КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 22-15-00288

НазваниеРоль генов, кодирующих шапероны семейства Hero, в развитии и течении ишемического инсульта

РуководительБушуева Ольга Юрьевна, Кандидат медицинских наук

Организация финансирования, регион Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, Курская обл

Период выполнения при поддержке РНФ

2022 г. - 2024 г.

Конкурс№68 - Конкурс 2022 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами».

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины, 05-402 - Медицинская генетика

Ключевые словаишемический инсульт; белки Hero; белки «теплового шока»; шапероны; генетические варианты; генная экспрессия; геномное редактирование; нокаут гена; ишемия головного мозга; межгенные взаимодействия; генные сети; генно-средовые взаимодействия

Код ГРНТИ76.03.00

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Несмотря на значительные усилия, предпринимаемые мировым медицинским сообществом в области профилактики и лечения ишемического инсульта (ИИ), это заболевание остается третьей по значимости причиной смертности во всем мире и является ведущей причиной инвалидизации, снижения когнитивных функций и деменции. При ишемии нервной ткани гиперпродукция активных форм кислорода, кальциевая перегрузка и накопление ионов водорода опосредуют переход гипоксического стресса в химический. Подобное нарушение гомеостаза приводит к протеотоксическому эффекту накопленных метаболитов и денатурации внутриклеточных протеинов. Именно критическое накопление поврежденных ферментов и структурных белков вызывает необратимые изменения, которые приводят к некрозу или программируемой клеточной гибели нейронов. Для снижения структурно-функциональных последствий гипоксического и других негативных воздействий в клетках всех изученных организмов функционирует особый класс белков – шапероны. Главная функция шаперонов заключается в восстановлении нативной третичной и четвертичной структуры поврежденных белков. В марте 2020 года учеными из Японии был открыт новый класс шаперонов, белки Hero, кодируемые генами: C9ORF16, C11ORF58, BEX3, SERBP1, SERF2 и C19ORF53. За счет необычной термостойкости и неструктурированной природы, этот класс белков был назван термостойкими неизвестными (heat-resistant obscure - термостойкие неизвестные, Hero). Их основной механизм действия заключается в физическом экранировании других белков. Подобная функция обеспечивается гибкой структурой и высоким отрицательным или положительным зарядом молекул (Tsuboyama et al, 2020). Особый интерес также представляет показанная физико-химическая устойчивость белков Hero, имеющих очень специфичную структуру и выдерживающих экстремальные условия. На данный момент уже известно, что Hero обладают способностью стабилизировать различные белки как in vitro, так и в клетках; предотвращать скопление патологических белков в клетках; проявлять выраженный белок-стабилизирующий и антиагрегационный эффекты, например, предотвращать патологическую агрегацию TDP-43; подавлять нейротоксичность; снижать протеотоксический стресс. Учитывая тот факт, что семейство белков Hero открыто совсем недавно, генетические аспекты их вовлеченности в предрасположенность к заболеваниям человека практически не изучены и принимая во внимание важнейшую роль шаперонов в молекулярных механизмах развития и течения ишемического инсульта, данное направление исследований представляется крайне актуальным. В рамках проекта впервые в мире планируется проведение комплексного молекулярного анализа вовлеченности генов, кодирующих белки Hero, в формирование предрасположенности и течение ИИ. Кроме того, для оценки того, насколько активно клетки «рекрутируют» белки Hero при ишемии, планируется оценка уровня экспрессии генов Hero в различных постинсультных периодах в слюне пациентов с ИИ (слюна будет исследована как наиболее релевантный маркер экспрессии генов в головном мозге). На основании полученных результатов будут отобраны наиболее клинически значимые гены Hero и изучена их роль в физиологии и ишемической резистентности головного мозга на трансгенных животных моделях. Для этого планируется создать мышей с нокаутом или гиперэкспрессией (в случае летальности нокаута) одного из генов, кодирующего белок Hero. У данной линии будет проведен анализ транскриптома тканей головного мозга. Также трансгенные животные будут подвергнуты моделированию ишемического повреждения головного мозга с последующим комплексным изучением ишемической резистентности: проведение функциональных тестов для оценки неврологического дефицита, анализ гистологической картины головного мозга, анализ экспрессии генов, отражающих функциональное состояние головного мозга.

