСК является участие ИНЦ РАН в деятельности некоммерческой организации Global Alliance for iPSC Therapies (GAiT), одной из целей которой является создание международного «Гаплобанка». В рамках настоящего проекта в ИНЦ РАН запланировано получение линий иПСК от гомозиготных доноров в условиях, максимально приближенных к условиям GMP. В 2016 г. была отработана методика получения иПСК человека из мезенхимных стволовых клеток с использованием ростовых сред и реагентов, соответствующих стандартам GMP (Lonza). Проведен сравнительный анализ ростовых сред и реагентов разных производителей для эффективного репрограммирования клеток человека в условиях GMP. Кроме фундаментальных и поисковых исследований, в настоящем проекте предусмотрены задачи по разработке новых клеточных продуктов на основе стволовых клеток. В 2016 году были запланированы работы по созданию клеточного продукта для восстановления нарушенной целостности роговицы глаза и экспериментальная проверка регенерации ткани роговицы в условиях in vitro. Разработаны способы выделения, культивирования и криосохранения лимбальных стволовых клеток (ЛСК) эпителия роговицы глаза опытных животных (кроликов). Проверены условия культивирования ЛСК на амниотической мембране и матрице из коллагенового скаффолда, подготовлен материал для экспериментов in vivo на лабораторных животных. Работы по направлению «Эффекторные программы клеточного старения» направлены на анализ сигнальных путей, определяющих клеточное старение или клеточную гибель, а также путей, отвечающих за переключение между клеточными программами старения и гибели в стволовых и трансформированных клетках. Известно, что противоопухолевая терапия в зависимости от статуса раковых клеток способна вызвать их апоптотическую/аутофагическую гибель или старение. Индукция клеточного старения как эффективная противоопухолевая стратегия имеет определенные ограничения, т.к. стареющие (senescent) клетки, хотя и перестают делиться, сохраняют жизнеспособность и секреторный фенотип, который вызывает трансформацию окружающих клеток. Работы по проекту 2016 г. показали, что активность MEK/ERK сигнального пути является необходимой для сохранения жизнеспособности и поддержания гипертрофного, гиперсекреторного фенотипа стареющих трансформированных клеток. Установлено, что при подавлении активности MEK/ERK в стареющих клетках происходит переключение аутофагии с цитопротективной формы на цитотоксическую. Кроме изучения программ старения, аутофагии и гибели трансформированных клеток, проводилось исследование программы старения стволовых клеток человека. При анализе механизмов клеточного старения мезенхимальных стволовых клеток эндометрия человека было установлено, что уровень внутриклеточного кальция оказывает влияние на процесс Н2О2-индуцированного старения. Показано, что индукция старения сопровождается PLC/IP3/IP3R-зависимым выходом [Ca2+]i из эндоплазматического ретикулума. Хелатирование [Ca2+]i предотвращает развитие фенотипа старения и потерю пролиферативного потенциала в H2O2-стимулированных клетках. Поддержание пролиферации происходит благодаря отмене активации ответа на повреждение ДНК (DNA damage response, DDR) и последующей передачи сигнала на остановку клеточного цикла через p53/p21/Rb путь. Хелатирование кальция стимулирует аутофагию в Н2О2-обработанных клетках и позволяет предотвратить их преждевременное старение. Впервые показано, что вызванное окислительным стрессом увеличение [Ca2+]i опосредует прогрессию преждевременного старения стволовых клеток. Работы по направлению «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств» нацелены на разработку новых технологий противоопухолевой терапии, основанных на использовании ингибиторов молекулярных шаперонов. Основные задачи этого направления работ в 2016 г. состояли в выборе адекватной клеточной модели и эффективных шаперонных ингибиторов для испытания новых стратегий противоопухолевой терапии. С помощью генетических манипуляций на основе клеток рака молочной железы и рака кишечника созданы модели высоко-злокачественных клеток, обладающие высоким метастатическим потенциалом, дающие возможность наблюдать за ходом эпителиально-мезенхимального перехода. Проведен отбор эффективных шаперонных ингибиторов. Отбор проводился с использованием разработанных в ходе выполнения проекта тест-систем для высокопроизводительного скрининга. В процессе скрининга веществ и отбора лидерных соединений выявлены 3 вещества, модулирующие активность шаперонов БТШ70. Выбранные вещества были испытаны в сочетании с традиционно используемыми противоопухолевыми препаратами, и во всех случаях было обнаружено усиление противоракового действия препаратов - получено доказательство возможности развития новых видов сочетанной терапии рака с применением шаперонных ингибиторов.

 

Публикации

1. - РОССИЙСКИЕ УЧЁНЫЕ ВЫЯСНИЛИ НОВЫЙ АСПЕКТ БОЛЕЗНИ, РАСПРОСТРАНЯЮЩЕЙСЯ ПО КЛЕТКАМ СХОДНО С КОРОВЬИМ БЕШЕНСТВОМ STRF, - (год публикации - ).

2. - "Нобель" за самоедство Газета.ru, Алла Салькова, Павел Котляр 03.10.2016, 13:35 (год публикации - ).

3. - Клетка все переварит Российская газета, Российская газета - Федеральный выпуск №7091 (223) 03.10.2016 (год публикации - ).

4. - Чашка Петри: Почему температура тела человека именно 36,6 Фонтанка.ру, - (год публикации - ).

5. Безбородкина Н.Н., Честнова А.Ю., Воробьев М.Л., Кудрявцев Б.Н. Glycogen content in hepatocytes is related with their size in normal rat liver but not in cirrhotic one Cytometry, 89A, 4: 357-364 (год публикации - 2016).

6. Бородкина А.В., Шатрова А.Н., Дерябин П.И., Грюкова А.А., Абушик П.А., Антонов С.М., Никольский Н.Н., Бурова Е.Б. Calcium alterations signal either to senescence or to autophagy induction in stem cells upon oxidative stress Aging, 8(12): (год публикации - 2016).

7. Бородкина А.В., Шатрова А.Н., Никольский Н.Н., Бурова Е.Б. Роль Мар-киназы р38 в развитии стресс-индуцированного старения эндометриальных стволовых клеток человека Цитология, том 58, 6: 429–435 (год публикации - 2016).

8. Быкова Т.В., Зубова С.Г., Кочеткова Е.Ю., Поспелова Т.В. Хлороквин не отменяет гибель трансформантов EIA+cHa-Ras индуцированную ингибитором киназы mTOR Цитология, том 58, 12: 955–962 (год публикации - 2016).

9. Васкуез-Мартин А., Анацкая О.В., Жулиани А., Эренпрейза Е., Хуанг С., Салмина К., Инашкина И., Хуна А., Никольский Н.Н., Виноградов А.Е. Somatic polyploidy is associated with the upregulation of c-MYC interacting genes and EMT-like signature Oncotarget, 7, 46: 75235-75260 (год публикации - 2016).

10. Гин (Ермакова) И.И., Лутцева (Вершевская) Е.А., Воронкина И.В. Стабильность гелей на основе коллагена I типа и гиалуроновой кислоты. Цитология, 58, 6: 467-475 (год публикации - 2016).

11. Гужова И.В., Маргулис Б.А. HSP70-based anti-cancer immunotherapy Human Vaccines & Immunotherapeutics, 12 (10): 2529-2535 (год публикации - 2016).

12. Дакс А., Петухов А., Федорова О., Шувалов О., Меркулов В., Васильева Е., Антонов А., Барлев Н.А. E3 ubiquitin ligase Pirh2 enhances tumorigenic properties of human non-small cell lung carcinoma cells Genes & Cancer, - (год публикации - 2016).

13. Домнина А.П., Новикова П.В., Люблинская О.Г., Зенин В.В., Фридлянская И.И., Михайлов В.М., Никольский Н.Н. Mesenchymal stem cells with irreversibly arrested proliferation stimulate decidua development in rats Experimental and Therapeutic Medicine, 12, 4: 2447-2454 (год публикации - 2016).

14. Иготти М.В., Гнедина О.О., Светликова С.Б., Филиппова Е.А., Поспелов В.А. Бутират натрия усиливает антипролиферативное действие низких концентраций актиномицина Д Цитология, том 58, 10: 755–762 (год публикации - 2016).

15. Ковалько Н.Ю., Колобов К.А., Калинина М.В., Морозова Л.В., Шилова О.А., Блинова М.И. Биосовместимость нанокерамики на основе диоксида циркония с культивируемыми клетками Цитология, 58, 11: 891-896 (год публикации - 2016).

16. Коршак О.В., Сушилова Е.Н., Воскресенский М.А., Грозов Р.В., Комяков Б.К., Зарицкий А.Ю., Попов Б.В. Назально-люминальная дифференцирована эпителиальных клеток при раке предстательной железы сочетается с признаками эпителиальной-мезенхимального перехода и миграции эпителия в мезенхиму Урология, №5: 85-91 (год публикации - 2016).

17. Кочеткова Е.Ю., Блинова Г.И., Зубова С.Г., Быкова Т.В., Поспелов В.А., Поспелова Т.В. MEK/ERK-путь необходим для поддержания цитопротективной аутофагии после облучения трансформантов E1A+cHa-Ras Цитология, том 58, 12: 947–954 (год публикации - 2016).

18. Кошеверова В.В., Каменцева Р.С., Гончар И.В., Харченко М.В., Корнилова Е.С. Mobility of tethering factor EEA1 on endosomes is decreased upon stimulation of EGF receptor endocytosis in HeLa cells Biochemical and Biophysical Research Communications, 473, 1: 17-22 (год публикации - 2016).

19. Кошкин С., Данилова А., Раскин Г., Петров Н., Баженова О., О'Брайен С.Д., Томилин А., Толкунова Е. Primary cultures of human colon cancer as a model to study cancer stem cells Tumor Biology, 37, 9: 12833-12842 (год публикации - 2016).

