КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ


Номер 19-75-10096

НазваниеРазработка способа объективной оценки состояния кровоснабжения, микроструктуры и жизнеспособности кишки методом мультимодальной оптической когерентной томографии в ходе хирургических операций

РуководительКиселева Елена Борисовна, Кандидат биологических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Приволжский исследовательский медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, Нижегородская обл

Период выполнения при поддержке РНФ 07.2019 - 06.2022  , продлен на 07.2022 - 06.2024. Карточка проекта продления (ссылка)

Конкурс№41 - Конкурс 2019 года «Проведение исследований научными группами под руководством молодых ученых» Президентской программы исследовательских проектов, реализуемых ведущими учеными, в том числе молодыми учеными.

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины, 05-602 - Физические методы медицинской диагностики. Томография

Ключевые словакросс-поляризационная оптическая когерентная томография; оптическая когерентная ангиография; алгоритмы обработки ОКТ-сигнала; абдоминальная хирургия; острая мезентериальная ишемия; острая интестинальная ишемия; жизнеспособная ткань; отек; воспаление; граница некроза; количественная оценка изображений; автофлуоресценция; эндогенные флуорофоры; FLIM

Код ГРНТИ76.13.25, 76.03.53


СтатусУспешно завершен


 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ


Аннотация
В Проекте предлагается сместить акценты приложения ММ ОКТ в сторону абдоминальной хирургии, а также апробировать флуоресцентный макроимиджинг эндогенной флуоресценции для визуализации необратимых изменений ткани кишки при интестинальной ишемии, что будет сделано впервые в мире. Актуальность выполнения проекта обусловлена следующими фактами: (1) Несмотря на общий прогресс экстренной абдоминальной и сосудистой хирургии, внедрение все более сложной диагностической аппаратуры, результаты лечения больных с острым нарушением интестинального кровообращения остаются неудовлетворительными. Летальность при остром тромбозе и эмболии брыжеечных сосудов является одной из самых высоких в абдоминальной хирургии, достигая 63-95%. Проблема диагностики и лечения ишемического поражения кишечника не менее остро встает при ущемлении кишки, травматических разрывах брыжейки, странгуляционной кишечной непроходимости. (2) Бурно развиваются новые высоко разрешающие методы медицинской визуализации, работающие в реальном времени, которые принципиально способны к решению выше обозначенных задач. Одним из лидеров в этом ряду является оптическая когерентная томография (ОКТ) – малоинвазивный, не требующих использования контрастных веществ метод визуализации структуры биологических тканей в реальном времени, уже занявший ведущее место среди оптических методов диагностики за счет быстроты получения и оценки изображений и наличия большого числа функций. ОКТ приборы позволяют получать изображения структуры тканей с разрешением до единиц микрометров на глубину до 1.5 мм, характеризовать их поляризационные свойства, визуализировать микроциркуляторное и лимфатическое русло, измерять жесткость тканей, и все эти модальности могут быть объединены в одном компактном и удобном в использовании устройстве. Другим новым перспективным методом функциональной визуализации биологических тканей является флуоресцентный имиджинг с временным разрешением (FLIM). Данный метод позволяет оценивать не только структуру объекта по интенсивности флуоресценции, но изменения конформации и микроокружения флуорофоров по времени затухания флуоресценции. Особы интерес с точки зрения медицинских приложений представляет регистрация эндогенной флуоресценции клеток и тканей, которая отражает целый спектр биохимических процессов. Возможность исследования автофлуоресценции объектов в макро-масштабе открывает перспективу использования данного метода для интраоперационного выявления границ патологических изменений. Применение FLIM-макроимиджинга эндогенных флуорофоров с временным разрешением сможет дать качественно новую информацию о состоянии кишечной стенки при развитии ишемии. Новизна поставленной в Проекте задачи обусловлена тем, что: - Кросс-поляризационная ОКТ и ОКТ-ангиография до сих пор пока не используются для оценки жизнеспособности кишки в ходе хирургических операций, поскольку ОКТ-ангиография находится на начальном этапе развития и преимущественно используется в офтальмологии и в дерматологии (для изучения ожогов, рубцов и рака кожи). - Впервые ММ ОКТ исследование кишки будет проводиться со стороны серозной оболочки кишки, а не со стороны слизистой оболочки, как это делалось ранее при эндоскопических исследованиях структуры кишки. В этом случае сосуды подслизистого слоя кишки, кровообращение по которым вносит наибольший вклад в кровоснабжение всей кишечной стенки и определяет исход ишемии, будут расположены на глубине 1-1.5 мм от поверхности зонда, что потребует подбора параметров режима ОКТ сканирования для обеспечения контролируемой компрессии кишки зондом, позволяющей исследовать состояние интрамуральной сосудистой сети по данным структуры субсерозных сосудов и тканей. - Впервые будут проведены in vivo измерения времени жизни флуоресценции эндогенных флуорофоров ишемизированной кишки с использованием конфокального FLIM-макроимиджинга. В процессе исследования будет охвачен практически весь видимый диапазон (от ультрафиолетового до желтого), что даст возможность сравнить и определить наиболее эффективный флуорофор(ы) в качестве маркера жизнеспособности ткани кишки при ишемии. В рамках Проекта будут получены результаты, имеющую мировую значимость и новизну: (1) Будет модифицирован способ визуализации сосудов по отдельным структурным кросс-секционным ОКТ изображениям, который будет устойчивым к движениям объекта. (2) Впервые в эксперименте на основе мониторинга ишемизированной кишки методом ММ ОКТ (кросс-поляризации и ангиографии) будет разработан способ определения состояния кровоснабжения, микроструктуры и границ некроза с верификацией методами флуоресцентной микроскопии и гистологического исследования. (3) Впервые в мире в рамках пилотного исследования метод ОКТ-ангиографии и кросс-поляризации будет применен при открытых хирургических операциях для изучения структурных изменений и функциональных нарушений в микроциркуляторном русле при ишемическом и реперфузионном повреждении кишки. (4) Впервые в мире FLIM-макроимиджинг эндогенной флуоресценции будет применен для выявления биохимических изменений в ишемизированной кишке по флуоресцентным характеристикам эндогенных флуорофоров с временным разрешением.

