Аннотация результатов, полученных в 2021 году
Несмотря на хороший ответ на первую линию стандартной химиотерапии (ХТ), развитие рецидива у пациенток с раком яичников (РЯ) выявляется в течение короткого периода времени в 70% случаев (Henderson et al., 2018). Выживаемость без прогрессирования составляет примерно от 12 до 18 месяцев, в зависимости от ответа опухоли на химиотерапию (Lheureux et al., 2019). Особенностью РЯ является то, что помимо стандартных путей метастазирования, через лимфатическую и кровеносную систему, метастазирование РЯ чаще происходит через брюшную полость (имплантационный тип) (Казакова А.Д. и др., Вестник ТГУ, 2022). Актуальной является задача выяснить, какие субпопуляции опухолеассоцированных макрофагов (ОАМ) существуют при раке яичников, как они взаимодействуют с химиотерапией и как влияют на течение и исход заболевания. В нашем проекте проблема роли врожденного иммунитета в формировании резистентности опухоли к химиотерапии была изучена на уровне секвенирования единичных клеток опухоли (пространственная транскриптомика), содержащей ОАМ. Далее, мы проанализировали функциональные субпопуляции ОАМ в опухоли и в асците пациентов с раком яичников. Распределение CD68+ макрофагов сильно варьировалось среди образцов опухоли яичников (Ракина М.А., и др., 2022). Были обнаружены внутриопухолевые макрофаги с равномерным и диффузным расположением с увеличенным накоплением вокруг/внутри очага некроза и фронта инвазии; равномерно расположенные в пределах всей опухоли; отдельные макрофаги или небольшие группы макрофагов в строме; неравномерное внутриопухолевое расположение макрофагов. Нами также были обнаружены скопления гигантских CD68-позитивных макрофагов, напоминающих пенообразные клетки. Такие ОАМ имеют рыхлую пенистую зернистую цитоплазму, иногда с включениями. Наличие таких макрофагов в опухоли обнаружено в 20 из 42 случаев (почти 50%). Интересно, что все они имеют запущенную стадию рака яичников: 9 пациенток со стадией 3С и 11 пациенток с 4 стадией. Наличие пенообразных ОАМ имело тенденцию ассоциироваться с прогрессированием рака яичников, включая метастазирование и рецидивирование. Дальнейший анализ ИГХ позволил выявить, что пенообразные макрофаги экспрессируют скавенджер-рецептор стабилин-1 почти в 100% случаев. Экспрессия другого маркера M2 CD163 была почти такой же, однако экспрессия CD206 отсутствовала в большинстве образцов. С помощью конфокальной микроскопии мы подтвердили ко-экспрессию стабилина-1 в макрофагах CD68+. Стабилин-1 экспрессировался не менее чем в 50% гигантских ОАМ. Иммунофлюоресцентный анализ нескольких образцов опухоли также продемонстрировал ко-экспрессию других скавенджер-рецепторов: CD163 и CD36, в пенообразных клетках. Подобно ИГХ, в большинстве образцов мы не наблюдали экспрессию CD206 в ОАМ с пенообразной морфологией. Основным результатом нашей работы в отчетном периоде был полнотранскриптомный анализ срезов опухолевой ткани с помощью технологии пространственной транскриптомики единичных клеток – 10x Visium. Анализировались следующие 4 группы: 1) пациентки, получавшие НАХТ, и имевшие неблагоприятный прогноз в течение 2 лет после лечения – рецидивы или метастазы (N=5), 2) пациентки, получавшие НАХТ, и имевшие благоприятный прогноз в течение 2 или более лет после окончания лечения (N=3); 3) пациентки без предоперационного лечения, имевшие неблагоприятный прогноз в течение 2 лет после лечения (N=4); 4) пациентки без предоперационного лечения, имевшие благоприятный прогноз в течение 2 или более лет после окончания лечения (N=4). Основная идея такого дизайна исследования заключалась в сравнении опухолей с благоприятным и неблагоприятным прогнозом, в поиске биомаркеров опухолевой прогрессии, а также влияния НАХТ на композиционный состав опухоли и связи НАХТ с прогрессией опухоли. В