КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 22-13-20032

НазваниеРазработка биологически активных наноматериалов медицинского и ветеринарного назначения.

РуководительПестряков Алексей Николаевич, Доктор химических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский политехнический университет", Томская обл

Период выполнения при поддержке РНФ

2022 г. - 2024 г.

Конкурс№66 - Конкурс 2022 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами» (региональный конкурс).

Область знания, основной код классификатора 03 - Химия и науки о материалах, 03-601 - Химия новых неорганических функциональных и наноразмерных материалов

Ключевые словананочастицы, серебро, золото, медицинские препараты, ветеринарные препараты

Код ГРНТИ31.15.37; 76.31.35

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Взрывное развитие нанотехнологий в последние годы привело к появлению целого ряда уникальных материалов, применяемых в критически важных областях экономики и социальной сферы. Одним из таких направлений стало активное развитие наномедицины - производство принципиально новых лекарств и медицинских изделий на основе наноматериалов различного типа. Одним из наиболее ярких примеров таких материалов стал синтез медицинских и ветеринарных препаратов на основе наночастиц серебра, а также ряда других металлов - Au, Pt и др. Большое количество научных групп в развитых странах активно разрабатывает новые методы синтеза подобных наноматериалов, изучает их свойства и методы применения. Появление таких нанопрепаратов открыло новую страницу в борьбе с рядом социально-значимых заболеваний. В настоящее время существует реальная и достаточно высокая вероятность возникновения новых инфекций, представляющих повышенную опасность для человека, а также домашних животных и сельскохозяйственных растений. Предшественники этих инфекций, как правило, циркулируют среди диких животных и птиц. Высокая контагиозность новых инфекционных возбудителей значительно повышает риск возникновения эпидемий и мировых пандемий. Рост населения, его скученность в больших городах, постоянная миграция, туризм, деловые поездки – все это также повышает вероятность быстрого распространения инфекций. Рекомендуемые меры по ограничению распространения инфекций – карантин, самоизоляция, социальная дистанция, маски, перчатки, антисептики и тому подобное – явно недостаточны. Для создания и организации производства вакцин нужно время, а инфекция распространяется быстро, за это время инфекция может из локального очага перерасти в эпидемию или даже пандемию. Пример продолжающейся второй год коронавирусной пандемии показал, что имеющиеся противовирусные препараты (РНК - азы, реафероны, индукторы интерферонов, ингибиторы репликации вирусов и т.д.) недостаточны для обеспечения должного уровня защиты и лечения. Для борьбы (профилактика и лечение) с такого рода инфекциями необходимы препараты нового типа, отличающиеся по механизму действия от существующих антимикробных средств, и таким образом дополняющие их. Эти препараты должны обладать комплексной антибактериальной, противовирусной и фунгицидной активностью, оказывать противовоспалительное действие и в целом повышать устойчивость организма к инфицированию болезнетворными агентами, то есть, стимулировать неспецифический иммунитет, как общий, так и местный (в частности, лизоцимную активность). В этом плане перспективны препараты наноструктурированного серебра (наносеребра), получаемые с использованием современных нанотехнологий. Цель данной работы – разработать и оптимизировать методы синтеза, провести испытания биологической активности, токсичности, и показать возможности современных препаратов наноструктурированного серебра (а также некоторых других наночастиц металлов - золота, платины) при их использовании в борьбе с инфекционными заболеваниями, включая новые и вновь возникающие инфекции. Наша международная научная группа, включающая исследователей России, Мексики, Испании и ряда других стран, в течение ряда лет разрабатывает и исследует медицинские и ветеринарные препараты на основе наночастиц серебра. Проведен большой объем работ по изучению физико-химических свойств и биологической активности данных препаратов. Показана их высокая эффективность в профилактике и лечении ряда инфекционных (как бактериальных, так и вирусных) заболеваний человека и сельскохозяйственных животных и растений, в том числе таких как синдром диабетической стопы (лечению поддавались диабетические язвы II и даже III степени по классификации Вагнера), ЛОР-инфекций, туберкулеза (включая лекарственно-устойчивые штаммы), вирус лихорадки долины Рифт, вирус чумы плотоядных (чумка собак), ротавирусная инфекция и др. Результаты этих исследований опубликованы более чем в 80 научных статьях, включая более 20 в журналах Q1 и Q2, ряде диссертаций и патентов. Венцом исследований можно считать испытания препарата на основе наносеребра в