Ожидаемые результаты
В ходе выполнения проекта будут получены следующие основные результаты: (1) На основе экспериментальных данных будут разработаны ММ ОКТ критерии интраоперационного определения состояния кровоснабжения, микроструктуры и границ некроза в ишемизированной кишке при остром нарушении артериального и артериовенозного брыжеечного кровотока. (2) На основе экспериментальных данных будут разработаны ММ ОКТ критерии определения границ резекции кишки и условий восстановления ее непрерывности, эффективности перфузии в сохраненной после резекции кишке. (3) На основе экспериментальных данных будут разработаны ММ ОКТ критерии эффективности восстановления перфузии в ишемизированной кишке с использованием оригинальных реперфузионных методов лечения. (4) Будет усовершенствован алгоритм постобработки для визуализации кровеносных сосудов методом ММ ОКТ, работающий при значительных движениях объекта в процессе записи данных. (5) Будут разработаны новые алгоритмы численной обработки ММ ОКТ данных для быстрой и объективной оценки состояния тканей. (6) На основе результатов экспериментальных и пилотных клинических исследований будет разработана методика ММ ОКТ-мониторинга операций при острой ишемии тонкой кишки для сохранения участков кишки с функционирующим интрамуральным микроциркуляторным руслом и для снижения послеоперационных осложнений, обусловленных недостаточно радикальной или избыточно обширной резекцией кишечника. (7) Будет оценена возможность исследования жизнеспособности ткани кишки экспериментальных животных (крыс) при ишемии по флуоресценции собственных эндогенных флуорофоров. Ожидаемые научные результаты полностью отвечают условиям новизны и оригинальности и соответствуют мировому уровню исследований. Выполнение данного Проекта позволит приблизиться к решению сложных медицинских задач в абдоминальной хирургии на основе новых возможностей, открываемых мультимодальной ОКТ, включающей кросс-поляризационную ОКТ и ОКТ – ангиографию. Кроме того, в процессе выполнения Проекта будут получены ОКТ данные, в которых содержится информация о состоянии лимфатических сосудов нормальной и ишемизированной кишки, что может быть использовано в дальнейших исследованиях. Результаты представляют интерес для научно-исследовательских институтов, образовательных учреждений медико-биологического профиля и лечебных учреждений. Они могут быть использованы при проведении фундаментальных и прикладных НИР, направленных на повышение эффективности проведения хирургических вмешательств в абдоминальной хирургии. Основные результаты работы могут быть включены в соответствующие разделы спецкурсов и лекций курсов по хирургии, биомедицине и биофизике.