Ожидаемые результаты
В рамках данного проекта впервые в мире будет проведено молекулярно-генетическое исследование роли белков Hero в аспекте связи с риском развития и тяжестью течения ишемического инсульта (ИИ). Для реализации проекта будет использован системный подход, включающий биоинформатический анализ, генотипирование, анализ транскриптома и фенотипирование животных с нокаутом генов, кодирующих Hero. На выборке, составляющей не менее 1000 больных ишемическим инсультом/1000 здоровых индивидуумов, будет исследована роль полиморфизма генов семейства Hero в формировании предрасположенности к развитию ишемического инсульта и его подтипов. Впервые будут проведены функциональные исследования генов, кодирующих белки Hero (анализ генной экспрессии) как у здоровых, так и при различных типах ишемического инсульта. Проведение функциональных исследований в различные периоды инсульта (острейший, острый) позволит получить более полную информацию о молекулярных механизмах вовлеченности исследуемых генов в патогенез ИИ и его подтипов. Впервые будут созданы и охарактеризованы трансгенные животные с нокаутом или гиперэкспрессией клинически значимых генов Hero. Впервые на трансгенных животных моделях будет проведено изучение роли Hero в ишемическом повреждении головного мозга. С практической точки зрения, данное исследование не только позволит провести комплексный анализ роли нового класса шаперонов в развитии ИИ, но и откроет потенциал для новых методов терапии ИИ, в том числе, основанных на применении рекомбинантных белков Hero (ввиду особых физико-химических свойств, рекомбинантные Hero должны обладать высокой биодоступностью и стабильностью, что позволяет позиционировать их как потенциально перспективный класс фармакологических препаратов для нейропротекции).