20. Кошкин С.А., Иванова М.А., Тимин Г.В., Рыков И.В., Чистякова И.А., Толкунова Е.Н. Повышенная лекарственная устойчивость раковых стволовых клеток в условиях гипоксии Вестник Чувашского государственного педагогического университета им. И.Я. Яковлева, 4(92): 23-33 (год публикации - 2016).

21. Крылова Т.А., Мусорина А.С., Зении В.В., Кольцова А.М., Кропачева И.В., Турилова В.И., Яковлева Т.К., Полянская Г.Г. Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из ткани век взрослых доноров разного возраста Цитология, 58, 11: 850-862 (год публикации - 2016).

22. Кукушкин А.Н., Светликова С.Б., Поспелов В.А. Влияние ингибитора HDAC бутирата натрия на экспрессию репарационных генов Rad51 и XRCC5 в фибробластах линий mEras-Waf1+/+ и mEras-Waf1-/- Цитология, том 58, 12: 908–915 (год публикации - 2016).

23. Лазарев В.Ф., Никотина А.Д., Михайлова Е.Р., Нудлер У., Полоник С.Г., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Hsp70 chaperone rescues C6 rat glioblastoma cells from oxidative stress by sequestration of aggregating GAPDH Biochemical and Biophysical Research Communications, 470, 3: 766-771 (год публикации - 2016).

24. Лазарев В.Ф., Никотина А.Д., Семенюк П.И., Евстрафьева Д.Б., Михайлова Е.Р., Муронец В.И., Шевцов М.А., Толкачева А.В., Добродумов А.В., Шеварда А.Л., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Small molecules preventing GAPDH aggregation are therapeutically applicable in cell and rat models of oxidative stress Free Radical Biology and Medicine, 92: 29–38 (год публикации - 2016).

25. Лазарев В.Ф., Никотина А.Д., Семенюк П.И., Евстрафьева Д.Б., Михайлова Е.Р., Муронец В.И., Шевцов М.А., Толкачева А.В., Добродумов А.В., Шеварда А.Л., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Properties of substances inhibiting aggregation of oxidized GAPDH: Data on the interaction with the enzyme and the impact on its intracellular content. Data in Brief, 7: 524–528 (год публикации - 2016).

26. Люблинская О., Смирнова И., Пуговкина Н., Корниенко Ю., Зенин В., Никольский Н. Mesenchymal stem cell response to antioxidative stress Free Radical Biology and Medicine, 96 S30-S30 (год публикации - 2016).

27. Мартынова М.Г., Крылова Т.А., Быстрова О.А. Изменение ультраструктуры стволовых клеток в цикле монослой-сферы-монослой. Цитология, 58, 1: 16-22 (год публикации - 2016).

28. Мешалкина Д.А., Шевцов М.А., Добродумов А.В., Комарова Е.Ю., Воронкина И.В., Лазарев В.Ф., Маргулис Б.А., Гужова И.В. Knock-down of Hdj2/DNAJA1 co-chaperone results in an unexpected burst of tumorigenicity of C6 glioblastoma cells Oncotarget, 7, 16:  22050-22063 (год публикации - 2016).

29. Назаров И., Чеклиярова И., Рычков Г., Илатовский А.В., Крэйн-Робинсон К., Томилин А. AFM studies in diverse ionic environments of nucleosomes reconstituted on the 601 positioning sequence Biochimie, 121: 5-12 (год публикации - 2016).

30. Нащекина Ю.А., Никонов П.О., Юдинцева Н.М., Нащекин А.В., Лихачев А.И., Москалюк О.А., Юдин В.Е., Блинова М.И. Взаимодействие мезенхимальных клеток костного мозга с нативными волокнами фиброина шелка Цитология, 58, 11: 843-849 (год публикации - 2016).

31. Петров Н.С., Верещагина Н.А., Сушилова Е.Н., Кропотов А.В., Михеева Н.Ф., Попов Б.В. Продукт гена BMI1 - ключевой компонент семейства Polycomb - позитивно регулирует жировую дифференцировку мезенхимных стволовых клеток Цитология, 58(2): 83-90 (год публикации - 2016).

32. Петров Н.С., Воскресенский М.А., Грозов Р.В., Коршак О.В., Зарицкий А.Ю., Верещагина Н.А., Комяков Б.К., Попов Б.В. Маркеры клеток базального слоя эпителия предстательной железы являются эффективными индикаторами ее злокачественной трансформации. Цитология, 58, 7: 526–533 (год публикации - 2016).

33. Рычков Г.Н., Илатовский А.В., Назаров И., Швецов А., Лебедев Д., Конев А., Исаев-Иванов В., Онуфриев А.В. Partially assembled nucleosome structures at atomic detail Biochemical Journal, - (год публикации - 2016).

34. Салова А.В., Беляева Т.Н., Леонтьева Е.А., Злобина М.В., Харченко М.В., Корнилова Е.С. Quantum dots implementation as a label for analysis of early stages of EGF receptor endocytosis: a comparative study on cultured cells Oncotarget, 7, 5: 6029-6047 (год публикации - 2016).

35. Соколова А.В., Соколов Г.В., Михайлов В.М. Слабое комбинированное магнитное поле, настроенное на ион-параметрический резонанс для Ca2+, интенсифицирует синтез дистрофина в скелетных мышцах мышей mdx после клеточной терапии. Цитология, 58, 2: 150–155 (год публикации - 2016).

36. Тахтаев Ю.В., Хинтуба Т.С., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Александрова О.И., Блинова М.И. Количественная и качественная оценка цитотоксичности антибактериальных глазных капель фторхинолонового ряда in vitro Вестник образования и развития науки Российской академии естественных наук, 20(2): 83–90 (год публикации - 2016).

37. Цимоха А.С., Зайкова Ю.Я., Боттрилл А., Барлев Н.А. Extracellular Proteasomes Are Deficient in 19S Subunits as Revealed by iTRAQ Quantitative Proteomics. Journal of Cellular Physiology, 9999: 1-10 (год публикации - 2016).

38. Чубинский-Надеждин В.И., Васильева В.Ю., Пуговкина Н.А., Васильева И.О., Морачевская Е.А., Никольский Н.Н., Негуляев Ю.А. Local calcium signalling is mediated by mechanosensitive ion channels in mesenchymal stem cells Biochemical and Biophysical Research Communications, - (год публикации - 2016).

39. Шатрова А.Н., Митюшова Е.В., Васильева И.О., Аксенов Н.Д., Зенин В.В., Никольский Н.Н., Марахова И.И. Time-dependent regulation of IL-2R α-chain (CD25) expression by TCR signal strength and IL-2-induced STAT5 signaling in activated human blood T lymphocytes PLOS ONE, - (год публикации - 2016).

40. Шевцов М., Мультхофф Г. Immunological and Translational Aspects of NK Cell-Based Antitumor Immunotherapies. Frontiers in Immunology, 7: 492 (год публикации - 2016).

41. Шевцов М.А., Мультхофф Г. Recent developments of magnetic nanoparticles for theranostics of brain tumor Current Drug Metabolism, 17, Issues 8: 737 - 744 (год публикации - 2016).

42. Шевцов М.А., Парр М.А., Рыжов В.А., Земцова Е.Г., Арбенин А.Ю., Пономарева А.Н., Смирнов В.М., Мультхофф Г. Zero-valent Fe confined mesoporous silica nanocarriers (Fe(0) @ MCM-41) for targeting experimental orthotopic glioma in rats Scientific Reports, 6, Article number: 29247 (год публикации - 2016).

43. Шилина М.А., Гринчук Т.М., Никольский Н.Н. Оценка генетической стабильности эндометриальных мезенхимальных стволовых клеток человека методами морфологического и молекулярного кариотипирования Цитология, 58, 11: 825-831 (год публикации - 2016).

44. Штейн Г.И., Пантелеев В.Г., Кудрявцев Б.Н. Методические проблемы цифровой цитофотометрии Цитология, 58, 3: 234-242 (год публикации - 2016).

45. Юдинцева Н.М., Нащекина Ю.А., Блинова М.И., Орлова Н.В., Муравьев А.Н., Виноградова Т.И., Шейхов М.Г., Шапкова Е.Ю., Емельянников Д.В., Яблонский П.К., Самусенко И.А., Михрина А.Л., Пахомов А.В., Шевцов М.А. Experimental bladder regeneration using a poly-L-lactide/silk fibroin scaffold seeded with nanoparticle-labeled allogenic bone marrow stromal cells International Journal of Nanomedicine, 2016, 11: 4521—4533 (год публикации - 2016).