больнице общего профиля г. Тихуана (Мексика), которая в настоящее время специализируется на лечении COVID-больных. Проведенные испытания показали высокую эффективность данного препарата для профилактики заболевания COVID-19 среди медицинского персонала больницы (около 1200 медработников + около 120 в контрольной группе). Данные результаты недавно опубликованы в журнале Q1. Особое внимание уделяется изучению цито- и генотоксичности разрабатываемых препаратов наносеребра. Поскольку препараты наносеребра в зависимости от способа получения могут значительно различаться между собой по токсикологическим показателям и эффективности, то каждый препарат наносеребра, претендующий на статус лекарства или медицинского изделия, должен иметь свою собственную научно-доказательную базу (досье) по безопасности и эффективности. Надо полагать, что ссылки и автоматический перенос данных по свойствам с одних препаратов наносеребра на другие препараты наносеребра, без дополнительного экспериментального подтверждения, неправомочен. Наши исследования показали, что различные препараты серебра, в зависимости от способа получения и состава, могут различаться по токсичности в десятки раз, что в большинстве случаев делает такие препараты небезопасными для человека. Разрабатываемая нами субстанция и препараты на ее основе имеют обширную научно-доказательную базу по безопасности и эффективности. Результаты токсикологических исследований опубликованы в ведущих журналах (более 80 статей, в том числе более 20 статей Q1), авторефератах диссертаций (более 10), заявок на патенты и патенты (более 20) и научно-методических рекомендаций. Все результаты показали нетоксичность разрабатываемых препаратов наносеребра в терапевтических дозах. Однако, несмотря на большой объем уже проведенных исследований, остается ряд проблем, решение которых позволит значительно повысить эффективность разрабатываемых препаратов наносеребра, как в части метода синтеза, так и в области биологической активности данных материалов. Суть нанотехнологий можно выразить важностью работы по атомной и по молекулярной сборке структур. Из одного и того же набора атомов и молекул можно создать достаточно большое количество разных структур, которые соответственно будут проявлять и разные свойства. Задача – создать стабильную структуру с нужными свойствами. Наши предыдущие исследования показали, что при лечении различных инфекционных заболеваний требуется оптимизация физико-химических свойств получаемых препаратов - размер частиц металла и комплексов на их основе, их морфология, лигандное окружение (тип молекулы-стабилизатора), концентрация и др. В зависимости от этих параметров препараты наносеребра проявляют различную биологическую активность, а также токсикологические свойства. То есть в каждом конкретном случае требуется оптимизация метода синтеза нанопрепарата, а также способа его применения (дозировка, периодичность и т.д.). Таким образом, настоятельно необходимо изучение общих закономерностей влияния метода синтеза наносеребра на его физико-химические (размер частиц металла и комплексов на их основе, их морфология, лигандное окружение, тип молекулы-стабилизатора, концентрация и др.) и биологические свойства (в том числе бактерицидные, противовирусные свойства, цито- и генотоксичность), что и планируется в настоящем проекте. Основное направление работ в данном проекте будет связано с оптимизацией методов синтеза наночастиц серебра и других металлов и изучении их физико-химических свойств. Поскольку в рамках данного проекта невозможно провести полноценные клинические испытания препаратов на людях, биологическая активность нанометаллических систем будет определяться in vitro, а также на животных (мыши, свиньи, крупный рогатый скот, птицы), инфицированных рядом болезнетворных микроорганизмов (E.coli, Salmonella enteritidis, P.auregenosa, Streptococcus Proteus и др.). Кроме того, несмотря на то, что бактерицидные свойства серебра известны с финикийских времен, до сих пор не установлен механизм биологической активности серебра, как ионного, так и нанометаллического (коллоидного). Существует более 10 различных гипотез, которые пока не получили достаточного доказательного подтверждения. Наши предыдущие исследования наносеребряных и нанозолотых катализаторов в жидкофазных реакциях органических соединений позволяет предполагать именно каталитическую природу механизма биологического действия наносеребра. Часть работы будет посвящена данной теме. Также представляет интерес сравнительное изучение в сопоставимых условиях физико-химических свойств и биологической активности наночастиц аналогов серебра - золота и платины. В литературе есть информация об их активности при лечении артритов, артрозов, онкологических заболеваний. Сравнение свойств этих нанометаллических частиц позволит лучше понять возможный механизм влияния методов синтеза нанометаллов на их структуру и активность.