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
В рамках выполнения проекта в 2022 г. проведен отбор генов и полиморфизмов для проведения молекулярно-генетических исследований. Всего для исследования были отобраны 31 SNPs в 6 генах Hero (BEX3, C11ORF58, C19ORF53, C9ORF16, SERBP1, SERF2), а также 59 SNPs в 30 генах белков теплового шока, ко-шаперонов и регуляторов шаперонов (BAG1, BAG2, BAG3, BAG4, BAG5, DNAJA1, DNAJA3, DNAJB1, DNAJB2, DNAJC7, HSBP1, HSF1, HSF2, HSP90AA1, HSPA12B, HSPA14, HSPA1A, HSPA1B, HSPA1L, HSPA2, HSPA4, HSPA5, HSPA6, HSPA8, HSPA9, HSPB8, HSPD1, ST13, STIP1, STUB1). При отборе ДНК-маркеров учитывали гаплотипическую структуру генов, потенциальную функциональную значимость SNPs, а также частоту минорного аллеля в европейских популяциях (0,05 и более). Функциональная значимость отобранных для исследования SNPs оценивалась биоинформатически с помощью спектра инструментов: FuncPred (SNPinfo Web Server, https://snpinfo.niehs.nih.gov/snpinfo/snpfunc.html), HaploReg (v4.1) (http://archive.broadinstitute.org/mammals/haploreg/haploreg.php), rSNPBase (http://rsnp.psych.ac.cn/index.do); RegulomeDB (version 2.0)( https://regulomedb.org/regulome-search/), atSNP (http://atsnp.biostat.wisc.edu/search), QTLbase (http://mulinlab.org/qtlbase/search.html), GTex Portal (https://gtexportal.org/home/), Blood eQTL browser (https://www.eqtlgen.org/). Генотипирование 49 генетических вариантов проведено на полной выборке больных/контроля (не менее 2000 образцов по каждому локусу). Генотипирование 41 генетического варианта проведено в объеме 1290 образцов. Для генотипирования применяли 2 подхода: метод масс-спектрометрии MALDI-TOF с использованием платформы MassArray Analyzer 4 (Agena Bioscience) и методом ПЦР в режиме реального времени c дискриминацией аллелей с помощью TaqMan-проб. Данные молекулярно-генетических исследований, выполненных в течение 2022 года, использовались для проведения предварительных генетико-статистических расчетов. Для сравнения частот минорных аллелей исследованных SNPs жителей Центральной России с популяциями (было выполнено для SNPs, генотипированных на полной выборке) пользовались данными, опубликованными в рамках проекта «1000 геномов», Фаза 3 (http://www.ensembl.org) и зарегистрированными в европейских популяциях (GBR, IBS, TSI, FIN, CEU). Установлено, что частоты минорных аллелей в большинстве исследованных SNPs соответствуют европейским популяциям. Различия (между 3 и более из 5 анализируемых европейских популяций) обнаружены только для 3 SNPs: rs12566098 SERBP1, rs12561767 SERBP1, rs196336 BAG3. Анализ ассоциаций генотипов с риском развития ишемического инсульта (ИИ) осуществлялся методом логистического регрессионного анализа. Для интерпретации результатов анализа ассоциаций SNPs с ИИ пользовались лог-аддитивной моделью. В результате проведенного анализа ассоциаций SNPs в общей группе больных/контроля, установлены связи с 11-ю SNPs, 7 из которых локализованы в генах Hero (rs12566098 SERBP1, rs10766342 C11ORF58, rs11024032 C11ORF58, rs11826990 C11ORF58, rs3203295 C11ORF58, rs10832676 C11ORF58, rs4757429 C11ORF58), 4 – в генах белков теплового шока и их корегуляторов - rs10892958 HSPA8, rs11682567 HSPD1, rs2227956 HSPA1L и rs7749960 BAG2. Для SNPs, генотипированных на полной выборке (49 SNPs), помимо анализа ассоциаций в общих группах, был проведен анализ ассоциаций в зависимости от пола, статуса курения, возраста манифестации ИИ, локализации ИИ. У мужчин обнаружены связи с 5-ю генетическими вариантами: 2-мя SNPs генов Hero (rs12566098 SERBP1 и rs10832676 C11ORF58) и 3-мя SNPs генов белков теплового шока rs17155992 HSPA14, rs1136141 HSPA8, rs10892958 HSPA8. У женщин установлены