Аннотация результатов, полученных в 2017 году
Комплексная программа развития Института цитологии РАН (ИНЦ РАН) предусматривает повышение уровня фундаментальных и прикладных исследований Института в области клеточной биологии – повышение числа и рейтинга научных публикаций, укрепление и актуализацию материально-технической базы, развитие международной кооперации, усиление кадрового потенциала Института. Научная программа проекта включает 3 направления исследований: «Стволовые клетки – основа клеточных технологий», «Эффекторные программы клеточного старения» и «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств». По направлению «Стволовые клетки – основа клеточных технологий» в отчетном году выполнен комплекс фундаментальных и прикладных работ, нацеленных на изучение функциональных, регуляторных и метаболических характеристик мультипотентных и плюрипотентных стволовых клеток человека, а также на разработку клеточных продуктов и технологий на основе этих клеток для клинического применения. В рамках программы фундаментальных исследований в текущем году были продолжены работы по выявлению факторов, влияющих на процессы дифференцировки стволовых и де-дифференцировки соматических клеток. Доказана вовлеченность протеосом и иммунопротеосом, негистоновых хромосомных белков HMGB1/2 в процесс репрограммирования клеток, проанализирована роль транскрипционного фактора Oct1. Продолжены работы по изучению реакции мезенхимных стволовых клеток человека на стрессовые воздействия – проведен анализ данных полнотранскриптомного секвенирования потомков мезенхимных стволовых клеток эндометрия человека, переживших тепловой стресс. Полученные данные выявили снижение экспрессии генов, индуцирующих злокачественную трансформацию, усиление экспрессии онкосупрессоров и генов, участвующих в репарации ДНК, что указывает на онкогенную безопасность мезенхимных стволовых клеток при использовании в качестве трансплантационного материала. В рамках программы, нацеленной на создание клеточных продуктов для терапии различных заболеваний, были получены результаты, доказывающие эффективность применения клеточно-тканевых конструкций на основе стволовых клеток для коррекции ряда патологий. Разработана и опробована in vivo тканеинженерная конструкция для замещения дефекта стенки мочевого пузыря, представляющая собой скаффолд, заселенный аллогенными мезенхимными стволовыми клетками костного мозга лабораторных животных (кроликов). Доказано успешное применение in vivo скаффолдов и клеточно-тканевых конструкций с использованием стволовых клеток лимбальной зоны глаза для лечения модельной лимбальной недостаточности экспериментальных животных (кроликов). Разработан биомедицинский клеточный продукт на основе полилактида и мезенхимных стволовых клеток костного мозга для замещения поврежденной хрящевой ткани. Доказана эффективность применения трехмерных клеточных систем (сфероидов) на основе мезенхимных стволовых клеток эндометрия человека для коррекции модельного синдрома Ашермана и преодоления бесплодия экспериментальных животных (крыс). Разработаны клеточные тест-системы на основе клеток роговицы и конъюнктивы человека для скрининга офтальмологических лекарственных препаратов. Проведенные исследования токсичности и эффективности препаратов слёзозаместительной терапии продемонстрировали принципиальную возможность использования клеточных тест-систем для рациональной фармакотерапии глазных патологий. Разработана клеточная тест-система эндотелиальной дисфункции и проведена ее коммерциализация - доклиническое исследование факрмпрепарата по стандарту GLP. В рамках программы по разработке новых генно-инженерных подходов для терапии наследственных заболеваний проведены исследования по переносу альфоидных искусственных хромосом человека в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека с помощью нового ММСТ (microcell-mediated chromosome transfer) метода, с целью их использования в качестве векторов в ткане-заместительной генной терапии. FISH анализ показал, что искусственные хромосомы функционируют как независимые хромосомные единицы и клетки, несущие эти хромосомы, поддерживаются в течение множественных пассажей в культуре. По направлению «Эффекторные программы клеточного старения» были продолжены работы по изучению роли аутофагии в регуляции пролиферации и клеточной гибели опухолевых клеток. Установлено, что устойчивость Ras-трансформированных клеток к действию антипролиферативных агентов, ингибиторов киназ MEK/ERK и mTOR, обеспечивается АМРК-зависимой цитопротективной аутофагией, вызванной повреждением крист митохондрий. Активация аутофагии и ее селективной формы митофагии уничтожает поврежденные митохондрии и восстанавливает митохондриальный пул и жизнеспособность клеток, делая клетки толерантными к ингибиторам MEK/ERK и mTOR. Показано, что сочетанием ингибиторов MEK/ERK, а также ингибиторов mTOR, с агентами, индуцирующими процесс клеточного старения, удается подавить цитопротективную программу аутофагии и запустить программу апоптоза Ras-экспрессирующих клеток, что может быть использовано для выработки клинических стратегий по уничтожению Ras-экспрессирующих опухолей. Кроме того, доказана эффективность комбинированного применения агентов, индуцирующих старение трансформированных клеток (таких как ингибиторы гистондеацетилаз бутират натрия и Тубацин) с про-апоптотическими фармакологическими агентами (цитостатики колцемид и этопозид, а также ингибитора протеосом бортезомиба). По направлению «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств» в 2017 г. была продолжена разработка клеточных моделей, позволяющих исследовать влияние ингибитора активации транскрипционного фактора Hsf1 на процесс эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП). При использовании двух, различных по гистогенезу, клеточных линий установлено, что подавление Hsf1 приводит к снижению практически всех характеристик ЭМП, в том числе миграционной активности клеток. Проведенное исследование соотношения структура-активность (QSAR) у веществ, подавляющих активацию Hsf1, позволило выявить в группе карденолидов сразу несколько веществ-ингибиторов Hsf1. Кроме того, продолжена разработка новых подходов к терапии рака с использованием шаперонных ингибиторов, в частности ингибитора белков теплового шока (БТШ70). Для подавления активности БТШ70 были использованы производная колхицина АЕАС и пептидные фрагменты самого шаперона БТШ70, один из которых проявил противоопухолевую активность в комбинации с доксорубицином в клеточной и животной моделях рака. Установлено, что подавление функции шаперона производной колхицина АЕАС происходит благодаря специфичному связыванию с молекулой БТШ70, при этом, по данным молекулярного докинга и молекулярной динамики, АЕАС и пептид имеют близкие участки связывания на молекуле БТШ70. Продолжено изучение влияния индукторов синтеза БТШ на микроокружение вовлеченных в патогенез клеток. Проведен новый скрининг малых молекул-активаторов из разных коллекций, расширивший имеющуюся палитру потенциальных противоопухолевых препаратов. В качестве новой перспективной мишени противоопухолевой и нейропротективной терапии рассматривается также фермент глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (ГАФД). Проведен подбор молекул с высоким сродством к ГАФД, установлено, что одна из выявленных молекул способна подавлять агрегацию ГАФД в среде с клетками, имитирующими патогенез болезни Хантингтона, и сохранять жизнеспособность клеток. По результатам работ всех 3 направлений программы развития ИНЦ РАН в 2017 году опубликовано более 35 статей, среди которых 13 опубликовано в журналах первого квартиля (Q1), в том числе 5 статей с импакт-фактором выше 5. Важно отметить, что среди 6 статей с ИФ=3-4 опубликованы 2 работы, посвященные перспективам применения мезенхимных стволовых клеток в заместительной клеточной терапии. Следует отметить повышение числа публикаций коллектива в российских журналах медицинского профиля (Офтальмология, Туберкулез и болезни легких, Практическая медицина, Московский хирургический журнал и др.), в том числе в соавторстве с представителями клинической медицины, что демонстрирует востребованность результатов фундаментальных исследований ИНЦ РАН для практического использования в медицинской практике. Результаты исследований по проекту были широко представлены научной общественности. Всего в 2017 году участниками проекта было сделано 30 устных докладов на 22 международных и российских научных мероприятиях. В рамках развития международной кооперации Института цитологии РАН участниками проекта было заключено 8 научных Договоров и Соглашений на проведение совместных исследований, в том числе: Collaboration Agreement между ИНЦ РАН и University of Luxembourg (2017-2019), на разработку новых биосовместимых матриц для культивирования нейронов; Confidential disclosure Agreement о научном сотрудничестве в области молекулярных и клеточных технологий между ИНЦ РАН и Klinikum rechts der Isarder Technischen Universität München (Germany); Interinstitutional договор между ИНЦ РАН и Poly-Orth International (Sharon, MA, USA) для совместных исследований по имплантации титановых пилонов для восстановления целостности кости. Важным достижением является одобрение проведения работ на лабораторных животных в ИНЦ РАН (Foreign Ass. Number: F18-00380), в том числе в соответствии с международными правилами (Animal Welfare Assurance for Foreign Institutions, 2017-2022), Office of Laboratory Animal Welfare (OLAW) National Institutes of Health (Bethesda, USA). Значимой составляющей программы развития Института является укрепление материально-технической базы для повышения качества проводимых исследований. В 2017 году продолжена работа по обновлению и усовершенствованию парка высокотехнологичного оборудования. В текущем году закончена работа по созданию в ИНЦ РАН современного комплекса оборудования для проточной цитофлуриметрии, оснащенного линейкой много-лазерных приборов CytoFLEX Beckman Coulter, позволяющих проводить исследования с использованием широкого набора красителей и соответствующие самым строгим мировым требованиям. Проведено оснащение необходимым оборудованием Группы по разработке биосовместимых скаффолдов, что позволило интенсифицировать работу по созданию скаффолдов для экспериментальных разработок. Продолжены работы по оснащению биобанка, необходимого для хранения клеток человека, предназначенных для приготовления клеточных продуктов и применения в медицине. В 2017 году в ИНЦ РАН состоялось открытие Центра клеточных технологий, были закончены работы по организации опытного производства клеточных продуктов. Помещения Центра введены в эксплуатацию и аттестованы на соответствие классу чистоты ISO8 и ISO7, что полностью соответствует целям и задачам проекта. Начиная со второго квартала 2017 года, эксплуатация чистой зоны осуществляется в соответствии с требованиями нормативных документов. Введено в эксплуатацию закупленное ранее оборудование опытного производства. Проведены валидации основного технологического оборудования в соответствии со стандартами GMP: этапы валидации монтажа (IQ) и функционирования (OQ) инкубаторов, изоляторов, автоматической станции для культивирования клеток. Ведется отработка технологий культивирования клеток и производства биомедицинских клеточных продуктов в условиях опытного производства с применением автоматической станции для культивирования клеток. Продолжается работа по подготовке к аттестации опытного производства по стандарту GMP, которая планируется в 2018 году. Открытие Центра клеточных технологий ИНЦ РАН было приурочено к научно-практической конференции "Биомедицинские клеточные продукты - разработка, регистрация, производство" (18-19 мая 2017 г, ИНЦ РАН). Конференция стала одним из основных мероприятий в области клеточных медицинских технологий, в ней приняли участие более 150 делегатов из разных регионов России и ближнего зарубежья. Среди участников - разработчики биомедицинских клеточных продуктов (БМКП), специалисты по доклиническим и клиническим исследованиям БМКП, представители Министерства здравоохранения, Росздравнадзора, разработчики 180-ФЗ "Об обращении биомедицинских клеточных продуктах", представители фармотрасли. Проведение знаковой для отрасли конференции на базе ИНЦ РАН укрепило позиции организации в области регенеративной медицины и создания БМКП.

 

Публикации

1. - В Институте цитологии РАН открывается современный Центр клеточных технологий Телеканал Россия 1, Эфир программы Вести от 09.08.2017 (год публикации - ).