 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ


Аннотация результатов, полученных в 2019 году
Первый год выполнения проекта был посвящен в большей степени проведению экспериментальных исследований (на крысах) методом скоростной спектральной мультимодальной оптической когерентной томографии (ММ ОКТ) для in vivo оценки изменения интрамуральной микроциркуляции (ангиографический режим ОКТ или ОКА) и микроструктуры тканей (кросс-поляризационный режим ОКТ или КП ОКТ) при артериальной (окклюзия брыжеечной артерии) и артериовенозной (ущемление кишки с брыжеечными артериями и венами) острой ишемии тонкой кишки с верификацией процессов флуоресцентной микроскопией и гистологическим исследованием. Исследование проведено со стороны серозной оболочки. Выбранный транссерозный доступ, в отличие от эндоскопического трансмукозного, позволяет с максимальной скоростью прецизионно исследовать любой сегмент тонкой кишки на всем ее протяжении, что в наибольшей степени соответствует задачам абдоминальной хирургии. При этом интрамуральные сосуды, расположенные под серозной оболочкой и в подслизистом слое стенки кишки (их состояние является определяющим в развитии ишемии) легко доступны для изучения методом ММ ОКТ. Модели острой ишемии крыс использованы для понимания общих закономерностей изменений структуры слоев кишечной стенки и ее микроциркуляции при их in vivo визуализации методом ММ ОКТ для последующей экстраполяции в клинику. В соответствии с разработанным протоколом проведена 1-ая серия экспериментальных исследований (на крысах, n=35) методом ММ ОКТ для оценки интрамуральной микроциркуляции и микроструктуры тканей в норме (n=12), при артериовенозной (ущемление кишки с брыжеечными артериями и венами) (n=11) и артериальной (окклюзия брыжеечной артерии) (n=12) острой ишемии тонкой кишки с верификацией процессов флуоресцентной микроскопией и гистологическим исследованием. Объем полученных данных при острой артериовенозной/артериальной ишемии тонкой кишки составил 455/536 ММ ОКТ изображений, 32/36 флуоресцентных изображения, 220/240 гистологических препаратов. Результаты ММ ОКТ исследования кишечной стенки в норме представлены в статье (WoS), опубликованной по результатам исследований: Ryabkov M.G., et al. Trans-serosal multimodal optical coherence tomography for visualization of microstructure and blood circulation of the small intestine wall. Sovremennye tehnologii v medicine. 2020. 12(2): 56-64. doi: 10.17691/stm2020.12.2.07. http://stm-journal.ru/en/numbers/2020/2/1630/pdf. Было показано, что: 1) кишечная стенка визуализируется на всю толщину, до просвета кишки; 2) серозно-мышечный и слизисто-подслизистый слои хорошо дифференцируются на структурных КП ОКТ изображениях, что возможно благодаря наличию множества функционирующих кровеносных сосудов и специфическому кросс-рассеянию от соединительной ткани подслизистого слоя; 3) на ОКА изображениях наблюдаются многочисленные кровеносные сосуды разных диаметров, включая крупные парные сосуды (артерии и вены) и отходящие от них микрососуды, равномерно распределенные по изображению. Результаты ММ ОКТ исследования кишечной стенки при острой артериовенозной ишемии представлены в статьях (WoS), опубликованных по результатам исследований в 2020 году: Ryabkov M.G., et al. Trans-serosal multimodal optical coherence tomography for visualization of microstructure and blood circulation of the small intestine wall. Sovremennye tehnologii v medicine. 2020. 12(2): 56-64. doi: 10.17691/stm2020.12.2.07. http://stm-journal.ru/en/numbers/2020/2/1630/pdf.; Kiseleva E.B., et al. Observations of the bowel wall in the case of acute ischemia: optical coherence tomography, FLIM macro-imaging and histological analysis data. Proc SPIE. 11232, 112320M. doi: 10.1117/12.2550667. https://www.spiedigitallibrary.org/conference-proceedings-of-spie/11232/112320M/Observations-of-the-bowel-wall-in-the-case-of-acute/10.1117/12.2550667.short?SSO=1. После ущемления петли кишки КП ОКТ картина слоев ее стенки динамично изменялась: в области ворсинок пропадал характерный вертикальный рисунок, что вызвано как их прогрессирующим некрозом, так и исчезновением теней от кровеносных сосудов, что соответствовало уменьшению глубины визуализации ткани в кросс-канале, в просвете кишки визуализировались пузырьки газа, со временем начинала визуализироваться противоположная сторона кишечной стенки. Результаты соответствуют данным, полученным при гистологическом исследовании. Прекращение кровоснабжения сразу после ущемления кишки привело к заметному уменьшению числа визуализируемых кровеносных сосудов на ОКА изображениях, фон становился почти черным. Через 90 минут на всех ОКА изображениях ущемленной петли кишки наблюдались единичные обрывочные крупные артерии, признаки кровотока в подавляющем объеме микрососудистой сети отсутствовали. Это соответствовало картине, наблюдаемой в разные временные точки методом флуоресцентной микроскопии и подтверждено гистологическим исследованием. Результаты ММ ОКТ исследования кишечной стенки при острой мезентериальной ишемии показали, что по сравнению с кишкой до ишемии, структурные 2D и 3D КП ОКТ изображения с гистологически подтвержденным некрозом слизистого и подслизистого слоев характеризовались истончением стенки на кросс-изображении, наличием неровных, неоднородных структурных элементов в нижнем слое, прилежащем к просвету кишки, а в секторах с гистологически подтвержденным трансмуральным некрозом – ярким гетерогенным сигналом по всей толщине кишечной стенки. Визуальное сопоставление ОКА изображений в ишемизированной и интактной кишке показало, что окклюзия мезентериальной артерии в 40% сопровождалась уменьшением «разветвленности» сосудистой сети в сравнении с интактной кишкой, «обрывом» и выпадением части мелких кровеносных