связи исключительно с полиморфными локусами генов Hero rs12566098 SERBP1, rs11826990 C11ORF58, rs4644832 SERF2, rs2901077 C19ORF53, rs2900262 C9ORF16 (всего 5 генетических вариантов). Анализ ассоциаций исследуемых ДНК-маркеров в зависимости от статуса курения выявил, что у некурящих индивидуумов с развитием ИИ связаны 3 SNPs в генах Hero (rs12566098 SERBP1, rs1058074 SERBP1, rs4644832 SERF2) и 1 SNP в гене белка теплового шока семейства А (Hsp70) - rs1136141 HSPA8. У курящих индивидуумов с развитием ИИ ассоциированы rs753856 HSPA6, rs556439 HSF2, rs10766342 C11ORF58, rs7928675 C11ORF58, rs11826990 C11ORF58, rs3203295 C11ORF58, rs10832676 C11ORF58, rs1136141 HSPA8, rs10892958 HSPA8, rs7155973 HSP90AA1. Анализ влияния исследованных SNPs на общебиологические и клинико-лабораторные показатели у больных ИИ выявил связь rs11666524 C19ORF53 и rs556439 HSF2 с индексом массы тела; rs4655707, rs12566098, rs6702742, rs1058074, rs12561767 SERBP1 – с площадью очага поражения при инсульте; rs196336, rs196329 BAG3 – с уровнем общего холестерина; rs1846936, rs3802963 C11ORF58 - с уровнем триглицеридов; rs13161158 HSPA4 – с протромбиновым временем; rs7155973 HSP90AA1, rs1136141 HSPA8, rs13161158 HSPA4 – с показателем международного нормализованного отношения; rs4655707 SERBP1, rs2277947 C19ORF53, rs6702742 SERBP1, rs11024030, rs11024032, rs11826990, rs3203295, rs4757429 C11ORF58, rs12561767 SERBP1 – с показателем активированного частичного тромбопластинового времени. Методом MB-MDR установлены 12 наиболее значимых двухлокусных моделей эпистатических взаимодействий, ассоциированных с развитием ИИ. Во все наилучшие двухлокусные модели межгенных взаимодействий вошли исключительно полиморфные варианты генов Hero - C11ORF58 и C19ORF53. Методом MB-MDR установлены 24 наиболее значимых трехлокусных моделей межгенных взаимодействий, ассоциированных с развитием ИИ. Значимость всех моделей была подтверждена с помощью пермутационного теста. Основу всех наилучших трехлокусных моделей межгенных взаимодействий составили полиморфные локусы генов Hero - rs2277947 C19ORF53 и rs11666524 C19ORF53, которые вошли во все наилучшие трехлокусные модели межгенных взаимодействий. В наилучшие двухуровневые модели генно-средовых взаимодействий вошли как полиморфные локусы генов Hero (SERBP1, C11ORF58), так и других генов, кодирующих белки теплового шока и их регуляторы (HSPA8, HSPA6, HSF2, HSPA1B, BAG1, BAG3, HSPA12B, HSPA9, HSPA1A, HSPA14, DNAJB1). Основу наиболее значимых 3-уровневых моделей генно-средовых взаимодействий, помимо курения, вошли полиморфные локусы генов Hero (C19ORF53, C11ORF58, SERBP1, SERBP1), а также генов семейств HSP и их ко-регуляторов (HSPA8, HSPA12B, HSPA6, HSF2, DNAJB1). Проведенное функциональное аннотирование полиморфных вариантов генов семейства Hero установило их высокий регуляторный потенциал: связывание с количественными признаками экспрессии, метилирования ДНК (cis-eQTL, cis-mQTL-эффекты), влияние на модификации гистонов, влияние на связывание ДНК с факторами транскрипции, совместно участвующими в патогенетически значимых для ИИ биологических процессах. В первый год выполнения проекта опубликована 1 статья «C9orf16 (BBLN) gene, encoding a member of Hero proteins, is a novel marker in ischemic stroke risk» в журнале «Research Results in Biomedicine», индексируемом Scopus. Научные результаты, были представлены в виде постерного доклада «Genes, encoding heat-resistant obscure (Hero) proteins: new players in ischemic stroke pathogenesis» на конференции BGRS/SB-2022 (Новосибирск, 2022) (https://bgrssb.icgbio.ru/2022/ru/2022/07/01/genes-encoding-heat-resistant-obscure-hero-proteins-new-players-in-ischemic-stroke-pathogenesis/).