2. - В Институте цитологии РАН открылся Центр клеточных технологий мирового уровня уровня Официальный сайт ФАНО России, Раздел Новости. Сообщение от 19.05.2017 (год публикации - ).

3. - Язвой меньше. Развитие регенеративной медицины получило мощный импульс. Газета "Поиск", № 49(2017) (год публикации - ).

4. - В Петербурге начал работу новый центр клеточных технологий по стандартам GMP Интернет издание Pro/Hi-Tech, Статья от 19.05.2017 (год публикации - ).

5. - "Ё.Осуми – Нобелевская премия по физиологии или медицине". Природа, Природа. 2017, № 1: 77-81 (год публикации - ).

6. - В Институте цитологии РАН открыт Центр клеточных технологий мирового уровня Газета ОПТЭК Сегодня, № 85 от августа 2017г, стр. 4. (год публикации - ).

7. - Матрица науки. Банк стволовых клеток ТВ канал Санкт-Петербург, передача "Петербургский дневник", 25 мая в 18-00 (год публикации - ).

8. - В Институте цитологии РАН открылся Центр клеточных технологий мирового уровня Информационное агентство РИА Новости, РИА НАУКА 14:15 18.05.2017 (год публикации - ).

9. Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И. Оценка цитотоксичности слезозаместительных препаратов с использованием системы in vitro. Офтальмология, 14 (1): 59–66 (год публикации - 2017).

10. Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И. Влияние нестероидных противовоспалительных глазных капель на клетки эпителия роговицы и конъюнктивы человека в условиях in vitro. Офтальмология, 15 (3): 251–259 (год публикации - 2017).

11. Александрова О.И., Хорольская Ю.И., Околов И.Н., Дубовиков А.С., Безушко А.В., Чурашов С.В., Черныш В.Ф., Панова И.Е., Блинова М.И. Возможности клеточных технологий для регенерации роговицы. Гены и Клетки, 3 (12): 27 (год публикации - 2017).

12. Баженова О., Е.Толкунова, С.Кошкин, С.Малов, П.Томас, С.О"Брайен The Role of the Carcinoembryonic Antigen Receptor in Colorectal Cancer Progression J. Integrative Oncology, 2017, 6 (2) 1000192 (год публикации - 2017).

13. Безушко А.В., Дубовиков А.С., Куликов А.Н., Чурашов С.В., Черныш В.Ф., Блинова М.И., Александрова О.И., Суетов А.А., Гаврилюк И.О. Исследование возможности применения культивированных аутологичных лимбальных эпителиальных стволовых клеток на коллагеновом скаффолде для устранения лимбальной недостаточности в эксперименте. Практическая медицина, № 9 (110), т.2. С. 32-37 (год публикации - 2017).

14. Бильдюг Н. On the Problem of Cardiogenic Differentiation: Extracellular Matrix as an Emerging Clue. International Journal of Cardiovascular Research, 6:2 (год публикации - 2017).

15. Блинова М.И., Хотин М.Г., Михайлова Н.А. Роль фибробластов в регенерации кожной ткани при заживлении ран. Гены и Клетки, 3 (12): 45 (год публикации - 2017).

16. Блинова М.И., Хотин М.Г., Никольский Н.Н., Михайлова Н.А. Опытное производство биомедицинских клеточных продуктов по стандарту GMP – от постановки исследовательской задачи до серийного производства. Гены и Клетки, 3 (12): 256 (год публикации - 2017).

17. Бобков Д.Е., Кропачева И.В. Влияние лизофосфатидиловой кислоты на состав цитоплазматических белковых комплексов, содержащих миозин-9 и тропомиозин. Цитология, Т.59, № 2, С.125-132 (год публикации - 2017).

18. Бородкина А. В., Дерябин П. И., Грюкова А. А., Никольский Н. Н. Найти и уничтожить: идентификация и элиминация стареющих клеток. Биологические мембраны, 2018, 35(3) (год публикации - 2018).

19. Бородкина А.В., Дерябин П.И., Грюкова А.А., Никольский Н.Н. «Социальная жизнь» стареющих клеток: что такое SASP и зачем его изучать? Acta Naturae, 2018, 10(1): (год публикации - 2018).

20. Виноградов А.Е., Анацкая О.В. DNA helix: the importance of being AT-rich. Mammalian Genome, 28, 9-10: 455-464 (год публикации - 2017).

21. Виноградов А.Е., Шилина М.А., Анацкая О.В., Алексеенко Л.Л., Фридлянская И.И., Красненко А., Ким А., Коростин Д., Ильинский В., Эльмуратов А., Цыганов О., Гринчук Т.М., Никольский Н.Н. Molecular genetic analysis of human endometrial mesenchymal stem cells that survived sublethal heat shock. Stem Cell International, Article ID 2362630 (год публикации - 2017).

22. Гайдаш А.А., Чекан Н.М., Крутько В.К., Сердобинцев М.С., Михайлова Н.А., Блинова М.И., Мусская О.Н., Александрова С.А., Копелев П.Н., Казбанов В.В., Скроцкая К.В. Остеогенез на титановых нанотрубках, допированных аморфизированным гидроксиапатитом в условиях in vitro. Гены и Клетки, 3 (12): 163-164 (год публикации - 2017).

23. Грюкова А.А., А. Н. Шатрова, П. И. Дерябин, А. В. Бородкина, Н. А. Князев, Н. Н. Никольский, Е. Б. Бурова Модуляция фенотипических признаков старения стволовых эндометриальных клеток в условиях ингибирования mTOR и MAP-киназных сигнальных путей Цитология, 2017, 59(6): 410-420 (год публикации - 2017).

24. Карпович В.Б., Нащекина Ю.А., Никонов П.О., Юдинцева Н.М. Разработка методики для создания искусственного сосуда малого диаметра на основе полимерного скаффолда и стромальных клеток костного мозга. Гены и Клетки, 3 (12): 114 (год публикации - 2017).

25. Касьянова Е.С, Александрова С.А, Сердобинцев М.С, Блинова М.И. Жизнеспособность мезенхимных мультипотентных стромальных клеток при росте на биокерамическом материале «Биосит-Ср Элкор». Бюллетень инновационных технологий., Т. 1, № 4, с. 44 - 51 (год публикации - 2017).

26. Козлов К., Кошеверова В., Каменцева Р., Харченко М., Соколкова А., Корнилова Е., Самсонова М. Quantitative analysis of the heterogeneous population of endocytic vesicles. Journal of Bioinformatics and Computational Biology, Vol. 15, No. 02, 1750008 (год публикации - 2017).

27. Кольцова А. Phosphate buffered saline induce single cell dissociation, blebbing and cell death of human embrionic stem cells. FEBS Journal, 284, (Suppl. 1) 2017, P. 320-321 (год публикации - 2017).

28. Копелев П.В, Александрова С.А, Нащекина Ю.А, Блинова М.И. Разработка метода модификации полилактидных скаффолдов хондроитинсульфатом с целью создания тканеинженерных конструкций для восстановления хрящевой ткани. Бюллетень инновационных технологий., Т. 1, № 4, с. 39 - 43 (год публикации - 2017).

29. Копелев П.В., Александрова С.А., Нащекина Ю.А., Блинова М.И. Разработка биомедицинского клеточного продукта на основе полилактида и ММСК костного мозга для замещения поврежденной хрящевой ткани. Гены и Клетки, 3 (12): 127-128 (год публикации - 2017).

30. Копелев П.В., Нащекина Ю.А., Александрова С.А. Оценка жизнеспособности хондроцитов кролика при культивировании на полилактидных скаффолдах, предназначенных для тканевой инженерии хрящевой ткани. Бюллетень инновационных технологий., Т. 1, № 2, с. 31-35 (год публикации - 2017).

31. Коцлова А.А., Биниенко М.А., Юдинцева Н.М., Блинова М.И., Власов Т.Д., Давыденко В.В. Опыт применения дермального эквивалента в комплексном лечении синдрома диабетической стопы. Московский хирургический журнал, 5(51). С. 27-33 (год публикации - 2016).

32. Кочеткова Е.Ю., Блинова Г.И. , Мартынова М.Г., Быстрова О.А Поспелов . В.А., Поспелова Т.В. ПОДАВЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ MEk/ERk В RAS-ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ КЛЕТКАХ СТАРЕЮЩИХ ТРАНСФОРМАНТОВ ИНДУЦИРУЕТ АУТОФАГИЮ, ЗАВЕРШАЮЩУЮСЯ АПОПТОЗОМ Мини-симпозиум молекулярная медицина, - (год публикации - 2017).

33. Кочеткова Е.Ю., Блинова Г.И. , Мартынова М.Г., Быстрова О.А Поспелов . В.А., Поспелова Т.В. Подавление активности MEk/ERk в RAS-экспрессирующих стареющих трансформантах индуцирует аутофагию, завершающуюся апоптозом. Цитология, 2017, 59(11):767 (год публикации - 2017).

34. Кочеткова Е.Ю., Г.И.Блинова, О.А.Быстрова, М.Г.Мартынова, В.А.Поспелов, Т.В.Поспелова Targeted elimination of senescent Ras‐transformed cells by suppression of MEK/ERK pathway Aging, 2017, 9(11):2352-2374 (год публикации - 2017).

35. Кошкин С.А., Е. Н. Толкунова Роль рецептора ароматических углеводородов в канцерогенезе и поддержании стволового компонента опухоли толстой кишки Цитология, 2017, 59(12):820-825 (год публикации - 2017).

36. Лазарев В.Ф., Комарова Е.Ю., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Белки-интеракторы Hsp70 и их значение для противоопухолевой функции шаперона Успехи молекулярной онкологии, Том 4, №4, Приложение, стр 69 (год публикации - 2017).

37. Лазарев В.Ф., Михайлова Е.Р., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Possible function of molecular chaperones in diseases caused by propagating amyloid aggregates Frontiers in neuroscience, 11:277 (год публикации - 2017).

