Аннотация результатов, полученных в 2021 году
В ходе реализации проекта по разработке новых антибактериальных препаратов показано, что главную роль в генерации сероводорода у бактерий S.aureus и P.aeruginosa играет фермент CSE. В результате проведенного виртуального скрининга (SBVS) отобрано три потенциальных ингибитора фермента CSE: NL1, NL2 и NL3. Ингибиторы NL1, NL2 и NL3 подавляют способность бактерий S.aureus и P.aeruginosa генерировать H2S и существенным образом увеличивают чувствительность этих бактерий к действию антибиотика гентамицина. На мышиных моделях продемонстрировано, что комбинация антибиотика гентамицина с ингибитором NL1 увеличивает выживаемость зараженных сепсисом мышей и снижает титр бактерий P.aeruginosa при легочной инфекции. Показано, что обработка бактерий ингибитором NL1 существенно снижает долю персистеров в популяции бактерий S.aureus и P.aeruginosaа и подавляет формирование биопленок у бактерий P.aeruginosa. Таким образом, исследованные свойства ингибиторов NL1, NL2 и NL3 позволяют заключить, что они действуют как высоко активные антибактериальные препараты усиливающие токсический эффект традиционных антибиотиков (Shatalin K. et al. 2021). Впервые показано, что обработка нематод C. elegans антиоксидантами глутатионом и N-ацетилцистеином не приводит к сокращению продолжительности их жизни. Транскриптомный анализ нематод подверженных действию антиоксидантов выявил около 1400 генов, экспрессия которых подавляется глутатионом и N-ацетилцистеином. Они относятся к двум основным группам, одна из которых находится под контролем глобального регулятора Daf-16 (38% от всех генов), а другая – под контролем SKN-1 (40%). Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что хотя антиоксиданты защищают организмы от действия экзогенных активных форм кислорода, их добавление в избыточных концентрациях приводит к сокращению продолжительности жизни нематод C. elegans (Gusarov I. et al 2021). Охарактеризован редокс-статус и жизнеспособность клеток E.coli с измененным уровнем GmhA (ген lpcA) при делеции и оверэкспресии ферментов окислительного и неокислительного пентозофосфатного пути. Фермент неокислительного пути трансальдолаза кодируется генами talA и talB. Обнаружено, что оверэкспресия talB полностью нивелирует характерное для штамма c делецией ∆lpcA возрастание внутриклеточных тиолов, не влияя при этом на уровень АФК. Совместная оверэкспрессия talA/talB и lpcA несколько повышает уровень тиолов, сниженный вследствие оверэкспресии lpcA, приближая его к контрольному значению, при этом вызывая повышение уровня АФК в данных клетках. В клетках с оверэкспрессией lpcA делеция ∆talA не влияет на уровень тиолов и на жизнеспособность клеток, хотя и вызывает повышение уровня АФК. В то же время делеция ∆talB в клетках с оверэкспрессией lpcA несколько снижает уровень тиолов, не влияя ни на АФК, ни на жизнеспособность клеток. В качестве фермента окислительного пути была выбрана пиридин-нуклеотид трансгидрогеназа (ген udhA). Делеция ∆udhA не влияет на возрастание уровня внутриклеточных тиолов, вызванных делецией ∆lpcA. При этом уровень АФК в клетках с совместной делецией возрастает в 2 раза по сравнению с клетками с делецией ∆lpcA, и процент мертвых клеток в популяции возрастает более чем в 2,5 раза. Оверэкспрессия ∆udhA в клетках с делецией ∆lpcA приводит к такому же возрастанию уровня внутриклеточных тиолов, как и в клетках с делецией ∆lpcA, однако уровень АФК в клетках с совместной делецией возрастает в 4 раза по сравнению с клетками с делецией ∆lpcA, а процент мертвых клеток возрастает более чем в 3 раза. Показано, что в исследуемом диапазоне температур (5-37 °С) реакция связывания цинка является энтропийно-выгодной, что отражает уход из раствора части гидрофобных групп белка из раствора при образовании комплекса. Установлено, что связывание цинка приводит к незначительному изменению площади поверхности доступной растворителю, которая составляет 37-55 Å2. На основе гаплоидного штамма Candida glabrata HTL получены и охарактеризованы мутантные штаммы с делециями генов CgRPN4 и CgPDR1. Секвенированы геномы штаммов рода Bacillus, выделенных на МКС. По данным предварительного анализа штаммы относятся к видам Bacillus subtilis, Bacillus paralicheniformis и Bacillus safensis. В данной работе на основе структурных данных, полученных с помощью криоэлектронной микроскопии с высоким разрешением для элонгационного комплекса