результате биоинформатического анализа были выявлены кластеры, экспрессирующие схожие или уникальные группы генов, относящиеся к различным компартментам внутри опухоли и к группам пациенток. В следующем году планируется подробный анализ профилей каждого кластера, поиск общих и уникальных кластеров для каждой экспериментальной группы пациенток, поиск кластеров, которые будут характеризовать опухоли с благоприятным и неблагоприятным исходом заболевания. Также будут охарактеризованы кластеры, в которых локализованы ОАМ. Чрезвычайно важным фактором, определяющим поведение ОАМ в опухолевом очаге, рассматривается и состояние моноцитов крови, которые инфильтрируют в опухоль и являются главным пластическим ресурсом ОАМ. В течение отчетного периода оценка субпопуляционной структуры общего пула моноцитов у пациентов с раком яичников проводилась нами по трем основным субпопуляциям: классические CD14+СD16-, промежуточные CD14+CD16+ и минорные CD14-CD16+. Сравнительный анализ субпопуляционного состава моноцитов больных раком яичников и доноров показал статистически значимые различия для CD163+ субпопуляции макрофагов: CD14+CD16+CD163+ у пациентов 99,78% и у доноров 93,92% (p<0,001); CD14-CD16+CD163+ у пациентов 99,5%, у доноров 93,8% (p<0,001); CD14+CD16+CD163 у пациентов 99,6%, у доноров 62,2% (p<0,001). Значимые различия показаны для промежуточной CD14+CD16+ субпопуляции макрофагов, экспрессирующих CD206 (пациенты – 91,4%, доноры – 90,8%) (p= 0,078); CCR2 (пациенты – 68,60%, доноры – 30,85%) (p<0,001); Tie2 (пациенты – 99,92%, доноры – 99,13%) (p<0,01). Кроме того, повышение в содержании CD14+CD16-CCR2+ субпопуляции было показано для пациентов (89,72%) по сравнению с донорами (53,54% (р= 0,045)). При раке яичников ОАМ имеют клиническую значимость не только благодаря инфильтрации в опухолевую массу, но и благодаря тесному взаимодействию с раковыми клетками в асцитической жидкости (Казакова А.Д. и др., Вестник ТГУ, 2022). В нашем эксперименте содержание макрофагов в составе асцитической жидкости варьировалось в широких пределах от 1% до 30% от общей клеточной массы. Субпопуляционный состав макрофагов был представлен как отдельными CD68+CD163+ и CD68+CD206+ клетками, так и тройными позитивными макрофагами CD68+CD163+CD206+. Среди макрофагальной популяции было обнаружено до 90% тех, которые экспрессируют стабилин-1. Также было показано, что М2 макрофаги в составе асцитической жидкости экспрессируют моноцитарный маркер CD14. Это свидетельствует о том, что большинство макрофагов в асцитической жидкости происходит из рекрутированных наивных моноцитов, а не является резидентным. Клеточный компонент асцитической жидкости был также представлен фибробластами и опухолевыми клетками, которые находились в виде одиночных клеток или формировали многоклеточные структуры – сфероиды. Было сделано интересное замечание, что опухолевые клетки могут экспрессировать маркеров фибробластов alpha smooth muscle actin (αSMA). Анализ литературных данных подтверждает этот феномен и объясняет его тем, что опухолевые клетки претерпевают частичный эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП), что и приводит к экспрессии мезенхимальных маркеров (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8775835/ ). Таким образом, в течение первого года проекта был проведен комплексный анализ макрофагов в опухолевой ткани, в асцитической жидкости и моноцитов в периферической крови пациенток с раком яичников. Нами было выполнено полнотранскриптомное профилирование опухолевой ткани. Дальнейший биоинформатический анализ позволит нам выявить кластеры, содержащие уникальные паттерны генов, ассоциированных с неблагоприятным прогнозом после НАХТ и с влиянием химиотерапии на исход заболевания, а также выявить субпопуляции ОАМ, ассоциированные с неблагоприятным прогнозом.