38. Лазарев В.Ф., Михайлова Е.Р., Дутышева Е.А., Суезов Р.В., Гужова И.В., Маргулис Б.А. A hydrocortisone derivatives binds to GAPDH and reduces the toxicity of extracellular polyglutamine-containing aggregates Biochem Biophys Res Commun, 487(3):723-727 (год публикации - 2017).

39. Лазарев В.Ф., Сверчинский Д., Михайлова Е.Р., Семенюк П.И., Комарова Е.Ю. Нисканен С.А., Никотина А.Д., Бураков А.В., Карцув В.Г., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Sensitizing tumor cells to conventional drugs% HSP70 chaperone inhibitors, their selection and application in cancer models Cell Death & Dis, - (год публикации - 2018).

40. Лазарев В.Ф., Сверчинский Д., Нисканен С.А., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Ингибиторы молекулярных шаперонов : ингструменты для поиска и противопухолевая активность Acta Naturae, Специальный выпуск, стр. 37 (год публикации - 2017).

41. Ломерт Е, Туроверова Л., Кригер Д, Аксенов Н, Никотина А.Д., Петухов А, Миттенберг А.Г., Панюшев Н., Хотин М., Волков К., Барлев Н., Тентлер Д. Coexpression of RelA/p65 and ACT4 induces apoptosis in non-small carcinoma cells Cell Cycle, - (год публикации - 2018).

42. Люблинская О.Г., Иванова Ю.С., Пуговкина Н.А., Кожухарова И.В., Ковалева З.В., Шатрова А.Н., Аксенов Н.Д., Зенин В.В., Каулин Ю.А., Гамалей И.А., Никольский Н.Н. Redox environment in stem and differentiated cells: A quantitative approach Redox Biology, 12:758-769 (год публикации - 2017).

43. Марченко Л.В., Гужова И.В. Участие шаперона Hsp70 в межклеточных взаимодействиях опухолевых клеток и макрофагами Успехи молекулярной онкологии, том 4 №4 Приложение, стр 132-133 (год публикации - 2017).

44. Михайлов В.М., Соколова А.В., Скрипкина Н.С., Каминская Е.В., Домнина А.П., Никольский Н.Н. Further characteristics of pregnant bone marrow cells action on rat development during early pregnancy. Journal of Genetic Syndromes & Gene Therapy, 8:316 (год публикации - 2017).

45. Михеева Н.Ф., Бутылин П.А., Заруцкий А.Ю., Попов Б.В. Снижение пролиферативной активности мезенхимных стволовых клеток человека в ходе долгосрочного культивирования не сопряжено с изменением их миграционных свойств Цитология, 59(12): 836-845 (год публикации - 2017).

46. Муравьев А.Н., Орлова Н.В., Виноградова Т.И., Юдинцева Н.М., Нащекина Ю.А., Блинова М.И., Лебедев А.А. Опыт трансплантации многокомпонентного композита, содержащего аллогенные мезенхимальные стволовые клетки в дефект стенки мочевого пузыря кролика. Гены и Клетки, 3 (12): 170 (год публикации - 2017).

47. Муравьев А.Н., Шейхов М.Г., Юдинцева Н.М., Виноградова Т.И. Экспериментальная трансплантация аллогенных мезенхимальных стволовых клеток для комплексного лечения туберкулеза мочевого пузыря. Гены и Клетки, 3 (12): 170-171 (год публикации - 2017).

48. Нащекина Ю., Блинова М. Hydrogen peroxide-induced degradation of type I collagen fibers and influence on cell function FEBS Journal, 284 (Suppl. 1) P. 302 (год публикации - 2017).

49. Нащекина Ю.А., Юдинцева Н.М., Никонов П.О., Александрова С.А., Смагина Л.В., Воронкина И.В., Шевцов М.А., Блинова М.И. Биомедицинские клеточные продукты на основе биодеградируемых полимеров и стромальных клеток для восстановительной хирургии костной ткани. Гены и клетки, 3 (12): 176 (год публикации - 2017).

50. Орлова Н.В., Виноградова Т.И., Юдинцева Н.М., Нащекина Ю.А., Шейхов М.Г., Яблонский П.К. Положительный опыт трансплантации многокомпонентного композита, содержащего аллогенные мезенхимальные стволовые клетки, после резекции стенки мочевого пузыря кролика. Туберкулез и болезни легких., 95 (6): 45-50 (год публикации - 2017).

51. Петров Ю.П., Цупкина Н.В. Сравнение формы мезенхимных стромальных клеток кролика в течение пяти пассажей после получения первичной культуры. Цитология., 59 (1): 62–68 (год публикации - 2017).

52. Петрова В.С., Барлев Н.А. Регуляция микроокружения опухоли факторами гипоксии HIF и белками семейства р53 Цитология, 59(4): 259-270 (год публикации - 2017).

53. Попов Б.В., Сутула П.И., Петров Н.Ы., Янг К.Дж. Preparation and characterization of the antibody recognizing AMACR inside its catalytic center International Journal of Oncology, - (год публикации - 2017).

54. Рычков Г.Н., Илатовский А.В., Назаров И.Б., Швецов А.В., Лебедев Д.В., Конев А.Ю., Исаев-Иванов В.В., Онуфриев А.В. Partially assembled nucleosome structures at atomic detail Biophysical Journal, 112(3):460-472 (год публикации - 2017).

55. Салова А.В., Беляева Т.Н., Леонтьева Е.А., Корнилова Е.С. EGF receptor lysosomal degradation is delayed in the cells stimulated with EGF-Quantum dot bioconjugate but earlier key events of endocyticdegradative pathway are similar to that of native EGF Oncotarget, 8(27):44335-44350 (год публикации - 2017).

56. Сверчинский Д.В., Лазарев В.Ф., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Модуляторы активности шаперона Hsp70 и их противоопухолевый потенциал Acta Naturae, Спецвыпуск, стр. 153-154 (год публикации - 2017).

57. Сверчинский Д.В., Лазарев В.Ф., Семенюк П.И., Миткевич В.А., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Peptide fragments of Hsp70 modulate its chaperone activity and sensitize tumor cells to anti-cancer drugs FEBS Letters, - (год публикации - 2017).

58. Синенко С.А. Proapoptotic function of deubiquitinase DUSP31 in Drosophila Oncotarget, 8:70452-70462 (год публикации - 2017).

59. Старкова Т., Поляничко А., Артамонова Т., Ходорковский, М., Костылева Е., Чихиржина Е., Томилин А. Post-translational modifications of linker histone H1 variants in mammals. Physical Biology., 14(1): 016005 (год публикации - 2017).

60. Тимин Г., Марченко Ю., Яковлева Л., Николаев Б., Рыжов В., Толкунова Е., Швецов М. Targeting brain tumor with mesenchymal stem cells in the experimental model of the orthotopic glioblastoma Neuro-Oncology, 2017, 19 (3), suppl_3, 65–66, (год публикации - 2017).

61. Чубинский-Надеждин В.И., Негуляев Ю.А., Морачевская Е.А. Simvastatin induced actin cytoskeleton disassembly in normal and transformed fibroblasts without affecting lipid raft integrity. Cell Biology International, 41:1020–1029 (год публикации - 2017).

62. Чубинский-Надеждин Владислав И., Васильева Валерия Ю., Пуговкина Наталья А., Васильева Ирина О., Морачевская Елена А., Никольский Николай Н., Негуляев Юрий А. Local calcium signalling is mediated by mechanosensitive ion channels in mesenchymal stem cells Biochemical and Biophysical Research Communications, 482: 563-568 (год публикации - 2017).

63. Шевцов М., Жао Л., Протцер У., Ван де Клюндерт Applicability of Metal Nanoparticles in Detection and Monitoring of Hepatitis B Virus Infection Viruses, 7(9) pii E193 (год публикации - 2017).

64. Шувалов О., Петухов А., Дакс А., Федорова О., Васильева Е., Барлев Н.А. One-carbon metabolism and nucleotide biosynthesis as attractive targets for anticancer therapy Oncotarget, 8(14):23955-23977 (год публикации - 2017).

65. Юдинцева Н.М., Боголюбова И.О., Муравьев А.Н., Шейхов М.Г., Виноградова Т.И., Соколович Е.Г., Самусенко И.А., Шевцов М.А. Application of the allogenic mesenchymal stem cells in the therapy of the bladder tuberculosis. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine., - (год публикации - 2017).

66. Юдинцева Н.М., Нащекина Ю.А., Блинова М.И., Смагина Л.В., Шевцов М.А., Воронкина И.В. Effects of the superparamagnetic iron oxide nanoparticles on the synthesis of the extracellular matrix proteins and their reorganization by the mesenchymal stem cells. FEBS Journal, 284 (Suppl. 1), P. 382 (год публикации - 2017).

67. Юдинцева Н.М., Нащекина Ю.А., Боголюбова И.О., Боголюбов Д.С., Воронкина И.В., Смагина Л.В., Блинова М.И., Муравьев А.Н., Орлова Н.В., Шевцов М.А. Оценка влияния наночастиц на свойства мезенхимных клеток костного мозга в условиях in vitro и их визуализация в условиях in vitro и in vivo. Гены и клетки, 3 (12): 275 (год публикации - 2017).


