Аннотация результатов, полученных в 2022 году
На первом этапе проекта была разработана документация для проведения клинико-лабораторного исследования роли микробиома кишечника и ротовой полости, мутаций митохондриального генома и воспалительного ответа моноцитов в развитии ИБС у пациентов с ожирением. Проведен скрининг 103 человек и включение в исследование 88 участников: 40 человек с ИБС и ожирением (группа 1) и 48 человек с ожирением без ИБС (группа 2). Средний возраст пациентов с ИБС и ожирением был статистически значимо выше 62,4 (1,1) против 59,2 (1,1) лет в группе пациентов с ожирением без ИБС, p<0,05. В группе пациентов с ожирением и ИБС были статистически значимо более низкие значения общего холестерина: 173,9 (7,3) мг/дл против 198,0 (6,4) мг/дл в группе пациентов с ожирением без ИБС, р<0,05, что объяснялось достоверно большим числом пациентов с ИБС, получающих терапию статинами, р<0,05. Остальные измеренные клинико-лабораторные показатели, такие как индекс массы тела, артериальное давление, толщина КИМ, семейный анамнез ССД, курение статистически значимо не отличались. У всех пациентов первого этапа исследования были получены образцы микробиома кала, слюны и зубного налета. Из данных образцов была выделена ДНК для проведения 16S-RNA секвенирования на втором этапе. Были выделены образцы ДНК из цельной крови участников исследования для определения мутаций митохондриального генома. Уровни гетероплазмии митохондриальной ДНК m.15059G>A, m.14846G>A, m.12315G>A, m.13513G>A, m.14459G>A, m.652delG, m.1555A>G, m.3336T>C, m.3256C>T, m.5178C>A определяли методом ПЦР в режиме реального времени. Выявлено, что уровень мутаций митохондриальной ДНК статистически значимо отличался между группами пациентов с ИБС и без ИБС по одной мутации: уровень варианта m.15059G>A был достоверно выше в группе 1 (пациенты с ИБС) - 51(7)%, в группе 2 (пациенты без ИБС) - 34(1)%, p<0,05. Значения уровней гетероплазмии по остальным исследуемым мутациям статистически значимо не различались в группах пациентов с ожирением с ИБС и без ИБС. В первичной культуре моноцитов/макрофагов крови участников исследования было выявлено, что базальная секреция ФНО-α у пациентов с ИБС была значительно выше, чем в группе пациентов без ИБС: 156,1(26,0) пг/мл и 120,7(11,2) пг/мл, соответственно, данные различия были статистически не значимы, р=0,219. ЛПС-стимулированная секреция ФНО-α у пациентов с ИБС была значимо выше, чем у пациентов без ИБС: 4854,8(451,8) пг/мл против 2982,2(337,1) пг/мл, соответственно, p<0,01. Нестимулированная секреция ФНО-α на 7 сутки инкубации в группе с ИБС была статистически значимо выше, чем у пациентов без ИБС и составила 119,9(7,4) пг/мл и 92,0(6,9) пг/мл, соответственно, p<0,01. Повторно стимулированнная секреция ФНО-α в группе с ИБС была также статистически значимо выше, чем у пациентов 2 группы и составила 128,4(7,5) пг/мл и 95,5(5,9) пг/мл соответственно, p< 0,01. Секреция ФНО-α, измеренная на 7 сутки после смены среды у первично стимулированных ЛПС клеток, составила 141,3 (12,9) пг/мл и 93,4 (7,1) пг/мл у пациентов с и без ИБС, соответственно, данные различия были статистически значимыми, p<0,001. Аналогично измеренные концентрации ИЛ-1β имели статистические значимые различия только при измерении на 7 сутки после смены среды у стимулированных ЛПС клеток и составили 145,3 (18,4) пг/мл у пациентов с ИБС и ожирением против 97,8 (12,5) пг/мл у пациентов с ожирением без ИБС, p<0,05. Остальные различия измеренной концентрации ИЛ-1β во всех исследуемых образцах были статистически не значимы. Были опубликованы 2 обзора «The Role of Adipokines in Inflammatory Mechanisms of Obesity» в журнале International Journal of Molecular Sciences с импакт-фактором 6,208 и «Atheroprotective Effects of Glycyrrhiza glabra L.» в журнале Molecules с импакт-фактором 4,927. Оба журнала входят в 1 квартиль по Scopus. Также по результатам проекта опубликованы тезисы «Monocyte activation in patients with carotid atherosclerosis and obesity», представленные в виде электронного постера на конференции European Atherosclerosis Society 2022.