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
В 2023 году нами была освоена и использована технология пространственной транскриптомики Nanostring GeoMx-DSP. Преимуществом технологии Nanostring является то, что на каждом срезе анализируются определенные выбранные области интереса (region of interest - ROI). До выбора регионов проводилась дифференциальная окраска цитокератин (CK+)-позитивных опухолевых клеток и CD45+ иммунного инфильтрата меченными флюорофорами антителами, что позволило нам на ткани определить определенные компартменты иммунных клеток и выделить области с различным их расположением относительно опухолевых клеток (внутриопухолевые иммунные клетки; иммунные клетки, расположенные в инвазивном фронте; иммунные клетки, расположенные в строме, не взаимодействующие с опухолевыми клетками). Особый интерес имела макрофагальная популяция, локализующаяся во внеклеточном компартменте, потому что именно в этих ROIs клетки по морфологии напоминали пенистые макрофаги, описанные нами в прошлом отчетном году (Ракина М.А. и др., Сибирский онкологический журнал, 2022). Мы сопоставили данные пилотного пространственного транскриптома, полученные в 2023 году при помощи технологии Nanostring GeoMX, и данные другой технологии 10x Genomics Visium, полученные в 2022 году. Транскриптомная сигнатура таких ОАМ включала следующие гены: CCL18, APOC1, GPNMB, LYZ, APOE, C1QC, C1QB, CTCB, SPP1, CTSS и другие гены. ОАМ, располагающиеся во внеопухолевом компартменте, экспрессируют часть генов из данной сигнатуры (APOE, SPP1, LYZ, CTSS). Поскольку клетки выбирались по морфологии, мы ожидаем, что транскриптом ROI, выбранных по дифференциальному маркеру CD68, будет больше соответствовать описанному с использованием 10x Visium. Интересно, что обнаруженный нами транскриптом ОАМ соответствует так называемым липидным макрофагам (Lipid-laden macrophages) в опухолях. Рядом свежих исследований с помощью секвенирования единичных клеток была обнаружена данная субпопуляция ОАМ, при этом во многих исследованиях профиль Lipid-laden macrophages имел повышенную экспрессию SPP1, C1QC TREM2 CCL18, APOC1, GPNMB, LYZ, APOE и других генов (Masetti M, et al. 2022; Zhang L, et al., 2020; Yang Q, et al., 2021; Zhang H, et al., 2022; Zhou L, et al., 2022). Данные собраны в обзорную статью и находятся на рецензии в журнале Clinical and Experimental Medicine (Q1, IF=5,05) (Rakina M., et al., under review). В рамках нашего проекты мы впервые обнаружили lipid-laden macrophages со сходным профилем в образцах рака яичников. Это определенно представляет интерес для нас и стимулирует исследовать данную популяции более детально. В 2023-2024 году планируется завершить валидацию обнаруженных маркеров на крупной выборке пациенток с РЯ. Асцит — состояние, характеризующееся аномальным скоплением жидкости в брюшной полости. Показана связь между стадией РЯ и объемом асцитической жидкости. Частота асцита составила 49,4% при I стадии и 62,5% при II стадии заболевания, и возрастала до 90,1% и 100% при III и IV стадиях соответственно (отражено в обзоре Rakina M., et al., Int J Mol Sci. 2022). ОАМ являются преобладающей популяцией иммунных клеток в асцитической жидкости, составляя до 95% клеточного компонента (Казакова А.Д., и др., Вестник ТГУ, 2022). Мы провели фенотипический анализ макрофагов при помощи проточной цитометрии. Содержание макрофагов той или иной субпопуляции варьировалось от случая к случаю. В среднем содержание CD45+ клеток составило 81,61%, CD11b+ макрофагов - 67,69%, CD14+ макрофагов - 32,22%. Внутри субпопуляций значения также варьировались в широком диапазоне: количество CD11b+CD206+ клеток составило 41,50%, CD14+CD206+ - 68,36%, CD11b+CD163+ - 39,58%, CD14+CD163+ - 68,65%, CD11b+TIE2+ составили 50,21%, CD14+TIE2+ составили 60,92%. Интересно, что среди CD14+ моноцитарных макрофагов экспрессия CD206, CD163 и TIE2 наблюдалась чаще. В популяции СD14+ клеток количество CD163+ макрофагов было выше (68,65%) по сравнению с CD11b+ макрофагами (39,58%), на уровне тенденции статистической значимости (p=0,057). Однако, общее количество CD14+ клеток было ниже (32,22%) относительно CD11b+ клеток (67,69%, p=0,024). Также путем градиентного центрифугирования и магнитной сепарации из асцитической жидкости больных раком яичников были выделены CD14+ макрофаги. Была отмечена высокая экспрессия гена CCL18, ответственного за метастазирование, а также фактора роста опухолей TGFb и про-воспалительных цитокинов IL6, IL8, IL1b. Эти данные указываю на то, что макрофаги асцитической жидкости проявляют про-опухолевый фенотип. В 2023 году планируется исследовать экспрессию новых маркеров в ОАМ асцитической жидкости и уточнить их транскриптомную активность и вклад в этапы канцероматоза. Нами продолжился анализ субпопуляционного состава моноцитов периферической крови пациентов с раком яичников. Статистически значимые различия между субпопуляционным составом моноцитов пациентов c раком яичников и доноров были получены для следующих субпопуляций: CD14+CD16-CD163+ (p=0,001), CD14+CD16+CD163+ (p=0,00001), CD14-CD16+CD163+ (p=0,001), CD14+CD16+CCR2+ (p=0,003), CD14-CD16+TIE2+ (p=0,001). Таким образом, для всех перечисленных субпопуляций, кроме CD14-CD16+TIE2+, количество моноцитов у пациентов повышалось по сравнению с донорами. По популяции CD14-CD16+TIE2+ отмечалось снижение количества моноцитов у пациентов (62,01%) в сравнении с донорами (97,51%, р=0,001). Было проведено сравнение субпопуляционного состава моноцитов пациентов в зависимости от наличия/отсутствия асцита, а также от наличия/отсутствия прогрессии. В группе пациентов с асцитом отмечалось снижение количества моноцитов популяции CD14+CD16-CD163+ (99,44%) по сравнению с пациентами без асцита (99,95%), на уровне тенденции статистической значимости (p=0,054). По популяции CD14-CD16+CD206+ тоже отмечалось снижение количества моноцитов в группе пациентов с асцитом (63,38%) по сравнению с пациентами без асцита (91,14%), на уровне тенденции статистической значимости (p=0,057). Статистически значимые данные были получены при сравнении групп пациентов с отсутствием и с наличием опухолевой прогрессии. При отсутствии прогрессии у пациентов отмечалось большее количество CD14+CD16+ промежуточной субпопуляции моноцитов (4,36%) по сравнению с пациентами с прогрессией (1,20%, p=0,019). В группе пациентов с прогрессией повышалось содержание моноцитов промежуточной субпопуляции CD14+CD16+CD206+ (99,79%) по сравнению с пациентами без прогрессии (68,03%, p=0,019). По субпопуляции CD14+CD16-CD163+ в группе пациентов с прогрессией отмечалось повышение количества моноцитов (99,99%) по сравнению с группой пациентов без прогрессии (99,85%, p= 0,025). Была создана культура in vitro моноцитарных макрофагов, стимулированных кондиционированными средами клеток рака яичников SKOV-3 и асцитической жидкостью, полученной от тех же пациенток. При сравнении не стимулированных макрофагов с макрофагами, стимулированными асцитической жидкостью в объеме 20% и 100% от общего объема среды в лунке, экспрессия CD163 была статистически значимо выше в стимулированных макрофагах: 2,149 (0,49;3,53) vs 33,98 (8,58;81,53), р=0,029 и 2,149 (0,49;3,53) vs 9,46 (5,21;35,37), р=0,029, соответственно. Также при сравнении макрофагов, стимулированных супернатантом опухолевых клеток в объеме 20% от всего объема среды в лунке, и макрофагов с той же стимуляцией при добавлении ХТ агента было обнаружено статистически значимое понижение экспрессии генов CD163 и RS1 при добавлении ХТ: 9,48 (3,29;25,06) vs 0,79 (0,01;5,14), p=0,032 и 0,09 (0,05;0,65) vs 0,01 (0,00;0,06), p=0,032, соответственно. Эти данные говорят указывают на перепрограммирование ОАМ асцитической жидкости при воздействии ХТ. Таким образом, в отчетном году нами были выявлены ключевые гены, характеризующие таргетную популяцию ОАМ (пенистых клеток), для которых будет проведена валидация, и будут получены данные о конкретном фенотипе этих ОАМ. Первичные данные позволили охарактеризовать ОАМ из асцитической жидкости. Планируются дальнейшие исследования фенотипа и функциональной активности макрофагов асцитической жидкости.