с ppGpp, мы получили штаммы E. coli c новыми мутациями, исключающими связывание ppGpp в специфическом «кармане» РНК-полимеразы между субъединицами beta’, alfa и omega. Аминокислотные замены в этом сайте ведут к значительному увеличению чувствительности клеток к генотоксичным агентам и ультрафиолету, однако практически не затрагивают строгий ответ клетки при аминокислотном голодании. Напротив, нарушения во втором сайте связывания ppGpp, образуемым РНК-полимеразой и фактором DksA, существенно дерегулируют инициацию транскрипции во время строгого ответа. Таким образом, ppGpp связывается с РНК-полимеразой в сайтах с различными функциями в инициации и элонгации транскрипции, важными для строгого ответа клетки и сопряженной репарации ДНК, соответственно. В качестве объекта исследований использовали полученные нами на предыдущем этапе трансформированные линии мух-дрозофил, содержащие одиночные и двойные делеции генов (CBS, CSE и MST), отвечающих за продукцию сероводорода. Было показано, что делеция гена CBS и, в большей степени, двойная делеция генов CBS и CSE вызывают задержку в созревании яичников и откладку эмбрионов у имаго в первые дни после вылупления. Изучали также влияния делеций этих генов, на различные стадии онтогенеза дрозофилы и на плодовитость. Были выявлены статистически значимые различия в откладке эмбрионов и в последующем формировании куколок между мухами разных генотипов (p<0.001). Так, кроме задержки в откладке эмбрионов у линий с делецией гена CBS (1 день) и у двойных трансформантов (2-3 дня) было выявлено удлинение времени развития от стадии эмбриона до куколки. Были также выявлены статистически значимые различия в фертильности, между мухами разных генотипов (p<0.001) и возрастов (p<0.001). Для выявления изменений в возможных сигнальных путях, связанных с процессами оогенеза у изучаемых линий с делециями нами были получены транскриптомные библиотеки из яичников четырехдневных девственных самок из этих линий. GO анализ показал значительное снижение в уровне экспрессии ряда групп генов во всех библиотеках, особенно в случае библиотек, полученных из линий с двойными делециями. С другой стороны, у линий с делециями наблюдается повышение уровня экспрессии групп генов, относящимся к следующим GO термам: организация внеклеточного матрикса, формирование вителлиновой мембраны, химический гомеостаз, метилирование, сигнализация TORC1. В исследованиях на крысиной модели хронического воспаления лёгких, индуцируемого ЛПС, исследовали превентивное действие «медленного» донора сероводорода (GYY4137). Данное исследование не выявило ярко выраженных превентивных эффектов GYY4137 при ЛПС-индуцированном воспалении легких у крыс. Не исключено, что это связано с выбранной дозой, а также схемой введения тестируемого вещества. На следующем этапе планируется изменить режим введения препарата (GYY4137), а также использовать другой дешёвый и безвредный донор сероводорода (тиосульфат натрия). Для изучения роли генов, продуцирующих сероводород при стрессе и в процессе старения, использовали трансформированные линии Drosophila melanogaster, содержащие одиночные и двойные делеции генов CBS и CSE, которые были получены ранее с использованием системы CRISPR/Cas9 (Zatsepina et al., 2020). Была проведена оценка взаимосвязи между разными компонентами приспособленности, такими как продолжительность жизни, локомоторная активность и стрессоустойчивость и выявленными ранее изменениями на уровне полногеномного транскриптома (Zatsepina et al., 2020). В большинстве проведенных тестов делеции CSE привели к положительным эффектам на приспособленность, в то время как делеции CBS к отрицательным, что на уровне транскриптома сопровождалось более выраженным окислительным стрессом в случае делеции CBS по сравнению с делецией CSE. Удивительно, что линии с двойными делециями (CBS и CSE) по использованным в работе тестам характеризовались большей стрессоустойчивостью и продолжительностью жизни в сравнении с линиями с одиночной делецией CBS. Обработка NAC частично компенсировала вредное влияние делеций CBS на продолжительность жизни и стрессоустойчивость, не оказывая при этом значимых эффектов на пищевое поведение мух. В качестве фармакологических вмешательств применили внесение в состав питательной среды цистеина и NAC. Было установлено, что комбинированные генетические и использованные в работе фармакологические вмешательства в систему биосинтеза сероводорода