Публикации

1. Кобзева К. А. , Шиленок И. В. , Белых А. Е., , Гуртовой Д. Е. , Бобылева Л. А. , Крапива А. Б. , Стецкая Т. А. , Быканова М. А. , Меженская А. А. , Лысикова Е. А. , Фрейдин М. Б., Бушуева О. Ю. C9orf16 (BBLN) gene, encoding a member of Hero proteins, is a novel marker in ischemic stroke risk Research Results in Biomedicine., 2022;8(3):278-292 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.18413/2658-6533-2022-8-3-0-2

2. Бушуева О., Солдатов В., Белых А., Кобзева К., Солдатова М., Гуртовой Д., Шиленок И., Дейкин А. Genes, encoding heat-resistant obscure (Hero) proteins: new players in ischemic stroke pathogenesis Abstracts / Institute of Cytology and Genetics, the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences. – Novosibirsk: ICG SB RAS, 2022. – 1148 p., The Thirteenth International Multiconference (04–08 July 2022, Novosibirsk, Russia); Bioinformatics of Genome Regulation and Structure/Systems Biology (BGRS/SB-2022). – 2022. – P. 398-398. (год публикации - 2022) https://doi.org/10.18699/BGRS/SB-2022-000

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
На 2 этапе выполнения проекта в общей группе больных/контроля установлены связи ишемического инсульта (ИИ) с 8-ю SNPs в генах шаперонов и генах GWAS: BAG2, HSPA1L, PITX2, CASZ1, AC016251.1, ATXN2, TWIST1. Анализ ассоциаций в зависимости от пола выявил, что у мужчин с ИИ связаны 9 генетических вариантов в генах DNAJA2, BAG2, HSPA1B, HSPA1L, PITX2, ZFHX3, AC016251.1, ATXN2. У женщин установлены связи с 5-ю генетическими вариантами: в генах PITX2, CASZ1, PRDM16, AC016251.1, ATXN2. У курильщиков с развитием ИИ связаны 3 SNPs: в генах BAG2, MMP3, AC016251.1. У некурящих индивидуумов с развитием ИИ связаны 5 SNPs в генах HSPA1L, PITX2, AC016251.1, ATXN2, TWIST1. У индивидуумов с низким уровнем потребления свежих овощей и фруктов с развитием ИИ связаны 9 SNPs: в генах DNAJB1, HSBP1, HSPA4, FGF5, PITX2, LINC02577, ZFHX3, AC016251.1, ZCCHC14. У индивидуумов с нормальным уровнем потребления свежих овощей и фруктов с развитием ИИ связаны 5 SNPs: в генах BAG2, HSP90AA1, DENND5A, CASZ1, AC016251.1. Анализ ассоциаций SNPs, исследованных на 2 этапе выполнения проекта, с клинико-лабораторными показателями выявил, что полиморфные варианты генов HSPA4, HSPA5, HSPA1L, BAG3 ассоциированы с индексом массы тела у больных ИИ; SNPs генов DENND5A, FURIN, CDK6, CENPQ, HSPB8 – с возрастом манифестации ИИ; SNPs генов BAG3, STUB1, HSPD1, HSPA1L, DNAJB1 - с количеством инсультов; rs12682626 BAG4 – с площадью очага поражения при инсульте; SNPs HSPA14, PRDM16, BAG5 – с уровнем общего холестерина у больных ИИ; SNPs PRDM16, LINC02577 – с уровнем триглицеридов; SNPs FGF5, MMP3, ATXN2, HSPD1, STUB1; HSPA1B – с протромбиновым временем; SNPs HSPA14, LINC02577, AC016251.1, SH3PXD2A, HSPD1 – с показателем международного нормализованного отношения; SNPs DENND5A, BAG5, STIP1 – с показателем активированного частичного тромбопластинового времени. Методом MB-MDR (в анализ включали данные генотипирования, полученные на 1 и 2 этапах выполнения проекта) установлены 2- и 3-локусные модели межгенных взаимодействий, ассоциированные с повышенным риском ИИ. Наилучшие двухлокусные G×G-модели формировались исключительно из полиморфных вариантов генов Hero (в первую очередь C19orf53 и C11orf58); при этом наиболее значимые трехлокусные G×G-модели составляли SNPs генов Hero во взаимодействии с локусами GWAS. Также методом MB-MDR установлены 2- и 3-уровневые модели генно-средовых взаимодействий, ассоциированные с риском развития ИИ. Наилучшие 2-уровневые G×Е-модели формировались за счет курения и преимущественно полиморфных локусов генов шаперонов, в т.