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
За отчетный период были достигнуты все запланированные результаты. За предыдущий период нами были получены данные о макрофагах с пенистой цитоплазмой, которые аккумулировались в опухоли, главным образом, после химиотерапии. Анализ экспрессии макрофагальных маркеров и морфологическая оценка расположения макрофагов в первичной опухоли яичника и сальнике с канцероматозом на расширенной выборке показал, что обильная инфильтрация пенистыми макрофагами именно в сальнике в совокупности с наличием неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) и диссеминированной стадией ассоциировано с наихудшим прогнозом заболевания. В канцероматозных очагах сальника экспрессия CD68 была значимо выше в опухолях с наличием гигантских многоядерных клеток и наличием кристаллов холестерина, а также наблюдалась тенденция к статистической значимости связи экспрессии CD68 с фиброзом стромы и наличием третичных лимфоидных структур. Эти зависимости вполне логичные, потому что именно в сальнике наблюдалось наибольшее скопление пенистых макрофагов и их связь с НАХТ и худшей выживаемостью пациентов. По литературным данным, пенистые клетки могут свидетельствовать о нарушении липидного обмена и могут накапливаться в зоне неразрешенного воспаления. В рамках отчета нами был проведен комплексный анализ накопленных литературных данных по современному состоянию вопроса о фенотипическом разнообразии ОАМ в опухолях различных локализаций (Rakina M., Larionova I., Kzhyshkowska J., Heliyon. 2024 Apr 15; 10(7): e28332, 2024). Описаны новые маркеры на основе фенотипического разнообразия макрофагов. Был выявлен и описан интересный фенотип так называемых липид-ассоциированных макрофагов. Мы хотели проверить гипотезу того, являются ли эти ОАМ теми пенистыми макрофагами, которые мы видим в опухоли. Для этого мы и выбрали главную генную сигнатуру липид-ассоциированных ОАМ, содержащую выше перечисленные маркеры. В выборе мы также ориентировались на данные, полученные нами в результате анализа пространственной транскиптомики. Было также выявлено, что белковая экспрессия стабилина-1 в опухоли яичника выше у больных с наличием асцита по сравнению с больными без асцита. Такая же тенденция к статистической значимости наблюдалась также для CD206. Экспрессия CD206 была достоверно повышена в опухоли яичников с микронекрозом по сравнению с опухоли с крупными очагами некроза. Белковая экспрессия CD163 была статистически значимо ассоциирована с микрососочковым паттерном. Далее, с помощью технологии пространственной транскриптомики Nanostring GeoMx мы прицельно профилировали макрофагальные инфильтраты в первичной опухоли яичника и сальника с канцероматозом, акцентируя особое внимание на пенистых макрофагах. Было получено 6 кластеров ROI: 1, 2, 3 – кластеры богатые ОАМ и 0, 4, 5 – кластеры богатые опухолевыми клетками. Далее с помощью метода клеточной деконволюции в пакете SpatialDecon получили распределение клеточных типов в ROI различных компартментов РЯ. Результаты клеточной деконволюции позволяют охарактеризовать полученные кластеры ROI различных компартментов ОАМ. Кластер «0» представляет собой опухолевые клетки с низким содержанием иммунного и стромального инфильтрата. Кластер «1» – компартмент ОАМ богатый лимфоцитами (особенно CD8 T-клетками). Кластер «2» – компартмент ОАМ с наличием моноцитарного инфильтрата. Кластер «3» – компартмент ОАМ и фибробластов. Кластер «4» – компартмент ОАМ и опухолевых клеток. Кластер «5» – компартмент ОАМ, опухолевых клеток и B-лимфоцитов. Анализ дифференциальной экспрессии генов для каждого из выявленных кластеров ОАМ и опухоли показали, что ОАМ кластера 1 характеризируются генами антигенной презентации, а кластера 2 – ранее обнаруженными маркерами липидных макрофагов (APOC1, APOE, FABP4, CD36). В результате биоинформатического анализа данных, полученных с помощью технологии Nanostring GeoMX и 10x Genomics Visium был выбран список биомаркеров, ассоциированных с субпопуляцией пенистых макрофагов: CCL18, TREM2, GPNMB, SPP1, LYZ, CSTB, APOC1, APOE, C1QC. В совокупности с маркером макрофагов CD68 была оценена их ко-локализация в ОАМ опухолевой ткани. В препаратах цитоспинов клеток асцитической жидкости больных РЯ также была подтверждена экспрессия изучаемых маркеров в макрофагах. Суммарно, наши