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
1. В исследование роли микробиома кишечника и ротовой полости, мутаций митохондриального генома и воспалительного ответа моноцитов в развитии ИБС у пациентов без ожирения включено 85 участников: 46 пациентов с ИБС (группа 3) и 39 участников контрольной группы без ожирения и ИБС (группа 0). Участники исследования в группе ИБС не имели достоверных отличий от контрольной группы по полу, возрасту, индексу массы тела, артериальному давлению, статусу курения. Средний возраст пациентов с ИБС составил 63,6 (2,3) лет, в контрольной группе 60,3 (2,0) лет, p>0,05, индекс массы тела составил 25,4 (2,2) в группе ИБС и 26,1 (0,2) кг/м2, p>0,05. По параметрам липидного спектра крови группы статистически значимо не отличались. Уровень общего холестерина составил 5,5 (1,9) ммоль/л в контрольной группе и 5,1 (1,6) ммоль/л в группе ИБС, р>0,05; уровень ЛПНП составил 3,7 (1,7) в группе ИБС и 3,6 (0,6) в контрольной группе, р>0,05. Пациенты в группе ИБС достоверно отличались от контрольной группы по показателям атеросклероза: толщина КИМ сонных артерий составила 0,938 (0,105) мм в группе ИБС и 0,699 (0,211) мм в контрольной группе, р<0,05. В группе пациентов с ИБС были более высокие показатели шкалы АСБ: 1,8 (0,9) против 0,8 (0,3) в контрольной группе, однако данные различия были статистически не значимы, р<0,05. 2. Получены коллекция образцов кала, слюны и зубного налета у участников исследования для изучения состава микробиома. Из данных образцов была выделена ДНК. 3. Уровни гетероплазмии митохондриальной ДНК m.1555A>G, m.3336T>C, m.3256C>T, m.5178C>A определяли в образцах цельной крови участников исследования. Выявлено, что уровень гетероплазмии митохондриальной ДНК 1555A>G не отличался достоверно между группами: 33 (4)% в группе ИБС и 31 (6)% в контрольной группе, р>0,05. Уровень гетероплазмии митохондриальной ДНК 5178C>A был достоверно выше в группе ИБС, 28 (7)% и 19 (7)% в контрольной группе, р<0,05. Уровень гетероплазмии митохондриальной ДНК 12315G>A был выше в группе ИБС, 44 (38)% и 31 (29)%, но отличия между группами не были статистически достоверными ввиду большой вариабельности данных внутри групп, р>0,05. Уровень гетероплазмии митохондриальной ДНК 3336T>C был достоверно выше в группе ИБС, 23 (3)% и 16 (6)% в контрольной группе, р<0,05. 4. Концентрацию цитокинов в первичной культуре моноцитов участников исследования определяли для характеристики воспалительного ответа моноцитов. Выявлено, что базальная и ЛПС-стимулированная секреция ФНО-α у пациентов с ИБС была значимо выше, чем в контрольной группе: в группе ИБС 186,2 (36,5) и 5539 (792) пг/мл, соответственно; в контрольной группе 111,7 (21,9) и 2673 (499) пг/мл, соответственно, р<0,05. Рестимулированная секреция ФНО-α на 7 сутки составила 212,8 (78,5) пг/мл в группе ИБС и 109,4 (24,3) пг/мл в контрольной группе, различия были статистически незначимы, p>0,05. Базальная секреция ИЛ-1β не отличалась достоверно в группах ИБС и контроля, 97,7 (16,2) и 100,4 (10,3) пг/мл, соответственно, p>0,05. ЛПС-стимулированная секреция ИЛ-1β была значимо выше в группе ИБС 1473 (295) пг/мл, чем в контрольной группе, 984 (101) пг/мл, р<0,05. Рестимулированная секреция ИЛ-1β не отличалась достоверно между группами ИБС и контроля, 98,6 (12,8) и 93,6 (15,4) пг/мл, соответственно, p>0,05.