сосудов, что гистологически подтверждено спаданием стенок сосудов или наличием тромбов в кровеносных сосудах подслизистого и слизистого слоев с некрозом большинства ворсинок, в сосудах серозно-мышечного слоя серьезных нарушений микроциркуляции выявлено не было. При этом на ОКА изображениях кишки с трансмуральным некрозом или тотальным некрозом слизистой оболочки (60% секторов ишемизированной кишки) яркость фона, создаваемая густой сетью капилляров, значительно уменьшалась и была схожа с ОКА картиной при артериовенозной ишемии, однако крупные (диаметром порядка 90-200 мкм) парные сосуды сохранялись, что свидетельствует о сохранении функции притока и оттока крови. Помимо качественного анализа данных ММ ОКТ, сопоставления структурных изображений с гистологическими препаратами, ОКА изображений с флуоресцентной микроскопией, проведена их количественная оценка. На структурных КП ОКТ изображениях определены различия в общей толщине кишечной стенки и толщине слизисто-подслизистого и серозно-мышечного слоев для разных моделей ишемии в сравнении с интактной кишкой. По ОКА изображениям показаны статистически значимые различия в общей длине функционирующих кровеносных сосудов стенки кишки в норме и при интестинальной ишемии. Таким образом, анализ структуры кишечной стенки крыс методом ММ ОКТ в норме и при разных вариантах острой ишемии кишки подтвердил возможность визуализации и квантификации изменений в структуре слоев и состоянии функционирующих артериальных и венозных сосудов с локализацией на различной глубине: от относительно крупных субсерозных сосудов до артериол и венул ворсинок слизистой оболочки. В первый год выполнения проекта с помощью ММ ОКТ проведены пилотные клинические исследования (6 пациентов без ишемии кишки и 6 пациентов с острой интестинальной ишемией кишки), важные для понимания возможностей метода в клинических условиях, обозначен круг технических задач, решение которых в последующие годы реализации проекта позволит использовать метод с максимальной пользой. В общей сложности получено 170 трехмерных ОКТ изображений, проанализировано более 1200 двухмерных КП ОКТ изображений и 72 ангиограммы, 68 гистологических срезов тощей и подвздошной кишки. Дополнительно, при проведении ММ ОКТ исследования у пациентов с острой интестинальной ишемией удалось сравнить границы нежизнеспособной стенки кишки, определяемые традиционным (визаульно-пальпаторным) способом и ММ ОКТ методом. В итоге границы нежизнеспособных тканей и резекции кишки, определенные по данным ММ ОКТ, были уже, чем диагностированные традиционным способом. Методика и результаты интраоперационного исследования описаны в статье (WoS): Kiseleva E.B., et al. Intraoperative use of optical coherence angiography in ischemic bowel disease: a pilot study. Proc. SPIE 11457, 114570B. doi:10.1117/12.2559615. https://www.spiedigitallibrary.org/conference-proceedings-of-spie/11457/114570B/Intraoperative-use-of-optical-coherence-angiography-in-ischemic-bowel-disease/10.1117/12.2559615.short. В следующий год выполнения проекта будет продолжаться накопление клинических ММ ОКТ данных, будет проведен более подробный и детальный анализ как структурных, так и ангиоргафических ОКТ изображений. В рамках задачи разработки усовершенствованных способов постобработки ММ ОКТ данных для визуализации кровеносных сосудов с целью максимальной компенсации движений при работе в условиях операционной был разработан и апробирован алгоритм, позволяющий существенно снизить влияние движений, что выражается в уменьшении характерных полос на ангиографических изображениях. На основе проведенных экспериментальных исследований на животных и пилотных исследований на пациентах было установлено, что для безопасной и комфортной работы в условиях операционной и последующего эффективного анализа данных требуется усиление герметизации и повышение термостойкости рабочей части ММ ОКТ зонда для возможности его стерилизации и отказа от стерильных чехлов по нормам СанПиН 2.1.3.2630-10; целесообразна разработка способов атравматичной фиксации кишки относительно датчика; требуется доработка программного обеспечения: как программы записи ММ ОКТ данных, так и их просмотра (автоматическое сохранение двухмерных изображений по заданному алгоритму). В ходе реализации первого года выполнения проекта была проведена разработка методики регистрации эндогенной флуоресценции с временным разрешением методом FLIM-макроимиджинга в ткани кишки экспериментальных животных. Были выбраны следующие параметры для регистрации флуоресценции эндогенных флуорофоров в ткани кишки: возбуждение флуоресценции в однофотонном режиме на длине волны 375 нм и регистрация в диапазоне 435-485 нм, с мощностью 12 мВт; получены первые результаты по разнице метаболизма ишемизированных и нормальных тканей тонкой кишки, что носит новаторский характер. Показано, что изменение флуоресцентных параметров НАД(Ф)Н со стороны серозной оболочки кишки может быть использовано как критерий ответа внутренних слоев на ишемию, когда развивается некроз ворсинок и подслизистого слоя, но в поверхностных (серозном и мышечном слоях) некрозы не обнаруживаются. Результаты этой части исследований представлены в статье (WoS): Kiseleva E.B., et al. Observations of the bowel wall in the case of acute ischemia: optical coherence tomography, FLIM macro-imaging and histological analysis data. Proc SPIE. 11232, 112320M. doi: 10.1117/12.2550667. https://www.spiedigitallibrary.org/conference-proceedings-of-spie/11232/112320M/Observations-of-the-bowel-wall-in-the-case-of-acute/10.1117/12.2550667.short?SSO=1, опубликованной в рамках Проекта. Необходимо отметить, что транссерозное ММ ОКТ исследование кишечной стенки экспериментальных животных и пациентов также как и FLIM-макроимиджинг проведено впервые в мире.