данные согласуются как друг с другом при использовании различных методических подходов к анализу фенотипа пенистых макрофагов, так и с литературными данными. Однако, для рака яичника мы первые, кто провел такой комплексный анализ фенотипов ОАМ в ткани яичника и сальника (Larionova I., et al., submitted, данные будут обнародованы в 2024 году уже после сдачи отчета и будут иметь обязательную ссылку на грант). Мы завершили работу по анализу субпопуляционного состава моноцитов периферической крови и макрофагов асцитической жидкости больных раком яичников. В периферической крови как по общей популяции моноцитов, так и по субпопуляциям наблюдалась схожая картина – снижение CD163- и CD206-экспрессирующих клеток у больных РЯ по сравнению со здоровыми донорами. Интересные наблюдения были сделаны для CCR2-экспрессирующих моноцитов – большинство моноцитов больных РЯ были CCR2-положительными. Мы отметили интересную тенденцию: как CD163+, так и CD206+ моноциты, экспрессирующие одновременно CCR2, в количественном эквиваленте были больше представлены в группе больных РЯ. Мы обнаружили, что доля CCR2+ моноцитов, но не CCR2- моноцитов, выше в группе больных РЯ по сравнению со здоровыми донорами. Такой же характер распределения экспрессии наблюдался для Tie2-положительных моноцитов. То есть маркерными для опухоли являются те моноциты, у которых есть потенция к миграции. Мы также рассмотрели, как химиотерапия влияет на фенотип циркулирующих моноцитов. Оказалось, что неоадъювантная химиотерапия (НАХТ) приводит к увеличению процента CCR2-экспрессирующих моноцитов, особенно была заметна разница для CD14+CD163+CCR2+ моноцитов. Процент моноцитов, экспрессирующих CD206 и Tie2 был ниже в группе с НАХТ по сравнению с контрольной группой. Тенденция сохраняется во всех субпопуляциях моноцитов при сравнении онкологической группы с контрольной группой. В асцитической жидкости в группе с НАХТ доля CD45+CD14+CD163+CD206+ макрофагов была ниже по сравнению с нелеченой группой. В группе с НАХТ доля макрофагов, экспрессирующих CD206, была меньше по сравнению с группой без НАХТ. У пациенток с НАХТ понижалась также и доля CD45+CD11b+CD163+CD206+ макрофагов. Содержание CD206-экспрессирующих CD11b+ макрофагов различных субпопуляций в группе с НАХТ была ниже по сравнению с группой без НАХТ. Нами была проведена связь различных фенотипов макрофагов асцитической жидкости с наличием прогрессии у пациенток с раком яичников. Так, в группе пациенток с прогрессией повышалось содержание CD45+CD14+CD163+CD206+ макрофагов по сравнению с группой без прогрессии. Также содержание CD45+CD14+CD163+Tie2+ и CD45+CD14+CCR2+Tie2+ макрофагов в асците больных с прогрессией было выше по сравнению с группой без прогрессии. Для CD11b-экспрессирующих макрофагов асцитической жидкости наблюдалась похожая закономерность. Исследования in vitro продемонстрировали, что химиотерапия и асцитическая жидкость влияют на активность макрофагов, снижая их фагоцитарную активность по отношению к опухолевым клеткам при раке яичника. Химиотерапия также ингибировала способность макрофагов влиять на миграционную активность опухолевых клеток яичника, без влияния на инвазивную способность. Также химиотерапии не оказывала влияния на ангиогенный потенциал макрофагов. Интересные наблюдения были сделаны для клеток HUVEC, стимулированных асцитической жидкостью больных РЯ: они отличались широким основанием образующихся трубочек, при этом по всей поверхности лунки отмечалось множество незамкнутых структур. Структуры же, сформировавшиеся под влиянием макрофагов без химиотерапии и макрофагов с химиотерапией, были похожи на трубочки, образовавшиеся под влиянием пустой среды EMB-2: тонкие, вытянутые трубочки, присутствовали не полностью замкнутые структуры, сеть трубочек была неплотная. В целом, на третий год выполнения проекты мы завершили все запланированные работы по оценке ОАМ в опухоли яичника и канцероматозного сальника, а также асцитической жидкости, и моноцитов периферической жидкости. Обнаруженные данные являются интересными с точки зрения ответов на существующие клинические вопросы при раке яичников. Мы верим, что в сумме полученные данные помогут нам приблизиться к разработке новых таргетов для иммунотерапии при раке яичников, которая на сегодняшний день является большой нерешенной клинической проблемой.