оказывают аддитивный геропротекторный эффект. В то же время анализ списка дифференциально экспрессируемых генов с использованием базы данных GenAge выявил активацию большого числа генов, способствующих долголетию, таких как Gclc, Gclm, GSTs, EiP71CD, Jafrac1, Hsp68, Hsp22 и подавление ассоциированного со старением гена Orco, что может объяснить увеличение продолжительности жизни и стрессоустойчивости наблюдаемое у линии с делецией CSE. Проведена оценка активности протеасом под действием доноров сероводорода GYY4137 с использованием генетически-модифицированной линии аденокарциномы прямой кишки. Показано, что инкубация клеток с GYY4137 приводит к доза-зависимому повышению активности протеасом. C другой стороны, нами было показано, что уровень экспрессии β5i в клетках в течение всего эксперимента не увеличивается, что указывает на то, что под действием донора сероводорода индукции иммунных протеасом не происходит. Установлено, что повышение активности протеасом под действием GYY4137 наблюдается уже спустя 24 часа после инкубации клеток с донором сероводорода. Более того, стимуляция активности протеасом сохранялась спустя 48 часов и 72 часа после добавления GYY4137. На следующем этапе работы было оценено изменение активности протеасом в клетках под действием бактериальных токсинов липосахаридов (LPS) и LPS совместно с GYY4137. Показано, что в то время как под действием LPS наблюдается повышение активности протеасом, при совместной инкубации клеток с LPS и GYY4137 наблюдалось некоторое снижение активности протеасом. Интересно, что в то же время LPS провоцировал повышение экспрессии иммунной субъединицы β5i в клетках. Полученные данные указывают на эффективную стимуляцию активности протеасом под действием донора сероводорода Эти результаты подтверждают полученные нами ранее данные и указывают на протективное действие GYY4137 и других доноров сероводорода при воспалительных процессах, вызванных введением бактериальных токсинов (LPS).

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
Анализ ряда параметров, характеризующих редокс-статус у штаммов, содержащих различные комбинации мутаций в пентозофосфатном пути на фоне делеции гена lpcA, показал, что повышенная чувствительность к антибиотикам у мутантов с нарушенным синтезом предшественников липополисахаридов обусловлена прежде всего снижением эффективности функционирования пентозофосфатном пути. Продемонстрировано, что главную роль в генерации NADPH играет окислительная ветвь пентозофосфатном пути, однако при ее блокировании (∆gnd) происходит активация серин-глицинового пути с участием гена glyA. Эффективность функционирования серин-глицинового пути генерации NADPH возрастает при повреждении pntAB и icd –зависимых путей синтеза NADPH. Продемонстрировано, что повреждение как оксидативной (∆gnd), так и неоксидативной ветви (∆talAB ) не приводит к увеличению чувствительности бактерий к антибиотикам, в то время как блокирование обеих ветвей (мутант∆gnd ∆talAB) вызывает резкое увеличение чувствительности бактерий к антибиотикам. Определено, что сдвиг pH в щелочную область приводит к снижению констант связывания D-седогептулозу 7-фосфат изомеразы (GmhA) с седогептулозы-7-фосфатом, АТФ и ионами цинка. Увеличение pH до 8 и 8,5 приводит к снижению константы связывания с лигандами. При pH 8.5 константа диссоциации с седогептулозо-7-фосфатом возрастает в 4 раза. Константа связывания с АТФ с 0,5 мкМ возрастает до 6-8 мкМ, а связывание цинка становится плохо детектируемым. При закислении среды до 6,8 и ниже GmhA становится нестабилен в растворе и начинает агрегировать. Построена модель структуры седогептулозы-7-фосфат-изомеразы (GmhA) E. coli. Согласно модели, каждый мономер GmhA имеет два остатка цистеина Cys 50 и Cys57. Остатки Cys57 соседних субъединицы расположены рядом (2,6 Ангстрем) и могут образовывать дисульфидную связь. Возможное окисление, глутатионилирование этих остатков или замыкание между ними дисульфидного мостика может объяснять данные по влиянию редокс-статуса среды на связывание седогептулозо-7-фосфата. Установлено, что делеция гена lpcA приводит к изменению ряда метаболитов E.coli. Для данного штамма характерно снижение не только GSH, но и GSSG, что свидетельствует о снижении синтеза глутатиона. Наблюдается снижение пула NADP, NADH и NAD. При этом уровень глицеральдегид-фосфата и уровень малата не меняется. Значимых изменений метаболитов при оверэкспресcии