ч. кодирующих белки теплового шока и их регуляторы. Наилучшие 3-уровневые G×Е-модели формировались за счет курения, генов шаперонов, а также полиморфных вариантов генов Hero. Анализ сети взаимодействий генов, ассоциированных с развитием ИИ, выявил их физические взаимодействия, ко-экспрессию, участие в общих патогенетических путях, а также взаимодействия через общие белковые домены, биоинформатически предсказанные взаимодействия. Обнаружены 10 биологических процессов (GO), характеризующихся сверхпредставительством для ассоциированного с ИИ набора генов; данные GO вовлечены преимущественно в процессы, связанные с регуляцией протеостаза (фолдингом белков, ответом клетки на неправильно свернутые белки, рефолдингом, фолдингом 'de novo', ответом на топологически некорректные белки), а также процессы, участвующие в регуляции «теплового шока», играющего значительную роль в адаптации клетки в условиях стресса. Проведено комплексное функциональное аннотирование SNPs, ассоциации которых с риском развития ИИ установлены на 1 и 2 этапах выполнения проекта. 35 SNPs влияют на связывание ДНК с ТФ, совместно участвующими в регуляции апоптоза нейронов, клеточном ответе на гипоксию и оксидативный стресс, пролиферацию эндотелия сосудов, в клеточном ответе на факторы воспаления, а также в дифференцировке нейронов, нейрогенезе и васкулогенезе. 26 ИИ-ассоциированных SNPs посредством cis-eQTL влияют на экспрессию еще 150 генов в тканях головного мозга, кровеносных сосудах и клетках крови, совместно участвующих в рефолдинге белка клеточной реакции на тепловой шок. 22 SNPs ассоциированы с cis-mQTL-опосредованным влиянием на уровень метилирования CpG-сайтов в тканях головного мозга. 17 SNPs характеризуются выраженными влияниями на модификации гистонов в клетках крови и тканях головного мозга. Проведенный сравнительный анализ экспрессии генов Hero в образцах, выделенных из крови, установил различия между контролем и больными в острейшей фазе инсульта в уровне экспрессии 2 генов: C19orf53 и SERBP1. Уровень экспрессии генов Hero в ишемизированной/не затронутой ишемией ткани мозга человека характеризуется вариабельностью, однако различия не достигают уровня статистически значимых. В результате проведения серии экспериментов по созданию мыши с нокаутом в гене D8Ertd738e (ортолог C19orf53) методом CRISP/CAS9 было получено пять первичных трансгенов, в которых обнаружены различные мутации целевого гена, включая мутации со сдвигом рамки считывания, протяженные делеции; вставки. Получено поколение F1. Проводится молекулярно-генетический анализ поколения F1 для определения вариантов вертикально переданных мутаций. В 2023 г. получены 9 патентов на изобретения; опубликованы 4 статьи Wos/Scopus, из которых 1 статья – в Q1; 1 статья (Scopus) принята в печать. Ссылки на опубликованные в 2023 г. статьи: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37240062/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37372351/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37252629/ http://iramn.ru/journals/bbm/2023/10/7717/