Ожидаемые результаты
Данный проект является продолжением длительного цикла работ международной научной группы по созданию высокоэффективных лекарственных препаратов нового поколения. - Будет изучено влияние метода синтеза наносеребряных препаратов на их физико-химические свойства - размер частиц металла и комплексов на их основе, их морфология, лигандное окружение, тип молекулы-стабилизатора, концентрация и др. - Будут оптимизированы условия синтеза нанометаллических препаратов в зависимости от целевых параметров структуры и морфологии получаемых наночастиц. Будут установлены критические параметры процесса синтеза и условий хранения, влияющие на стабильность получаемых наносистем. - Будет продолжено изучение антибактериальной и противовирусной активность субстанции, оценено ее противовоспалительное действие. Исследования будут выполнены как in vitro, так и на животных. Для первичного тестирования в качестве нормальных клеточных культур будут использоваться поддерживаемая линия эмбриональных фибробластов 3T3L1. В качестве опухолевых линий клеток будут применяться линии рака молочной железы (MDA-231), рака простаты (PC-3) и лейкозные линии (Jurkat). Изучение цитотоксического воздействия и пролиферации клеток будет проводиться с использованием колориметрических тестов (МТТ, резазуриновый тест). Оценка морфологии клеток будет выполнены методами оптической световой и флуоресцентной микроскопии (микроскоп AxioVertA1, Zeiss, Germany). Изучение механизмов клеточной гибели будет выполняться цитофлуориметрическим методом с использованием наборов флуоресцентных красителей (CytoFlex, Beckman Coulter, USA). - Будут продолжены исследования биоактивности препаратов наносеребра на лабораторных и целевых видах животных (мыши, свиньи, крупный рогатый скот, птицы), инфицированных рядом болезнетворных микроорганизмов (E.coli, Salmonella enteritidis, P.auregenosa, Streptococcus Proteus и др.). - Будут продолжены работы по решению ряда фундаментальных проблем, связанных с наносеребряными препаратами. Так, необходимо тщательное изучение цито- и генотоксичности данных препаратов, т.к. в литературе часто появляются сообщения о токсичности серебра. - Будут проведены исследования противовирусной активности наносеребра на моделях коронавирусной и парамиксовирусной инфекциях кур; анализ вирусной нагрузки вирусов IBV и NDV в кишечнике и легких методом ПЦР в режиме реального времени, анализ уровня экспрессии генов Muc5AC, Muc2, IL18, CXCR4, IL10, IL6, NFkB. Изучены распределения вирусных агентов в тканях кишечника и легких методами иммунофлуоресцентной микроскопии - Будут продолжены доклинические испытания наносеребряных препаратов в лечении ряда инфекционных заболеваний человека и животных - синдрома диабетической стопы, мастита коров, раковых опухолей и др. - Будут проведены исследования в сопоставимых условиях физико-химических свойств и биологической активности наночастиц аналогов серебра - золота и платины. Сравнение свойств этих нанометаллических частиц позволит лучше понять возможный механизм влияния методов синтеза нанометаллов на их структуру и активность. - Будет проведена оценка возможной каталитической природы механизма биологического действия наносеребра. По результатам проведенных исследований планируется разработать рекомендации по применению наносеребряных препаратов для лечения и профилактики ряда инфекционных заболеваний животных и человека, для дальнейшего производства и распространения новых препаратов, в том числе за рубежом (в частности, в странах Латинской Америки). Результаты предварительных испытаний показывают, что синтезируемые препараты превысят по основным медицинским и экономическим характеристикам отечественные и зарубежные аналоги.