 

Публикации

1. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Балеев М.С., Воробьев А.Н., Геликонов Г.В., Романов И.Н., Губаркова Е.В., Гладкова Н.Д. Intraoperative use of optical coherence angiography in ischemic bowel disease: a pilot study Proceedings of SPIE, 11457, Saratov Fall Meeting 2019: Optical and Nano-Technologies for Biology and Medicine, 114570B (год публикации - 2020) https://doi.org/10.1117/12.2559615

2. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Бедерина Е.Л., Ширманова М.В., Балеев М.С., Лукина М.М., Сироткина М.А., Чилипенок А.С., Бесчастнов В.В., Моисеев А.А., Загайнова Е.В., Гладкова Н.Д. Observations of the bowel wall in the case of acute ischemia: optical coherence tomography, FLIM macro-imaging and histological analysis data Proceedings of SPIE, 11232, Multimodal Biomedical Imaging XV, 112320M (год публикации - 2020) https://doi.org/10.1117/12.2550667

3. Рябков М.Г., Киселева Е.Б., Балеев М.С., Бедерина Е.Л., Сизов М.А., Воробьев А.Н., Моисеев А.А., Карабут М.М., Плеханова М.А., Гладкова Н.Д. Trans-serosal multimodal optical coherence tomography for visualization of microstructure and blood circulation of the small intestine wall Sovremennye tehnologii v medicine, 12(2): 56-64 (год публикации - 2020) https://doi.org/10.17691/stm2020.12.2.07

4. Рябков М.Г., Киселева Е.Б., Балеев М.С., Сироткина М.А., Сизов М.А., Моисеев А.А., Геликонов Г.В., Гладкова Н.Д. Оптическая когерентная ангиография в диагностике интрамуральной дисциркуляции при острой ишемии кишки СБОРНИК НАУЧНЫХ ТРУДОВ VI СЪЕЗДА БИОФИЗИКОВ РОССИИ, том 2, стр. 204 (год публикации - 2019) https://doi.org/10.31429/SbR6.2019.001


Аннотация результатов, полученных в 2020 году
Второй год выполнения проекта был посвящен как экспериментальным исследованиям (на крысах, кроликах и минипигах) с использованием метода скоростной спектральной мультимодальной оптической когерентной томографии (ММ ОКТ), так и анализу возможной экстраполяции полученных в экспериментах данных на пациентов с острой интестинальной артериальной и артериовенозной ишемией с учетом физиологических различий объектов исследования. Экспериментальная часть включала транссерозное применение ММ ОКТ: 1) для объективизации состояния микроциркуляции и структуры тонкой кишки при моделировании острой интестинальной ишемии с последующей резекцией нежизнеспособных участков и применением разных тактик хирургической обработки культи тонкой кишки: стомированием, обструктивной резекцией и шунтированием (объектом исследования служили крысы). На основании анализа комплекса данных: визуальных, о состоянии микроциркуляции и микроструктуры кишечной стенки in vivo, а также ex vivo (гистологическое исследование), можно утверждать, что хирургическая техника обработки культи кишки после ее экстренной резекции по поводу острой интестинальной ишемии существенно меняет состояние тканей в период до наложения отсроченного анастомоза. Наименее выраженные и наиболее сбалансированные изменения происходят в приводящем и отводящем отделах кишки в случае ее шунтирования по сравнению со стомированием и обструктивной резекцией. Однако для рекомендации шунтирования кишки в качестве хирургической техники для преимущественного применения необходима разработка надежных, безопасных и эффективных инструментов шунтирования. 2) для объективизации состояния микроциркуляции при сравнительной оценке эффективности традиционных и оригинальных способов восстановления перфузии в ишемизированной тонкой кишке (объектом исследования служили кролики). Традиционный способ регионарной терапии основан на внутриартериальной катетеризации магистральной артерии и инфузии антикоагулянтных и спазмолитических препаратов. Несмотря на распространенность в клинической практике, данный способ обладает рядом существенных недостатков и ограничений. За оригинальный способ восстановления перфузии в ишемизированной тонкой кишке пациентов мы взяли ранее разработанный участниками научного коллектива Проекта способ катетеризации артерии-аркады при острой интестинальной ишемии (патент РФ на изобретение № 2635486 от 13.11.2017), позволяющий осуществлять подведение спазмолитического раствора непосредственно к месту поврежденной кишки, увеличивая регионарную концентрацию лекарственных препаратов и, одновременно, объемную скорость кровотока в артериях, кровоснабжающих ишемизированные участки кишки. Результаты оптической