Аннотация результатов, полученных в 2018 году
Комплексная программа развития Института цитологии РАН (ИНЦ РАН) предусматривает повышение уровня фундаментальных и прикладных исследований Института в области клеточной биологии – повышение числа и рейтинга научных публикаций, укрепление и актуализацию материально-технической базы, развитие международной кооперации, усиление кадрового потенциала Института. Научная программа проекта включает 3 направления исследований: «Стволовые клетки – основа клеточных технологий», «Эффекторные программы клеточного старения» и «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств». Основная задача направления «Стволовые клетки – основа клеточных технологий» - создание фундаментальной базы для внедрения в медицинскую практику онкогенно-безопасных и эффективных клеточных продуктов на основе стволовых клеток. Объектами исследований служат мультипотентные и плюрипотентные стволовые клетки человека. В рамках программы по исследованию функциональных характеристик мультипотентных стволовых клеток проведен сравнительный анализ ключевых параметров эндометриальных мезенхимных стволовых клеток (эМСК) человека при культивировании в геометрии 2-D (монослой) и 3-D (сфероиды). Установлено, что при культивировании эМСК в сфероидах клетки не размножаются, сохраняют экспрессию поверхностных маркеров и дифференцировочный потенциал, характерный для монослойных культур, и обладают повышенной экспрессией плюрипотентных маркеров (Nanog и Sox-2).При исследовании регуляторных характеристик эМСК обнаружено, что эМСК, а также стволовые клетки жировой ткани человека экспрессируют большое количество рецептора эпидермального фактора роста (ЭФР), сравнимое с таковым в трансформированных клеточных линиях эпителиального происхождения. Обнаружено, что в культурах эМСК, после митогенной стимуляции ЭФР,в отличие от трансформированных клеток, наблюдается ярко выраженный пролиферативный ответ, наблюдается отличная от трансформированных клеток динамика активации MAP-киназы ERK1/2и динамика слияний и перемещений эндосом, несущих ЭФР-рецепторные комплексы. В рамках программы, нацеленной на создание клеточных продуктов для терапии различных заболеваний, были получены результаты, доказывающие эффективность применения клеточно-тканевых конструкций на основе стволовых клеток для коррекции ряда патологий. Отработаны методы создания биомедицинских клеточных продуктов для восстановления структурной и функциональной целостности поврежденных элементов глазной поверхности на основе синтетических полилактидныхскаффолдов, заселенных стволовыми клетками лимба. Получены, структурно охарактеризованы и опробованы invivo новые тонкие резорбируемые пористые плёнки на основе поли (D, L-лактид) и полиэтиленгликоля для культивирования и трансплантации кератиноцитов с целью создания клеточных продуктов, используемых для лечения ран и ожогов. Разработан и опробован invivo полимерный сосудистый протез на основе биосовместимых трубок из поликапролактона, предназначенный для реконструкции аорты. Проведены экспериментальные исследования восстановления кости экспериментальных животных (кроликов) в результате имплантации пористого титанового импланта с наноструктурным рельефом поверхности, заселенного остеобластами. В рамках программы по разработке подходов к генно- и тканезаместительной терапии, основанных на использовании индуцированных плюрипотентных клеток (иПСК) человека, несущих синтетические искусственные хромосомы альфоидного типа (alphoid-ИХ) проанализированы клоны иПСК человека (чиПСК), несущие alphoid-ИХ. Показано, что искусственные хромосомы функционируют как независимые хромосомные единицы, не встроены в хромосомы иПСК и не влияют на плюрипотентный статус клеток. Генно-инженерные подходы для лечения гемофилии и дисферлинопатии человека на основе иПСК, несущих alphoid-ИХ апробированы на мышиной модели. Программа работ по направлению «Эффекторные программы клеточного старения» включала исследования сигнальных путей в стареющих клетках. Одним из важных результатов стало обнаружение нового альтернативного механизма спасения клеток, который заключается в том, что при ингибировании mTOR в стареющих клетках активируется LC3-независимый процесс изоляции и выведения из клетки поврежденных митохондрий и лизосом, что приводит к спасению части клеточной популяции. Существенно, что ингибитор гистон-деацетилазы HDAC6, тубацин, является активатором аутофагии. В сочетании с ингибитором протеасом, бортезомибом, тубацин провоцирует апоптоз трансформированных мышиных фибробластов, что имеет перспективу использования препарата в химиотерапии. Известно, что киназаmTOR регулирует аутофагию через ингибирующее фосфорилирование Ulk1. Для изучения роли этого белка в поддержании уровня аутофагиив мышиных эмбриональных стволовых клетках (мЭСК)была получена постоянная клеточная линия с повышенной экспрессией гена ulk1. Как выяснилось, ингибирование mTOR снижает уровень фосфорилирования Ulk1 и усиливает аутофагию. По нашим данным, ресвератрол индуцирует аутофагию в мЭСК через путь AMPK- Ulk1, что приводит к ингибированию киназыmTOR. Таким образом удалось подтвердить участие белка Ulk1в аутофагии, и соответственно, в поддержании жизнеспособности клеток. Проведена работа по оптимизации условий трансфекции мезенхимных стволовых клеток эндометрия человека (СКЭ) коммерческой плазмидой IGFBP3 CRISPR/Cas9 КО с целью получения IGFBP3-нокаутных клеток. С использованием этих клеток показано, что IGFBP3 вносит вклад в индукцию преждевременного старения СКЭ, модулируя фенотип клеток, связанный со старением. Программа активации старения при воздействии IGFBP3 не включает DDR-зависимый путь и, как следствие, не вызывает арест клеточного цикла. Для того, чтобы старение сопровождалось блоком клеточного цикла (не только экспрессией маркера SA-betaGal), требуется взаимодействие IGFBP3 с другими факторами, например РА-1. По направлению «Трансформированные и раковые стволовые клетки как мишени для противоопухолевых средств» проводились работы по дальнейшему исследованию эффектов ингибиторов синтеза и функции шаперонов, разработанных процессе выполнения данного гранта. К наиболее интересным работам следует отнести изучение механизмов действия ингибитора регулятора протеотоксического стресса клеток HSF1, соединения CL-43. В этих исследованиях полной неожиданностью оказалась двойственная функция карденолида: он увеличивал активность HSF1 и, соответственно, синтез БТШ70, в нормальных клетках, например, фибробластах человека, тогда, как в раковых клетках подавлял эту активность доза-зависимым образом. Вещества, аналогичные CL-43, относятся к группе карденолидов, в которую попадают известные лекарства против сердечной недостаточности. Поэтому, если полученные нами данные подтвердятся, в будущем потребуется сосредоточиться на подробной характеристике свойств самого CL-43 и его аналогов с возможно более высокой противоопухолевой активностью. При этом станет большой удачей, если указанные аналоги окажутся в числе средств, разрешенных к использованию для терапии иных нозологий. Кроме анализа функции ингибиторов HSF1 мы вернулись к проблеме потенциального применения активаторов этого фактора в терапии распространенных патологий. В качестве модели одной из них, болезни Паркинсона, мы выбрали животных, которым в мозг вводили ингибитор протеасом, лактацистин. Подопытные крысы демонстрировали признаки клинической фазы болезни, массовую гибель нейронов, нарушения моторных функций, которые еще более ухудшались, когда с помощью новых технологий в мозге животных подавляли экспрессию БТШ70. В то же время инъекции вещества U-133 (производное эхинохрома), способного активировать HSF1, приводили к значительному терапевтическому эффекту. Работа проводилась совместно с сотрудниками Института эволюционной физиологии и биохимии РАН (рук. И.В.Екимова) и опубликована в журнале ExperimentalNeurology. В продолжение анализа функции молекулярных сепараторов мы изучили временно образующийся в апоптозных раковых клетках комплекс БТШ70 с каспазой-3; как известно, этот комплекс мешает продвижению программы апоптоза и снижает эффективность многих противоопухолевых препаратов. С помощью сотрудников Института биомедицинской химии РАН мы в базах данных PASS выявили вещество, которое способно регулировать активность обоих участников комплекса; по нашим данным это соединение, ВТ44, снижает шаперонную активность БТШ70, связывая белок, и влияет на способность шаперона подавлять процесс апоптоза, вызванного препаратом этопозида. По данным наших исследований ВТ44 действительно разрушает взаимодействие шаперона с каспазой и усиливает терапевтической эффектэтопозида. Результаты работы опубликованы в журнале Int J Mol Sci. Ссыли из сети Интернет о достижениях проекта: интервью телеканалу Россия http://russia.tv/video/show/brand_id/5402/episode_id/1531462/; интервью телеканалу Санкт-Петербург, передача “Петербургский дневник”, посвященная открытию центра клеточных технологий https://topspb.tv/programs/stories/463854/; интервью газете «Поиск» ноябрь 2017. (публикация декабрь 2017). СМИ об открытии Центра клеточных технологий и Научно-практической конференции "Биомедицинские клеточные продукты - разработка, регистрация, производство" (18-19 мая 2017 г., ИНЦ РАН, Санкт-Петербург): Телеканал Россия 1 http://russia.tv/video/show/brand_id/5402/episode_id/1531462/; Телеканал Санкт-Петербург, передача “Петербургский дневник” https://topspb.tv/programs/stories/463854/ Риа Новости «В Санкт-Петербурге открылся центр клеточных технологий мирового уровня» https://ria.ru/science/20170518/1494564207.html ФАНО России «В Институте цитологии РАН открылся Центр клеточных технологий мирового уровня» http://fano.gov.ru/ru/press-center/card/?id_4=38097 Российский научный фонд «В Институте цитологии РАН открылся Центр клеточных технологий мирового уровня» http://rscf.ru/ru/node/2320 РФФИ http://www.rfbr.ru/rffi/ru/science_news/o_2041558; Sciencepop О конференции ИНЦ РАН «Биомедицинские клеточные продукты — разработка, регистрация, производство» http://sciencepop.ru/konferentsiya-biomeditsinskie-kletochnye-produkty-razrabotka-registratsiya-proizvodstvo-18-19-maya/; Петербургский дневник «В Петербурге робот будет создавать банк стволовых клеток» https://www.spbdnevnik.ru/news/2017-05-18/v-peterburge-robot-budet-sozdavat-bank-stvolovykh-kletok/; NewForm https://newinform.com/57859-v-peterburge-otkryli-unikalnyi-centr-kletochnyh-tehnologii-mirovogo-urovnya; ДокторПитер http://doctorpiter.ru/articles/16959/; Агентство Медико-социальной информации http://riaami.ru/2017/05/v-institute-tsitologii-ran-otkryli-tsentr-kletochnyh-tehnologij/; PRO TI-TECH http://prohitech.ru/v-peterburge-nachal-rabotu-novyj-tsentr-kletochnyh-tehnologij-po-standartam-gmp/; ТВ канал Санкт-Петербург, https://topspb.tv/programs/stories/463854/; ОПТЭК http://www.optecgroup.com/news/celltechcener/?sphrase_id=127620; сайт РНФ (Лаборатории 360) https://www.sprgm.ru/ic-ran и другие.