lpcA выявлено не было. Показано, что в условиях действия окислительного стресса, вызванного пероксидом водорода, у C.glabrata повышена экспрессия генов, кодирующих компоненты убиквитин-протеасомной системы, автофагии, белковые шапероны, ферменты и регуляторные факторы антиоксидативной системы. Установлено, что сверхустойчивость штаммов, выделенных на МКС, B. subtilis 20, B. licheniformis 24, B. pumilus 25 к действию зеоцина и налидиксовой кислоты связаны со сверхэкспрессией генов нескольких систем репарации ДНК Выполнено структурно-функциональное исследование вклада связывания сигнальной молекулы ppGpp и фактора DksA с РНК-полимеразой в клеточном ответе на генотоксичный стресс. Установлено, что именно РНК-полимераза является критической мишенью действия этих факторов in vivo в координации репарации и транскрипции. Сайты связывания ppGpp и DksA могут представлять собой привлекательную мишень для рационального дизайна низкомолекулярных модуляторов транскрипции с сильным противомикробным действием. В 2022 году завершены исследования защитной роли донора сероводорода (тиосульфата натрия) на крысиной модели острого ЛПС-индуцированного воспаления лёгких. Проанализировали уровень провоспалительных цитокинов (IL-6), а также гистологические изменения, наблюдаемые при использовании данного донора H2S. Проведенные исследования позволили сделать вывод о терапевтической роли данного донора H2S при воспалении лёгких, в отличие от другого донора, применявшегося нами ранее (GYY4137). Проведены обширные исследования с использованием мух-дрозофил с делетированными двумя основными генами (CBS и CSE), контролирующие метаболизм H2S, для выяснения роли сероводорода при различных видах окислительного стресса, гипоксии и протеастаза. С использованием методики «отвержения» изучили роль генов, отвечающих за метаболизм сероводорода, в обучении и памяти у мух-дрозофил. Установлено, что CBS приводит к нарушению и долговременной и кратковременной памяти, в то время как делеция гена CSE нарушает преимущественно долговременную память. Таким образом, впервые удалось продемонстрировать важную роль эндогенного сероводорода в таких важных поведенческих параметрах как обучение и память. Получены и проанализированы транскриптомные библиотеки (RNA-seq) из голов самцов используемых линий мух-дрозофил. Проведенный анализ экспрессии генов-кандидатов позволил обнаружить изменения в экспрессии ряда генов, участвующих в формировании передачи нервного импульса и памяти, что помогло объяснить полученные нами в поведенческих опытах результаты. Показано, что делеции CBS оказывают негативное влияние на продолжительность жизни D. melanogaster, в то время как делеции CSE, а также двойные делеции CBS и CSE значительно увеличивают продолжительность жизни как у самцов, так и у самок мух. Согласно полученным данным, увеличение продолжительности жизни наиболее тесно связано с повышением стрессоустойчивости, а не с другими компонентами приспособленности, включая двигательную активность, жизнеспособность преимагинальных стадий и продолжительность репродуктивного периода у самок (Shaposhnikovet al., 2022). Показано, что инкубация клеток TZM-blB8-mCherry и HepG2B8-mCherry с GYY4137 приводит к доза-зависимому повышению активности протеасом. Следует отметить, что повышение активности протеасом в клетках под действием GYY4137 было сопоставимо или превосходило повышение активности протеасом выявляемое под действием ИФН-γ. Кроме того, за счет синтеза в клетках субъединицы иммунопротеасом β5i, слитой с mCherry было исследовано изменение экспрессии β5i в клетках после инкубации с GYY4137. Выявлено, что уровень экспрессии β5i в клетках не увеличивается, что указывает на то, что под действием донора сероводорода индукции иммунных протеасом не происходит, более того наблюдалось незначительное снижение специфической флуоресценции после инкубации с GYY4137. Полученные результаты хорошо коррелируют с данными полученными на предыдущем этапе проекта и указывают на универсальность действия донора сероводорода и эффективную стимуляцию активности протеасом под действием GYY4137. Показано, что GYY4137стимулирует активность как 20S так и 26S протеасом. Продемонстрировано, что под действием GYY4137 наблюдается повышение яркости флуоресценции Me4BodipyFL-Ahx3Leu3VS, что указывает на повышение активности протеасом. При этом, существенного изменения локализации протеасом в клетках выявлено не было.