когерентной ангиографии показали, что введение инфузионной среды и спазмолитического препарата в брыжеечную артерию-аркаду после моделирования острой артериальной ишемии сопровождалось существенным изменением/улучшением картины микроциркуляторного русла и количественных показателей оптической когерентной ангиографии (возвращением к норме) по сравнению с традиционным способом проведения терапии, где микроциркуляция и показатели остались на уровне ишемии тканей и по сравнению с состоянием без терапии, где микроциркуляция и показатели существенно снизились. Данные о состоянии интестинальной микроциркуляции, полученные in vivo, были подтверждены гистологическим исследованием. В результате данного этапа работ были разработаны критерии оптической когерентной ангиографии для оценки эффективности восстановления кровообращения в кишке при острой интестинальной ишемии, которые были успешно апробированы на пациентах. В текущем году были продолжены пилотные клинические ММ ОКТ исследования на пациентах с острой мезентериальной ишемией. На полученных структурных и ангиографических изображениях были подробно описаны признаки, характерные для нормальной, ишемизированной и некротизированной тонкой кишки человека. Учитывая большую толщину кишечной стенки человека по сравнению с экспериментальными животными (крысами, кроликами), ММ ОКТ критерии оценки жизнеспособности кишки, сформулированные на основе экспериментальных данных, были скорректированы. Было показано, что на структурных ОКТ изображениях кишечной стенки человека удается лучше наблюдать изменения в серозной и мышечной оболочках (межмышечный отек, изменения в лимфатических сосудах). В результате, предложена методика оценки жизнеспособности кишки методом ММ ОКТ, которая заключается в получении и анализе ММ ОКТ данных последовательно от зон визуально нежизнеспособных тканей к периферии и определения границ, где данные оптической когерентной ангиографии и кросс-поляризационной ОКТ свидетельствуют о нормальной микроциркуляции и ненарушенной структуре кишечной стенки. Дополнительно, проведен эксперимент на нормальной тонкой кишке минипигов, в ходе которого выявлены особенности визуализации крупных кровеносных сосудов с относительно высокими скоростями движения крови (200-500 мм/сек и выше) используемым в данной работе методом оптической когерентной ангиографии. Это позволит сделать шаг в направлении усовершенствования алгоритма для адекватной визуализации сеток кровеносных сосудов крупных лабораторных животных (минипигов) и пациентов в реальном времени, поскольку до настоящего момента система оптической когерентной ангиографии была «заточена» на выявление преимущественно микрокапиллярного звена с малыми скоростями движения крови (порядка 1-100 мм/сек). Достигнуты результаты в численном анализе структурных ММ ОКТ данных, полученных в экспериментальных исследованиях. Построение цветокодированных карт на основе расчета оптических коэффициентов (коэффициентов затухания) позволило создать задел для задачи быстрой и объективной оценки структурной составляющей тканей при возникновении ишемии, запланированной на 3 год выполнения Проекта. Также, в ходе реализации второго года выполнения Проекта было проведено in vivo исследование эндогенной флуоресценции с временным разрешением тканей тонкой кишки экспериментальных животных (крыс) в норме и при ишемии с целью оценки жизнеспособности ткани. Эндогенную флуоресценцию возбуждали с помощью пикосекундного лазера на длине волны 375 нм, детектировали в диапазоне 435-485 нм. В данном диапазоне детектируется преимущественно метаболический кофактор никотинамидадениндинуклеотид - НАД(Ф)Н. Проведен расчет двух параметров: средне-взвешенное время жизни флуоресценции tm и вклад короткой компоненты а1. Выявлены различия в метаболизме ишемизированных и нормальных тканей, а также получены первые результаты по влиянию хирургической техники (стомирование, обструктивная резекция и шунтирование) на метаболизм культи тонкой кишки при отсроченном наложении анастомоза, что носит новаторский характер. Основные результаты Проекта за 2020-2021 годы были представлены и обсуждены исполнителями Проекта на 1-ой международной и 5-ти российских конференциях (всего 6 докладов). По результатам Проекта за отчетный год опубликовано и принято к печати 2 статьи в изданиях, индексируемых в WoS, одна из них в журнале Q1; 1 - РИНЦ (было запланировано 3 статьи WoS или Scopus).