 

Публикации

1. - Российские ученые смогли пробить брешь в защите раковых клеток МЕДВЕСТНИК, Наука (год публикации - ).

2. - Российские ученые смогли "пробить" брешь в защите раковых клеток Газета.ru, Наука (год публикации - ).

3. - «В Финляндии обсудили перспективы сотрудничества в области практической биомедицины» ФАНО России, 30.01.2018 12:02 Новости (год публикации - ).

4. - «Клетки надо культивировать» «Чердак» агентства ТАСС, Интервью с Натальей Михайловой, заведующей Центром клеточных технологий Института цитологии РАН (год публикации - ).

5. - Лаборатории 360 РНФ, Виртуальный тур по лабораториям, задействованным в реализации комплексной научной программы ИНЦ РАН, поддержанной грантом РНФ (год публикации - ).

6. - Российские ученые пробили защитную оболочку раковых клеток Dni24.com, Наука (год публикации - ).

7. - «Внутренний стволовой продукт: что мешает взлету медицинских клеточных технологий в России» VADEMECUM, Мединдустрия (год публикации - ).

8. Александрова О.И., Околов И.Н., Хорольская Ю.И., Панова И.Е., Блинова М.И. Оценка цитотоксичности in vitro как критерий рационального выбора слезозаместительных препаратов Офтальмология, 15 (2): 167-175 (год публикации - 2018).

9. Алексеенко Л.Л., Шилина М.А., Люблинская О.Г., Корниенко Ю.С., Анацкая О.В., Виноградов А.Е., Гринчук Т.М., Фридлянская И.И., Никольский Н.Н. Quiescent Human Mesenchymal Stem Cells Are More Resistant to Heat Stress than Cycling Cells Stem Cells International, - (год публикации - 2018).

10. Анацкая О.В., Эренпрейса Е.А., Вазкез-Мартин А., Гиулиани А., Салмина К., Никольский Н.Н., Виноградов А.Е. Влияние геномных дупликаций на активность сигнальных путей мультипотентности в тканях млекопитающих Цитология, 60(11):906-910 (год публикации - 2018).

11. Боголюбова И.О., Боголюбов Д.С., Юдинцева Н.М. Ультраструктура ядер мезенхимных стволовых клеток человека в процессе дифференцировки Цитология, 60(5): 373–380 (год публикации - 2018).

12. Булатов Э., Саярова Р., Мингалеева Р., Мифтахова Р., Гомзикова М., Игнатьев Ю., Петухов А., Давидович П., Ризванов А., Барлев Н.А. Insatin-Schiff base-coper (II) complex induces cell death in 53-positive tumors Cell Death Discovery, 4:103 (год публикации - 2018).

13. Быстрякова МА, Кошкин СА, Гаврилюков АВ,Толкунова ЕН Анализ прогностических маркеров аденокарциномы толстой кишки человека Цитология, 60(10): 768-776 (год публикации - 2018).

14. Васильева ИО, Решетникова ГФ, Шатрова, Цупкина НВ, Харченко МВ, Алексеенко ОО, Никольский НН, Бурова ЕБ Senescence-messaging secretome factors trigger premature senescence in human endometrium-derived stem cells Biochem Biophys Res Communications, 496(4):1162-1168 (год публикации - 2018).

15. Виноградов А.Е., Анацкая О.В. Gene Golden Age paradox and its partial solution. Genomics, - (год публикации - 2018).

16. Галочкина А.В., Болликанда Р.К., Зарубаев В.В., Тентлер Д.Г., Лаврентьева И.Н., Слита А.В., Сршккф Т., Кантевари С. Synthesis of novel derivatives of 7,8-dihydro-6H-imidazo[2,1-b][1,3]benzothiazol-5-one and their virus-inhibiting activity against influenza A virus Arch Pharm Chem Life Sci, 6 Dec 2018 Epub ahead of print (год публикации - 2018).

17. Горелова А.А., Муравьев А.Н., Виноградова Т.И., Горелов А.И., Юдинцева Н.М., Орлова Н.В., Нащекина Ю.А., Хотин М.Г., Лебедев А.А., Пешков Н.О., Яблонский П.К. Тканеинженерные технологии в реконструкции уретры Медицинский альянс, 3: 75–82 (год публикации - 2018).

18. Григораш ББ, Суворова ИИ, Поспелов ВА AICAR-зависимая активация киназы AMPK не сопровождается блоком G1/S в эмбриональных стволовых клетках мыши Молекулярная биология, 52(3): 419-429 (год публикации - 2018).

19. Грюкова А.А., Дерябин П.И., Сироткина М., Шатрова А.Н., Никольский Н.Н., Бородкина А.В. P38 MAPK inhibition prevents polybrene-induced senescence of human mesenchymal stem cells during viral transduction PLOS One, - (год публикации - 2018).

20. Гужова И.В. Chaperone as molecular target for oncological and neurological diseased Pathopysiology, 25:189-190 (год публикации - 2018).

21. Домнина А.П., Новикова П.В., Обидина Ю.В., Фридлянская И.И., Алексеенко Л.Л., Кожухарова И.В., Люблинская О.Г., Зенин В.В., Никольский Н.Н. Human mesenchymal stem cells in spheroids improve fertility in model animals with damaged endometrium. Stem Cell Research & Therapy, Том 9, Выпуск 1, Статья № 50 (год публикации - 2018).

22. Домнина А.П., Обидина Ю.В., Никольский Н.Н. Cвойства эндометриальных мезенхимных стволовых клеток после культивирования в сфероидах Цитология, Том 60, №10, с.797-800 (год публикации - 2018).

23. Екимова И.В., Плаксина Д.В., Пастухов Ю.Ф., Лапшина К.В., Лазарев В.Ф., Михайлова Е.Р., Полоник С.Г., Пани Б., Маргулис Б.А., Нудлер Е. New HSF1 inducer as a therapeutic agent in a rodent model of Parkinson's disease Exp Neurol, 306:199-208 (год публикации - 2018).

24. Земцова Е.Г., Юдинцева Н.М., Морозов П.Е., Валиев Р.З., Смирнов В.М., Шевцов М.А. Improved osseointegration properties of hierarchical micro/nanotopographic coatings fabricated on titanium implants International Journal of Nanomedicine, 13:2175—2188 (год публикации - 2018).

25. Иготти МВ, Гнедина ОО, Моршнева АС, Светликова СБ, Поспелов ВА p21Waf1 deficiency does not decrease DNA repair in E1A+cHa-Ras transformed cells by HDI sodium butyrate Biological Chemistry, 399(11): (год публикации - 2018).

26. Иготти МВ, Светликова СБ, Поспелов ВА Оверэкспрессия аденовирусного E1A сенсибилизирует E1a+Ras трансформированные клетки к действию ингибиторов HDAC Acta Naturae, 10(4):39 (год публикации - 2018).

27. Касьянова Е.С., Копелев П.В., Александрова С.А. Оценка влияния модификации коллагеном I типа поверхности остеозамещающего материала «Биосит-Ср Элкор» на жизнеспособность мезенхимных стромальных клеток костного мозга Бюллетень инновационных технологий, т. 2, 3(7):33-37 (год публикации - 2018).

28. Кожухарова И.В., Земелько В.И., Ковалева З.В., Алексеенко Л.Л., Люблинская О.Г., Никольский Н.Н. Therapeutic doses of doxorubicin induce premature senescence of human mesenchymal stem cells derived from menstrual blood, bone marrow and adipose tissue. International Journal of Hematology, Том 107, Выпуск 3, с.286-296 (год публикации - 2018).

29. Копелев П.В., Нащекина Ю.А., Александрова С.А. Сравнительный анализ трехмерных полилактидных скаффолдов различной пористости, предназначенных для восстановления хрящевой ткани Бюллетень инновационных технологий, т. 2, 3(7): 25-31 (год публикации - 2018).

30. Корниенко Ю.С., Смирнова И.С., Пуговкина Н.А., Иванова Ю.С., Шилина М.А., Гринчук Т.М., Шатрова А.Н., Аксенвов Н.Д., Зенин В.В., Никольский Н.Н., Люблинская О.Г. High doses of synthetic antioxidants induce premature senescence in cultivated mesenchymal stem cells Scientific Reports, - (год публикации - 2019).

31. Кочеткова ЕЮ, Блинова ГИ, Быстрова ОА, Мартынова МГ, Поспелов ВА, Поспелова ТВ Suppression of mTORC1 activity in senescent Ras-transformed cells neither restores autophagy nor abrogates apoptotic death caused by inhibition of MEK/ERK kinases Aging, 10(11): 3574-3589 (год публикации - 2018).

32. Кошеверова В.В., Литвинов И.К., Харченко М.В., Каменцева Р.С., Корнилова Е.С. Влияние детергентов на флуоресцентные свойства квантовых точек в эндосомах Российский физиологический журнал им. ИМ Сеченова, 104(6): 665-669 (год публикации - 2018).

33. Кси Н., Вихрова П., Анничьрико-Петруцелли М., Амелио И., Бароев Н., Найт РА, Мелино Дж. Integrin-β4 is a novel transcriptional target of TAp73 CELL CYCLE, 17(5): 589-594 (год публикации - 2018).

34. Кукушкин А.Н., Светликова СБ Ингибитор CAY10603 гистондеацетилазы HDAC6 вызывает G1/S блок клеточного цикла и способствует старению фибробластов, трансформированных онкогенами E1A и cHa-ras Цитология, 61(2): (год публикации - 2019).