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
Продемонстрировано, что инактивация окислительной ветви пентозофосфатного пути (ПФП) на уровне декарбоксилирования 6-фосфоглюконата (делеция gnd) с одновременной инактивацией генов трансальдолаз talAB приводит к значительному повышению чувствительности клеток E. coli к антибиотикам различных механизмов действия: хинолонам (налидиксовая кислота), β-лактамам (цефотаксим) и аминогликозидам (гентамицин). В рамках современных представлений о неспецифическом действии антибиотиков на бактериальную клетку лежит механизм индукции окислительного стресса. Определение параметров редокс-статуса двойного мутанта Δgnd ΔtalAB показало парадоксальное увеличение уровня восстановительных эквивалентов NADPH, которое провоцируется, по-видимому, делецией gnd . Несмотря на повышение уровня NADPH, в клетках ∆gnd∆talAB наблюдаются все признаки окислительного стресса, выражающиеся в повышении генерации АФК, активации защитной системы SoxRS, падении уровня глутатиона. Кроме того, значительное снижение внутриклеточного АТФ в мутанте ∆gnd ∆talAB свидетельствует о возникновении энергозатратных процессов, истощающих адаптивный потенциал клеток. Таким образом, инактивация обеих ветвей ПФП (∆gnd ∆talAB) провоцирует перестройку процесса синтеза пентозофосфатов, характеризующуюся развитием окислительного стресса и повышением чувствительности бактерий к антибиотикам. Показано, что инактивация гена purR, кодирующего белок-репрессор пуринового метаболизма или усиление экспрессии генов генов gmhA и rfaD, ответственных за биосинтез предшественников LPS на фоне делеций ∆gnd ∆talAB приводит к супрессии суперчувствительности такого штамма к действию антибиотиков. К аналогичному эффекту приводит делеция гена deoB, который контролирует реакцию превращения рибозо-1 фосфата в рибозо-5-фосфат. Полученные данные позволяют заключить, что ключевым условием, обусловливающим значительное повышение чувствительности мутантов E. coli ∆gnd ∆talAB к антибиотикам является индукция анаболического синтеза пентозофосфатов путем инверсии неокислительной ветви ПФП. Обнаружено, что замена Сys 90 на аланин в белке GmhA приводит к полному нарушению связывания субстратов (седогептулозо-7-фосфата (S7P) и АТФ). Также установлено, что данный остаток цистеина является ключевым при глутатионилировании белка. Замена Сys57 на аланин не нарушает связывания с белком S7P, но приводит к нарушению связывания АТФ. Вторичная структура при замене С57A не меняется. Глутатионилирование белка GmhA не приводит к существенным изменениям термодинамических параметров связывания, в том числе константы связывания с S7P. Таким образом, в структуре фермента GmhA выявлен остаток Сys90 являющийся критичным для поддержания третичной/четвертичной структуры белка и его связывания с субстратом. Именно этот остаток является мишенью глутатионилирования, что, возможно является защитным и регуляторным механизмом, обеспечивающим регуляцию функцию GmhA в клетке. Моделирование GmhA показало, что ковалентное присоединение остатков глутатиона к цистеинам Cys57 не разрушает интерфейса взаимодействия, поскольку глутатионы могут расположится в свободных полостях внутри тетрамера (Рис. 18). Согласно результатам моделирования, глутатионилирование остатков Cys57 не влияет на взаимодействие с субстратом седогептулозо-7-фосфатом в активном центре (19). Сайт связывания АТФ, согласного эксперименту по докингу, частично перекрывается с сайтом связывания седогептулозо-7-фосфата, а именно в области фосфатной группы седогептулозо-7-фосфата и третьего фосфата АТФ. Глутатионилирование остатков Cys57 не влияет на связывание АТФ (Рис. 20). В структуре 2i2w наблюдается дисульфидная связь, образованная двумя цистеинами Cys90 (21). Глутатионилирование этих остатков, также, как и глутатионилирование Cys57, не нарушает интерфейс взаимодействия субъединиц (Рис. 22). Согласно результатам анализа транскриптомов в мутантном штамме НТL с НТL-∆RPN4 по сравнению штамма дикого типа, значимо падает экспрессия