 

Публикации

1. Киселева Е., Рябков М., Балеев М., Бедерина Е., Шилягин П., Моисеев А., Бесчастнов В., Романов И., Геликонов Г., Гладкова Н. Prospects of Intraoperative Multimodal OCT Application in Patients with Acute Mesenteric Ischemia Diagnostics, Т. 11, № 4, p. 705 (год публикации - 2021) https://doi.org/10.3390/diagnostics11040705

2. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Сизов М.А., Бедерина Е.Л., Комарова А.Д., Моисеев А.А., Багрянцев М.В., Воробьев А.Н., Гладкова Н.Д. Effect of surgical technique on the microstructure and microcirculation of the small intestine stump during delayed anastomosis Sovremennye Tehnologii v Medicine, - (год публикации - 2021)

3. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Балеев М.С., Бедерина Е.Л., Моисеев А.А., Сироткина М.А., Гладкова Н.Д. Кросс-поляризационная ОКТ и ОКТ-ангиография для оценки жизнеспособности тонкой кишки при ее острой ишемии VII Троицкая конференция с международным участием "Медицинская физика" (ТКМФ-7). Сборник тезисов., с.138-139 (год публикации - 2020)


Аннотация результатов, полученных в 2021 году
Основной целью третьего года выполнения проекта была разработка способа временной атравматичной фиксации кишечной стенки к торцу ОКТ зонда для получения качественных сеток кровеносных сосудов. В противном случае множественные артефакты движения обесценивали функцию ангиографии (ОКА) - важной модальности мультимодальной (ММ) ОКТ системы при исследовании целевых объектов: крупных лабораторных животных и пациентов. В итоге, было сконструировано устройство и придуман способ его использования с ОКТ системой (вакуумный прижим) что в 9,5 раз повысило качество получаемых ОКА изображений и существенно сократило общее время проведения ММ ОКТ исследования (готовится заявка на изобретение). Несомненным преимуществом изобретения стала возможность проведения непрерывного мониторинга одной и той же области ткани, наблюдения за процессами угнетения/восстановления кровообращения при ишемии, терапии и прочих воздействиях, приводящих к нарушению исходного состояния интрамурального кровотока. Применение вакуумной фиксации тканей позволило получить ряд данных, которые можно считать новаторскими и уникальными в сфере применения ОКТ/ОКА для такого сложного объекта как кишечник. В частности, получены серии ОКА изображений (на тонкой кишке минипигов), демонстрирующие динамику снижения кровоснабжения участка ишемизированной кишки, а затем частичного восстановления кровотока за счет компенсации из сосудов-коллатералей смежных (не подвергнутых ишемии) участков тканей. Мониторинг одного и того же участка осуществлялся в течение 12-30 минут. В другой серии экспериментов (на тонкой кишке крыс) мониторинг за состоянием кровеносных сосудов методом ОКА проведен в течение 3ч после моделировании острой мезентериальной ишемии. Было установлено, что в деваскуляризированном секторе кишки с сохраненным коллатеральным кровотоком в течение первого часа ишемии значения показателя, отражающего средний диаметр сосудов, сократились на 9,2 % по сравнению с исходными значениями, что, вероятно, является отражением увеличения тонуса сосудистой стенки. Однако к 180 минуте наблюдения тенденция изменилась: площадь перфузируемого русла восстановилась, вместе с тем сократилась суммарная длина сосудистой сети, индекс диаметра сосудов превысил исходный уровень на 12,9 % (p=0,045). Расширен спектр состояний, приводящих к изменению интрамуральной микроциркуляции тонкой кишки: в экспериментах на минипигах с использованием разработанного вакуумного прижима методом ОКА показана динамика изменения микроциркуляции тонкой кишки на фоне применения адреналина и при нарушениях общей гемодинамики организма - при острой кровопотере вследствие травмы печени. Продолжены клинические ММ ОКТ исследования у пациентов, в том числе проведена апробация разработанного вакуумного устройства. Структурные и ангиографические данные получены во время операции по резекции нежизнеспособных тканей кишки, а затем с поверхности и изнутри кишечной стомы на разные сроки в послеоперационном периоде. Показано, что проведение ММ ОКТ исследования во время операции по резекции нежизнеспособных участков кишки помогает более точно определить границы жизнеспособных тканей одновременно по критериям сохраненной структуры и кровотока. Послеоперационный мониторинг стомированной кишки может быть полезным для принятия решения об оптимальных сроках повторной реконструктивной операции или о корректировке состава получаемой после операции терапии. В текущем году достигнуты положительные результаты в количественной обработке структурных ОКТ изображений, полученных как в экспериментальных, так и в клинических условиях. Построение цветокодированных карт на основе расчета коэффициента затухания позволило объективировать и ускорить послойную оценку тканей: верифицировать локализацию и распространенность некроза по слоям кишечной стенки, отличать отек и воспалительную реакцию ткани в состоянии ишемии. Проведено ex vivo исследование эндогенной флуоресценции с временным разрешением тканей тонкой кишки пациентов c мезентериальным тромбозом, Болезнью Крона и аденомами слепой кишки с целью апробации метода макро-FLIM для оценки метаболизма тканей кишки. Рассчитаны параметры времени жизни флуоресценции. Подобные исследования проведены для серозной и слизистой оболочек кишки впервые. Сверх поставленных задач, проведена адаптация лимфангиографии на основе ОКТ к новому для этого метода объекту – кишечной стенке лабораторных животных (кроликов). Проведенные пилотные экспериментальные исследования по одновременной визуализации кровеносных и лимфатических сосудов кишки при ее симпатический денервации выявили взаимозависимые изменения в функционировании обоих систем (и кровеносной, и лимфатической). Установлено, что в остром периоде после симпатической деиннервации кишки происходит сокращение количества визуализируемых кровеносных сосудов за счет выпадения артериол и капилляров из кровеносного русла, соответственно, изменяется (уменьшается) и количество (объемная плотность) визуализируемых лимфатических сосудов, поскольку их наполнение напрямую зависит от количества межтканевой жидкости. Мы считаем направление лимфангиографии на основе ОКТ перспективным для выяснения патогенеза хронического воспаления и мальабсорбции, возникающих у пациентов с нарушенной иннервацией кишечника. Заявленные на 3 год реализации Проекта задачи выполнены полностью и перевыполнены. Основные результаты Проекта за 2021-2022 годы были представлены и обсуждены исполнителями Проекта на 4-х международных и 1-ой российской конференции (всего 6 докладов). По результатам Проекта за отчетный год опубликовано и принято к печати 4 статьи: 3 - WoS и 1 - Scopus (было запланировано 4 статьи WoS или Scopus) и глава в книге «Мультимодальная оптическая когерентная томография в клинической медицине» (издательство ФИЗМАТЛИТ).