35. Куликов А.Н., Чурашов С.В., Черныш В.Ф., Безушко А.В., Дубовиков А.С., Блинова М.И., Александрова О.И., Суетов А.А., Гаврилюк И.О., Хорольская Ю.И. Применение коллагенового скаффолда в качестве носителя культивированных аутологичных лимбальных эпителиальных клеток для устранения лимбальной недостаточности в эксперименте. Современные технологии в офтальмологии, 3(23):116-120 (год публикации - 2018).

36. Куликов А.Н., Чурашов С.В., Черныш В.Ф., Блинова М.И., Александрова О.И., Карпович В.В., Хорольская Ю.И. Современные подходы к проблеме выбора носителя для культивирования стволовых клеток роговицы в лечении лимбальной недостаточности Офтальмологические ведомости, 11(2): 48-56 (год публикации - 2018).

37. Лазарев В.Ф., Дутышева Е.А., Комарова Е.Ю., Гужова и.В., Маргулис Б.А. Hydrocortisone 21-hemisuccinate did not prevent exogenous GAPDH-induced apoptosis in human neuroblastoma cells. Data in Brief, 20: 899-902. (год публикации - 2018).

38. Лазарев В.Ф., Дутышева Е.А., Комарова Е.Ю., Михайлова Е.Р., Гужова И.В., Маргулис Б.А. GAPDH-targeted therapy - A new approach for secondary damage after traumatic brain injury on rats Biochem Biophys Res Commun, 501(4):1003-1008 (год публикации - 2018).

39. Лазарев В.Ф., Никотина А., Михайлова Е., Гужова И., Маргулис Б. Hsp70-GAPDH complex is potential targets for rat glioma therapy FEBS Open Bio, 8:321-322 (год публикации - 2018).

40. Леонова Т.С., Вакс А.А., Шувалов О.Ю. Петухов А.В., Васильева Е.А., Барлев Н.А., Федорова О.А. Ядерные рецепторы NR4А и их роль в поддержании клеточного гомеостаза и развитии заболеваний Цитология, 60(5): 330-337 (год публикации - 2018).

41. Лобов И., Михайлова Н. The Role of Dll4/Notch Signaling in Normal and Pathological Ocular Angiogenesis: Dll4 Controls Blood Vessel Sprouting and Vessel Remodeling in Normal and Pathological Conditions Journal of Ophthalmology, Vol. 2018, Article ID 3565292 (год публикации - 2018).

42. Люблинская О.Г., Антонов С.А., Гороховцев С.Г., Пуговкина Н.А., Корниенко Ю.С., Иванова Ю.С., Шатрова А.Н., Аксенов Н.Д., Зенин В.В., Никольский Н.Н. Flow cytometric HyPer-based assay for hydrogen peroxide. Free Radical Biology & Medicine, 128:40-49. (год публикации - 2018).

43. Марахова И.И., Домнина А.П., Шатрова А.Н., Бородкина А.В., Бурова Е.Б., Пуговкина Н.А., Земелько В.И., Никольский Н.Н. Proliferation-related changes in K+ content in human mesenchymal stem cells Scientific Reports, - (год публикации - 2018).

44. Марахова И.И., Шатрова А.Н., Виноградова Т.А., Домнина А.П., Земелько В.И., Пуговкина Н.А., Никольский Н.Н. Ионный гомеостаз культивируемых мезенхимных стволовых клеток человека. II. Изменения содержания калия, связанные с возрастом клеточной культуры Цитология, 60(12):967-982 (год публикации - 2018).

45. Маргулис Б. Prion-like intercellularly transmitted pathologies Pathopysiology, 25: 190-191 (год публикации - 2018).

46. Марченко Л.В., Никотина А.Д., Аксенов Н.Д., Смагина Л.В., Маргулис Б.А., Гужова И.В. Phenotypic characteristics of macrophages and tumor cells in coculture Cell and Tissue Biol, 12(5):351-358 (год публикации - 2018).

47. Моршнева А, Гнедина О, Светликова С, Поспелов В, Иготти М Time-dependent modulation of FoxO activity by HDAC inhibitor in oncogene-transformed E1A+Ras cells AIMS Genetics, 5(1): 41–5 (год публикации - 2018).

48. Назаров Д.В., Смирнов В., Земцова Е., Юдинцева Н., Шевцов М., Валиев Р. Enhanced osseointegrative properties of the ultrafine-grained titanium implants modified by the chemical etching and atomic layer deposition ACS Biomaterials Science & Engineering, 4 (9):3268–3281 (год публикации - 2018).

49. Нащекина Ю.А., Курдюкова К.Е., Зорин И.М., Дарвиш Д.М., Цобкалло Е.С., Блинова М.И., Билибин А.Ю. Synthesis of D,L-Lactide–ε-Caprolactone copolymers and preparation of films based on them Russian Journal of Applied Chemistry, 91(1): 113 – 120 (год публикации - 2018).

50. Нащекина Ю.А., Курдюкова К.Е., Зорин И.М., Михайлова Н.А., Билибин Ю. Spectrophotometric Evaluation of L-Lysine Concentrations in Water-Organic Solutions Technical Physics, 63(9):1341-1344 (год публикации - 2018).

51. Никотина А.Д., Колударова Л., Комарова Е.Ю., Михайлова Е.Р., Аксенов Н.Д., Суезов Р., Карцев В.Г., Маргулис Б.А., Гужова И.В. Discovery and optimization of cardenolides inhibiting HSF1 activation in human colon HCT-116 cancer cells Oncotarget, 9(43): 27268-27279 (год публикации - 2018).

52. Пати Р., Шевцов М., Сонаван А. Nanoparticle Vaccines Against Infectious Diseases Front Immunol, 9:2224 (год публикации - 2018).

53. Сверчинский Д., Лазарев В., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Peptide parts of Hsp70 chaperone as potential agents of anticancer combination therapy FEBS OPEN BIO, 8:337-337 (год публикации - 2018).

54. Сверчинский Д.В., Никотина А.Д., Комарова Е.Ю., Михайлова Е.Р., Флыенов Н.Д., Лазарев В.Ф., Митькевич В.А., Суезов Р.,Дружиловский Д.С., Поройков В.В., Маргулис Б.А., Гужова И.В. Etoposide-Induced Apoptosis in Cancer Cells Can Be Reinforced by an Uncoupled Link between Hsp70 and Caspase-3 Int J Mol Sci, 25;19(9). pii: E2519 (год публикации - 2018).

55. Скворцова Е.В., Синенко С.А., Томилин А.Н. Immortalized murine fibroblast cell lines are refractory to reprogramming to pluripotent state Oncotarget, 9 (81): 35241-35250 (год публикации - 2018).

56. Суворова ИИ, Князева АР, Поспелов ВА Resveratrol enhances pluripotency and induces autophagy in mouse embryonic stem cells Cell Death & Discovery, - (год публикации - 2018).

57. Суворова ИИ, Князева АР, Поспелов ВА Resveratrol-induced p53 activation is associated with autophagy in mouse embryonic stem cells Biochemical and Biophysical Research Communications, 503(3):2180-2185 (год публикации - 2018).

58. Терюкова Н.П., Малкова В.В, Сахенберг Е.И., Иванов В.И., Безбородкина Н.Н., Снопов С.А. On reprogramming of tumor cells metabolism: detection of glycogen in the cell lines of hepatocellular origin with various degrees of dedifferentiation. Cytotechnology, 70(2):879-890 (год публикации - 2018).

59. Шатрова А.Н., Виноградова Т.А., Домнина А.П., Земелько В.И., Пуговкина Н.А., Никольский Н.Н. Марахова И.И. Ионный гомеостаз культивируемых мезенхимных стволовых клеток человека. I. Изменения внутриклеточного содержания калия и натрия и потоков калия, связанные с плотностью клеточной культуры Цитология, 60(12):969-975 (год публикации - 2018).

60. Шевцов М., Жоу Я., Хачатрян В., Мультхоф Г., Гао Х. Recent advances in gold nanoformulations for cancer therapy Curr Drug Metabolism, 19(9):768-780 (год публикации - 2018).

61. Шевцов М.А., Николаев Б.П., Марченко Я., Яковлева Л., Скворцов Н., Мазур А., Толстой П., Рыжов В., Мультхоф Г. Targeting experimental orthotopic glioblastoma with chitosan-based super magnetic iron oxide nanoparticles (CD-DX-SPIONs) International Journal of Nanomedicine, 13:1471-1482 (год публикации - 2018).

62. Шевцов М.А., Юдинцева Н.М., Блинова М.И., Воронкина И.В., Суслов Д.Н., Галибин О.В., Гаврилов Д.В., Аккауи М., Райхцаум Г., Албул А.В., Питкин Е., Питкин М. Evaluation of the effect of physical vapor deposition (PVD) silver coating on resistance to infection in transdermal SBIP implants with deep porosity Journal of Biomedical Materials Research: Part B - Applied Biomaterials, 2018:00B:000–000 (год публикации - 2018).

63. Шилина М.А., Гринчук Т.М., Анацкая О.В., Виноградов А.Е., Алексеенко Л.Л., Эльмуратов А.Ю., Никольский Н.Н. Cytogenetic and Transcriptomic Analysis of Human Endometrial MSC Retaining Proliferative Activity after Sublethal Heat Shock. Cells, 7(11). pii: E184 (год публикации - 2018).

64. Шилина М.А., Ковалева З.В., Гринчук Т.М. Сравнительный цитогенетический анализ потомков эндометриальных мезенхимных стволовых клеток человека в культуре после теплового шока и рентгеновского облучения Цитология, 60(10):59-63 (год публикации - 2018).

65. Ярцева НМ, Быкова ТВ, Зубова СГ, Поспелов ВА, Поспелова ТВ Изменения признаков трансформированного фенотипа клеточных линий крысы, селектированных с помощью ингибитора mTOR-киназы рапамицина Цитология, 60(9):712-724 (год публикации - 2018).