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
1. Исследованы физико-химические свойства препаратов наносеребра (AgNPs). AgNP в основном сферические, со средним размером 33,3 ± 5,6 нм, как определено HR-TEM. Результаты DSC-TGA показывают 18,8% покрывающего агента и 1,2% металлического серебра. Анализ UV-vis показал плазмонный поверхностный резонанс при 409 нм. Гидродинамический диаметр, суммирующий диаметр наночастицы металлического серебра и гидролизованного белкового покрытия, определяется с помощью DLS и составляет 165,5±105 нм, а ζ-потенциал 2,3±4,7 мВ. 2. Результаты, полученные в этой работе, показали, что препарат AgNPs БиоАрговит обладает селективной антипролиферативной и противопаразитарной активностью без признаков цитотоксических, генотоксических или токсических побочных эффектов in vitro для здоровых систем. Эти результаты открывают новые возможности в разработке селективных, безопасных и эффективных препаратов AgNPs для лечения рака и паразитарных заболеваний со значительным снижением побочных эффектов. Все результаты токсикологической оценки указывают на категорию 5 (практически нетоксичный) согласованной на глобальном уровне системы классификации и маркировки химических веществ 3. Показана высокая противовирусная активность препарата Арговит С на организменных моделях (куры зараженные коронавирусом (IBV)). Наночастицы, стабилизированные поливинилпирролидоном, обладают наибольшей активностью, в сравнении с Арговитом С, БиоАрговит и Арговитом, стабилизированным диметилсульфоксидом, что создает еще более интересные перспективы для изучения противовирусной активности in vivo. Наименьшую противовирусную активность наблюдали у препаратов наносеребра с использованием в качестве стабилизатора ДМСО и аскорбиновой кислоты. Активность препаратов Арговита, содержащего поливинилпирролидон, была наибольшей и сохранялась до концентрации 1 мкг/мл. 4. Показана высокая противовирусная активность наночастиц серебра на модели парамиксовирусной инфекции у мышей. 5. Показана эффективность совместного применения препарата наносеребра и антибиотиков при лечении золотистого стафилококка (мастит коров). Таким образом, лечение мастита AgNPs Арговит-C может частично вернуть активность антибиотиков в отношении S. dysgalactiae и S. aureus, в то время как, напротив, лечение антибиотиками, такими как Spectromast LC и Lactobay, повышает устойчивость бактерий к антибиотикам. Результаты этой работы укрепляют надежду на то, что в будущем использование AgNP в качестве ингибиторов эффлюксной помпы восстановит активность антибиотиков и, таким образом, сохранит широкий спектр антибиотиков на рынке. 6. Использование AgNP при лечении чумы плотоядных привело к резкому увеличению доли собак, выздоровевших без последствий, по сравнению с собаками, получавшими лечение без AgNP. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что терапию AgNPs можно рассматривать как целевое лечение собак и ряда пушных животных, серьезно пораженных вирусом чумы плотоядных. 7. Исследована активность наночастиц серебра против фитопатогенов на примере выращивания абрикоса. Начата разработка эффективного способа микроразмножения абрикоса и изучение необходимых условий для внедрения AgNPs в ростки абрикоса, а также влияние его применения на параметры, связанные с пролиферацией.

Публикации

1. Гастелум-Лейва Ф., Пена-Жассо А., Альварадо-Вера М., Пласенсия-Лопес И., Патронесс-Ромеро Л., Лоэра Кастанеда В., Гандара-Мирелес Х.А., Ларес-Ассефф И., Леаль-Авила М.А., Алмейда-Перес Х., Богданчикова Н., Пестряков А., Альманза-Рейес Х. Evaluation of the efficacy and safety of silver nanoparticles in the treatment of neurological and non-neurological distemper in dogs: a randomized clinical trial Viruses, Viruses, 2022, V. 14, article 2329 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.3390/v14112329

2. Перес-Касельес К. , Альбуркерке Н. , Файзе Л., Богданчикова Н., Гарсия-Рамос Х. К., Родригес-Эрнандес А. Г. , Пестряков А. , Бургос Л. How to Get More Silver? Culture Media Adjustment Targeting Surge of Silver Nanoparticle Penetration in Apricot Tissue during in Vitro Micropropagation Horticulturae, Horticulturae, 2022, Vol. 8, article number 855 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.3390/horticulturae8100855