Публикации

1. Белых А.Е., Солдатов В.О., Стецкая Т.А., Кобзева К. А., Солдатова М. О., Полоников А. В., Дейкин А. В., Чурносов М.И., Фрейдин М.Б., Бушуева О.Ю. Polymorphism of SERF2, the gene encoding a heat-resistant obscure (Hero) protein with chaperone activity, is a novel link in ischemic stroke IBRO Neuroscience Reports, 2023. – Vol. 14. – P. 453-461 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.1016/j.ibneur.2023.05.004

2. Кобзева К.А., Солдатова М.О., Стецкая Т.А., Солдатов В.О., Дейкин А. В., Фрейдин М.Б., Быканова М.А., Чурносов М.И., Полоников А.В., Бушуева О.Ю. Association between HSPA8 Gene Variants and Ischemic Stroke: A Pilot Study Providing Additional Evidence for the Role of Heat Shock Proteins in Disease Pathogenesis Genes, 2023. – V. 14. – №. 6. – P. 1171. (год публикации - 2023) https://doi.org/10.3390/genes14061171

3. Стецкая Т.А., Кобзева К.А., Зайцев С.М., Шиленок И.В., Комкова Г.В., Горяинова Н.В., Бушуева О.Ю. HSPD1 gene polymorphism is associated with an increased risk of ischemic stroke in smokers RESEARCH RESULTS IN BIOMEDICINE, - (год публикации - 2024)

4. Стецкая Т.А., Крапива А.Б., Кобзева К.А., Гуртовой Д.Е., Комкова Г.В., Полоников А.В., Бушуева О.Ю. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ АДАПТЕРНЫХ БЕЛКОВ ST13, STIP1 И РИСК ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА: ПИЛОТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2023. – Т. 176. – №. 10. – С. 477-481. (год публикации - 2023) https://doi.org/10.47056/0365-9615-2023-176-10-477-481

5. Шиленок И.В., Кобзева К.А., Стецкая Т.А., Фрейдин М.Б., Солдатова М.О., Дейкин А. В., Солдатов В.О., Чурносов М.И., Полоников А.В., Бушуева О.Ю. SERPINE1 mRNA Binding Protein 1 Is Associated with Ischemic Stroke Risk: A Comprehensive Molecular-Genetic and Bioinformatics Analysis of SERBP1 SNPs International Journal of Molecular Sciences, 2023. – V. 24. – №. 10. – P. 8716 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.3390/ijms24108716

6. Бушуева Ольга Юрьевна Способ генотипирования полиморфного локуса rs10104 (A>G) гена C19orf53 у человека методом ПЦР в режиме «реального времени» с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов -, №2808842 (год публикации - )

7. Бушуева Ольга Юрьевна, Гуртовой Денис Евгеньевич Способ прогнозирования риска развития ишемического инсульта у курильщиков популяции Центральной России на основе генотипирования полиморфизма rs11682567 (T>G) гена HSPD1 -, №2805392 (год публикации - )

8. Бушуева Ольга Юрьевна, Кобзева Ксения Андреевна Способ генотипирования полиморфного локуса rs12561767 (G>A) гена SERBP1 у человека методом ПЦР в режиме «реального времени» с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов -, №2803522 (год публикации - )

9. Бушуева Ольга Юрьевна, Кобзева Ксения Андреевна Способ генотипирования полиморфного локуса rs8107914 (С>Т) гена C19orf53 у человека методом ПЦР в режиме «реального времени» с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов -, №2808846 (год публикации - )

10. Бушуева Ольга Юрьевна, Полоников Алексей Валерьевич Способ генотипирования полиморфного локуса rs346158 (Т>С) гена C19orf53 у человека методом ПЦР в режиме «реального времени» с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов -, №2808839 (год публикации - )

11. Бушуева Ольга Юрьевна, Полоников Алексей Валерьевич Способ прогнозирования риска развития ишемического инсульта у курящих женщин популяции Центральной России на основе генотипирования полиморфизма rs1136141 (G>A) гена HSPA8 -, №2806497 (год публикации - )

12. Бушуева Ольга Юрьевна, Полоников Алексей Валерьевич Способ генотипирования полиморфного локуса rs6702742 (A>G) гена SERBP1 у человека методом ПЦР в режиме «реального времени» с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов -, №2806911 (год публикации - )

13. Бушуева Ольга Юрьевна, Полоников Алексей Валерьевич, Кобзева Ксения Андреевна, Шиленок Владислав Валерьевич Способ генотипирования полиморфного локуса rs346157 (A>G) гена C19orf53 у человека методом ПЦР в режиме «реального времени» с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов -, №2808841 (год публикации - )

14. Бушуева Ольга Юрьевна, Солдатова Мария Олеговна Набор праймеров и зондов для генотипирования полиморфного локуса rs12566098 (C>G) гена SERBP1 у человека методом ПЦР в режиме "реального времени" -, №2807808 (год публикации - )