 

Публикации

1. Балеев М.С., Рябков М.Г., Киселева Е.Б., Матвеев Л.А., Моисеев А.А., Гладкова Н.Д., Зайцев В.Ю. Monitoring of blood and lymph circulation in the denervated small intestine based on multimodal optical coherence tomography data Proceedings of SPIE, Vol. 11968, 119680E (год публикации - 2022) https://doi.org/10.1117/12.2609247

2. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Балеев М.С., Сизов М.А., Моисеев А.А., Геликонов Г.В., Перетягин П.В., Воробьев А.Н., Гладкова Н.Д. Intestinal optical coherence tomography (angiography) imaging: a comparison between animal models and humans Proceedings of SPIE, Vol. 11949, 1194908 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.1117/12.2608405

3. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Моисеев А.А., Сизов М.А., Бедерина Е.Л., Коржиманова Ю.В., Геликонов Г.В., Геликонов В.М., Гладкова Н.Д. Attenuation coefficient for layer-by-layer assessment of the intestinal wall according to optical coherence tomography in acute ischemia Laser Physics Letters, - (год публикации - 2022)

4. Рябков М.Г., Сироткина М.А., Балеев М.С., Сизов М.А., Геликонов Г.В., Моисеев А.А., Гладкова Н.Д., Киселева Е.Б. Monitoring of the state of intramural intestinal vessels in acute mesenteric ischemia with optical coherence angiography Kazan medical journal, - (год публикации - 2022)

5. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Лукина М.М., Сизов М.А., Сачкова Д.А., Бедерина Е.Л., Багрянцев М.В., Щеславский В.И., Ширманова М.В. Метаболические изменения ткани кишечной стенки при острой мезентериальной ишемии НАУЧНЫЕ ТРУДЫ. Сборник тезисов докладов III Объединенного научного форума физиологов, биохимиков и молекулярных биологов, «Перо», Москва, Т.2, с. 291-292 (год публикации - 2021)

6. Рябков М.Г., Киселева Е.Б., Балеев М.С., Геликонов Г.В., Гладкова Н.Д. Интраоперационная оптическая когерентная томография при мезентериальной ишемии: успехи и проблемы в диагностике жизнеспособности кишки VII Съезд хирургов юга России с международным участием: сборник тезисов, с. 184 (год публикации - 2021)

7. Рябков М.Г., Киселева Е.Б., Балеев М.С., Сироткина М.А., Сизов М.А., Геликонов Г.В., Гладкова Н.Д. Оптическая когерентная томография в экстренной диагностике ишемии кишки: результаты, проблемы, перспективы 5-й съезд врачей неотложной медицины: вызовы современности и неотложная медицина (к 100-летию создания МОО НПО ВНМ и научно-практического Журнала им. Н.В. Склифосовского «Неотложная медицинская помощь»): материалы съезда, Т. 248. с. 139-141 (год публикации - 2021)

8. Рябков М.Г., Сизов М.А., Шилягин П.А., Перетягин П.В., Бедерина Е.Л., Моисеев А.А., Геликонов Г.В., Гладкова Н.Д., Киселева Е.Б. Local atraumatic fixation of the intestinal wall in the real-time artefact-free structural and angiographic transserous OCT imaging IEEE - Institute of Electrical and Electronics Engineers, - (год публикации - 2022)

9. Сизов М.А., Логинова М.М., Воробьёв А.Н., Бедерина Е.Л., Лукина М.М., Ширманова М.В., Киселева Е.Б. Влияние техники обработки культи кишки на микроциркуляцию и метаболизм в её тканях при мезентериальной ишемии VII Съезд хирургов юга России с международным участием: сборник тезисов, с. 189 (год публикации - 2021)

10. Сизов М.А., Рябков М.Г., Бедерина Е.Л., Моисеев А.А., Гладкова Н.Д., Киселева Е.Б. Применение мультимодальной оптической когерентной томографии для изучения состояния кишечной стенки при отсроченном наложении анастомоза Актуальные вопросы биологической физики и химии. БФФХ-2021: материалы XVI международной научной конференции, с. 168 (год публикации - 2021)

11. Киселева Е.Б., Рябков М.Г., Балеев М.С., Сизов М.А., Бедерина Е.Л., Моисеев А.А., Геликонов Г.В., Гладкова Н.Д. Острая мезентериальная ишемия тонкой кишки: поиск границ жизнеспособных тканей Мультимодальная оптическая когерентная томография в клинической медицине, ФИЗМАТЛИТ, Москва, с. 242-261 (год публикации - 2022)


Возможность практического использования результатов
Научные результаты, полученные в ходе реализации Проекта, полностью отвечают условиям новизны и оригинальности и соответствуют мировому уровню исследований. Выполнение данного Проекта позволило приблизиться к решению сложных медицинских задач в абдоминальной хирургии, а именно, интраоперационной диагностике границ жизнеспособных тканей кишки одновременно по критериям сохраненной структуры и кровотока, используя новые возможности, открываемых мультимодальной (ММ) ОКТ, включающей кросс-поляризационную и ангиографическую модальности. Кроме того, в процессе выполнения Проекта получены ОКТ данные о состоянии лимфатических сосудов нормальной и деиннервированной кишки, что может быть использовано в дальнейших исследованиях. ММ ОКТ является перспективной технологией импортозамещения: она удобна в использовании, мобильна, компактна, неинвазивна и безопасна. Изобретенный в ходе выполнения Проекта способ локальной атравматичной фиксации кишечной стенки во время получения ММ ОКТ данных позволил решить проблему стабилизации объекта исследования и получать качественные данные о кровообращении и структуре почти 100% случаев. ММ ОКТ система прошла клиническую апробацию и в случае получения регистрационного удостоверения может быть широко внедрена в медицинские центры и городские клинические больницы для использования в ходе различных хирургических операций на кишечнике и в послеоперационном мониторинге состояния кишечной стенки пациентов.