3. Ромо Киньонес К.Р. , Альварес-Руис П. , Мехиа-Руис К. Х. , Богданчикова Н. , Пестряков А. , Гамес-Хименес К. , Валенсуэла-Кинонес В. , Монтойя-Мехиа М. , Нава Перес Э. Chronic toxicity of shrimp feed added with silver nanoparticles (Argovit-4®) in Litopenaeus vannamei and immune response to white spot syndrome virus infection PeerJ, PeerJ, 2022, V. 10, article 14231 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.7717/peerj.14231

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
1. Была подтверждена возможность получения новых типов модифицированных препаратов наносеребра путем добавления небольших количеств (0,01 – 2 %) модификатора в базовые растворы поливинилпирролидона. В качестве модификаторов могут быть использованы лиганды-комплексообразователи ионного серебра (аммиак, тиосульфат-ион, цитрат-ион), мягкие восстановители (глюкоза, одно-, двух, трехатомные спирты, глюкозамины и т.д.), Изготовлено 5 новых образцов модифицированных препаратов наносеребра. Для получения препарата наносеребра, предназначенного для синтеза катализаторов окисления спиртов, предложено в качестве модифицирующей добавки использовать спирты, фигурирующие в процессах окисления. Обращено внимание на серебросодержащий сорбент и его потенциальные возможности подавления процессов генерализации и хронизации коронавирусной инфекции у больных COVID-19. 2. По данным метода малоуглового рентгеновского рассеяния (МУРР) размер первичных частиц серебра в Арговите составляет 1 – 6 нм. По данным электронной спектроскопии в растворе частицы агрегированы, средний размер агрегатов («вторичных частиц») составляет 10 – 20 нм. 3. Электронно-микроскопическое исследование подтвердило наличие в препарате Арговит-С наночастиц серебра в кристаллическом состоянии. НЧ Ag присутствуют в агрегированном виде, а также и в виде одиночных наночастиц. Протяженность агрегатов составляет в среднем ~ 200 нм. Характерные размеры подавляющего числа частиц находятся в интервале от 3 до 20 нм при среднем размере 9,4 нм. НЧ Ag варьируют по форме, преобладающая доля частиц имеет сферическую форму, часть из них имеет огранку и представлена многогранниками со скругленными вершинами. Электронные снимки высокого разрешения указывают на дефектность кристаллической структуры фракции более крупных НЧ Ag. 4. Результаты показали, что наночастицы серебра, полученные облучением поливинилпирролидоном и гидролизатом коллагена, стабильны в растворах. Образцы с различными стабилизаторами характеризовались широким средним распределением по размерам от 2 до 50 нм и низким дзета-потенциалом от -7,3 до +12,4 мВ. Все препараты AgNPs показали дозозависимое цитотоксическое действие на опухолевые клетки. Установлено, что частицы, полученные с использованием комбинации поливинилпирролидон/гидролизат коллагена, обладают относительно более выраженным цитотоксическим эффектом по сравнению с образцами, стабилизированными только коллагеном или только поливинилпирролидоном. Минимальные ингибирующие концентрации наночастиц составляли менее 1 мкг/мл для различных типов опухолевых клеток. 5. Было обнаружено, что нейробластома (SH-SY5Y) является наиболее восприимчивой, а рак яичников (SKOV-3) наиболее устойчив к действию наночастиц серебра. Активность препарата AgNPs, приготовленного из смеси PVP и PH, изученной в этой работе, была выше, чем активность других препаратов AgNPs, описанных в литературе, примерно в 50 раз. Результаты показывают, что препараты AgNPs, синтезированные электронным пучком и стабилизированные поливинилпирролидоном и белковым гидролизатом, заслуживают глубокого изучения для их дальнейшего использования в селективном лечении рака без нанесения вреда здоровым клеткам организма пациента. 6. Было выяснено, способствуют ли изменения адгезивной и антилизоцимной активности, вызванные AgNPs, восстановлению чувствительности бактерий к антибиотикам. Отбор проб in vivo проводили до и после лечения мастита коров антибиотиками или AgNPs. Были идентифицированы изоляты и оценена адгезивная и антилизоцимная активность. Эти данные были сопоставлены с результатами, полученными для предварительной обработки контрольных бактерий AgNPs или антибиотиками in vitro. Настоящее исследование показало, что лечение бактерий AgNPs in vitro и in vivo: (1) снижает способность бактерий прилипать к клеткам, вызывая инфекцию, и (2) снижает бактериальную антилизоцимную активность, тем самым повышая активность лизоцима, природного “антибиотика”, присутствующего в живых организмах. Полученные данные вносят вклад в перспективу будущего применения AgNPs для восстановления активности антибиотиков, быстро исчезающих с рынка. 7. Результаты настоящей работы выявили еще две причины свойства AgNPs восстанавливать чувствительность бактерий к антибиотикам. Было показано, что применение AgNPs снижало адгезивную активность бактерий на 23-29% в экспериментах in vitro и in vivo, а применение шести антибиотиков повышало ее на 35% in vitro и было практически неизменным (+2%) в экспериментах in vivo. Те же тенденции наблюдались и в отношении антилизоцимной активности бактерий. После применения AgNPs антилизоцимная активность снижалась на 11-23%; однако после применения антибиотиков она повышалась на 8% (in vitro) и практически не изменялась (-2%) в экспериментах in vivo. Эти результаты показали, что AgNPs: (1) снижает способность бактерий связываться с клетками, необходимыми для последующей клеточной инфекции, и (2) снижает бактериальную антилизоцимную активность. Это два эффекта, повышающих способность AgNPs восстанавливать чувствительность бактерий к антибиотикам. Следовательно, результаты наших работ показали, что обработка бактерий AgNPs in vitro и in vivo снижает способность бактерий вырабатывать устойчивость к лекарственным препаратам из-за (1) снижения способности бактерий избавляться от антибиотиков, (2) снижения их способности прилипать к клеткам, вызывая инфекцию, и (3) снижения антилизоцимной активности бактерий, тем самым повышая активность лизоцима, природного “ антибиотик” присутствует в живых организмах. 8. С помощью флуоресцентно-меченных форм наносеребра изучено распределение наносеребра в легких и кишечнике мышей при аэрозольном применении. Определена скорость выведения наночастиц серебра из дыхательных путей, легких и кишечника, выданы рекомендации по частоте применения препаратов наносеребра для избежания избыточного накопления серебра в организме.