четырех генов, связанных с деградацией неправильно свернутых белков в с эндоплазматическом ретикулуме CgKAR2 (CAGL0D02948g, кодирует шаперон ЭПР, взаимодействующий с Ire1p), в цитоплазме CgFES1 (CAGL0K12144g, фактор обмена нуклеотидов у белка Hsp70), а также в ядре CAGL0L09625g (кодирует белок с неясной функцией, необходимый для транспорта протеасом в ядро) и CgSEC13 (CAGL0J08778g, кодирует по-видимому, компонент ядерной поры и вовлечен в регуляции убиквитин-зависимой деградации белков). Эти данные указывают на то, что нарушается деградация белков, с нарушенной структурой, вызванной действием активных форм кислорода в ЭПР, цитозоле и в ядре. Последовательности генов, имеющих отношение к ответу бацилл на окислительный стресс, сравнивали между штаммами B. subtilis 20 (выделен в входе 20 экспедиции на МКС) и близким к нему земным штаммом B. subtilis 168. Аминокислотные замены обнаружены у нескольких ферментов. Так у синтазы гема, зависимая от перекиси водорода (HemQ), обнаружена замена A29T, у вегетативной каталазы (KatA) - I361V, у споровой каталазы (KatX) - G522E, у тиоредоксин-зависимой тиоловой пероксидазы (Bcp) – K37E, а у субъединицы транспортера железа деферрохелатазы/пероксидазы (EfeB) – I58V. Полученные данные указывают, что повышенная устойчивость штамма B. subtilis 20 к действию перекиси водорода, может быть связана с мутациями в ферментах антиоксидантной защиты. А повышение экспрессии генов каталаз, возможно, связано с мутациями в регуляторных областях и/или изменения активности других путей регуляции экспрессии генов, например, мутациями в малых регуляторных РНК. Продемонстрирована роль фактора TraR и, как следствие, транскрипции, которую он регулирует, в сопряжении с репарацией, по крайней мере, трех типов повреждений ДНК: объемных аддуктов, метилированных производных азотистых оснований и двухцепочечных разрывов. Проведено исследование защитного эффекта двух доноров сероводорода («быстрый»-STS и «медленный» GYY4137 и продемонстрировали, что оба исследуемые вещества проявляют ярко выраженный защитный эффект при введении в человеческие клетки Vero-6 после заражения вирусом SARS-Cov-2. На Рис.24 представлены результаты этих экспериментов из которых видно, что оба вещества в 1000 раз ингибируют репликацию вируса. Полученные в 2023 году результаты по защитной роли доноров сероводорода при инфекци вирусом SARS-Cov-2, а также ранее полученные результаты, показавшие эффективность доноров сероводорода при различных заболеваниях дыхательных путей, позволяют рекомендовать использование донора H2S (“STS”) в качестве терапевтического средства при лечении различных заболеваний вирусной природы. Продемонстрировано, что у самцов D. melanogaster увеличение медианной продолжительности жизни при совместной сверхэкспрессии генов CBS и CSE (8.0%) в нервной системе соответствовало сумме эффектов сверхэкспрессии данных генов по отдельности (3.8% –CBS и 4.0% – CSE), что свидетельствует об их аддитивном взаимодействии. Показано, что Торин-2, высокоселективный ингибитор TORC1 и TORC2, в концентрации 0.5 ммоль/л увеличивает медианную и максимальную продолжительность жизни самцов на 7% и 4%, соответственно Установлено, что воздействие GYY4137 вызывает динамические изменения уровней экспрессии протеасомных генов в клетках аденокарциномы прямой кишки. Так, наибольшие изменения экспрессии протеасомных генов под действием GYY4137 наблюдались при инкубации клеток с донором в течение 6 и 24 ч и зависели от концентрации донора сероводорода. Наиболее заметно изменились уровни экспрессии генов PSMB6, PSMB8, PSMB5 и PSMB7, кодирующих каталитические субъединицы протеасом β1, β5i, β5,β7, соответственно. Показано, что в клетках, инкубированных с 200 мкМ GYY4137, спустя 48 ч увеличивается содержание конститутивной субъединицы β5, однако других существенных изменений содержания субъединиц протеасом не происходит. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о влиянии GYY4137 на уровни транскрипции и трансляции отдельных протеасомных генов.