Публикации

1. Богданчикова Н.E., Маклакова М., Виллареал-Гомес L. J., Нефедова Е., Шкиль Н. Н., Плотников Е., Пестряков А. Revealing the Second and the Third Causes of AgNPs Property to Restore the Bacterial Susceptibility to Antibiotics International Journal of Molecular Sciences, V. 24, No 9, 7854 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.3390/ijms24097854

2. Гарсия Гарсия М. Р., Касарес Н., Мартинес Перес Л. А., Куриэль Э. Х., де Хесус Эрнандес А. А., Богданчикова Н.,. Гарибо Д, Родригес-Эрнандес А. Г., Пестряков А., Гамбоа С. С., Ариас Руис Л. Ф., Торрес Бугарин О., Берраондо П. Silver nanoparticles induce a non-immunogenic tumor cell death Journal of Immunotoxicology, V. 20, No. 1, 2175078 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.1080/1547691X.2023.2175078

3. Перес-Каселлес К., Бургос Л., Санчес-Балибреа И., Эгеа Х. А., Фейз Л., Мартин-Вальмаседа М., Богданчикова Н., Пестряков А., Альбуркерке Н. The Effect of Silver Nanoparticle Addition on Micropropagation of Apricot Cultivars (Prunus armeniaca L.) in Semisolid and Liquid Media Plants, V. 12, No 7, 1547 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.3390/plants12071547

4. Плотников Е. В.,Третьякова М. С., Гарибо-Руиз Д., Родригес-Хернандес A. Г.,Пестряков А. Н., Толедано-Маганья Я., Богданчикова Н.Е. A Comparative Study of Cancer Cells Susceptibility to Silver Nanoparticles Produced by Electron Beam Pharmaceutics, V. 15, No 3, 962 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.3390/pharmaceutics15030962

5. - Можно ли лечиться серебром и не посинеть Коммерсантъ, - (год публикации - )