Аннотация результатов, полученных в 2022 году
1. В рамках подготовительного этапа проекта проведен биоинформатический анализ имеющихся в международных базах данных нуклеотидных последовательностей ВГЕ, выделенных от оленей. Цель этапа: восстановить историю передачи ВГЕ с помощью Байесовского анализа и определить, являются ли случаи заражения оленей ВГЕ генотипов 3 и 4 (ВГЕ-3 и ВГЕ-4) спилловером (случайной передачей) или следствием передачи возбудителя в популяции оленей. Результаты проведенного анализа показали, что все выявленные кластеры ВГЕ, содержащие последовательности как оленей, так и свиней, произошли от предковых штаммов свиней. Паттерны передачи ВГЕ-3 и ВГЕ-4 у копытных, реконструированные с помощью байесовского анализа, указывают на то, что анализируемые виды оленей являются истинными хозяевами ВГЕ, что является обоснованием дальнейшего поиска ВГЕ среди других видов оленей, в первую очередь у северных. Однако дикие и домашние свиньи часто являются основным источником инфекции для жвачных животных, проживающих в одних и тех же районах. 2. На следующем этапе исследования была определена распространенность маркеров ВГЕ-инфекции среди оленеводов и членов их семей, проживающих в Момском регионе Республики Саха (Якутия), частота выявления анти-ВГЕ IgM и IgG в обследованной популяции, составила 3,9% (15/382, 95% ДИ: 2,3–6,4%) и 2,4% (9/382 95% ДИ: 1,2–4,5%) соответственно, что не отличалось (p=0,3326) от частоты выявления IgG среди населения республики Саха (Якутия) не связанного с оленеводством (3,7% (19/519) 95% ДИ: 2,3–5,7%, Slukinova O et al, 2021). Только 1 образец сыворотки крови содержал анти-ВГЕ и IgM и IgG одновременно. Примечательно, что в ранее проведённом нами исследовании (Slukinova O et al, 2021) антитела класса IgM свидетельствующие о недавно перенесенной инфекции не выявлялись среди оленеводов (0/86) Оленекского эвенкийского национальный района. По результатам проведения ОТ-ПЦР было установлено, что 8 из 15 IgM+ образцов, содержат фрагменты кДНК длиной порядка 350 нкл, что может указывать на наличие искомого участка генома ВГЕ. Для подтверждения наличия специфический нуклеотидных последовательностей и исключения присутствия в образцах неспецифических продуктов реакции, 8 потенциально положительных образцов будут отсеквенированы в начале 2023 года. 3. Собрана рабочая коллекция сывороток крови и фекалий от домашних оленей, обитающих на территории Оймяконского района Республики Саха (Якутия). Общая частота выявления анти-ВГЕ IgG в исследуемых образцах сыворотки крови составила 28,3% (134/474, 95% ДИ: 24,4–32,5%). Среди оленят до 6 месяцев анти-ВГЕ IgG были выявлены в 11,3% случаев, что достоверно ниже чем в возрастных группах 2-4 года - 35,7% (95% ДИ: 25,5–47,4%), 5-6 лет - 33,15% (95% ДИ: 26,7–40,2%), а также среди всех обследованных животных вместе взятых (критерий Фишера, p=0,0029; p=0,0016; p=0,0080 соответственно). Во всех старших возрастных группах (2-4 лет, 5-6 лет, 7-8 и >10 лет) частота встречаемости IgG достоверно не отличалась и находилась в пределах 23,6-28,2%. 4. С целью расширении географии исследования нами была собрана дополнительная коллекция сывороток крови от северных оленей (n=97), содержащихся в Родовой оленеводческой промысловой общине, расположенной в Зейском районе Амурской области, а также парных образцов (сыворотки крови + фекалии) от домашних свиней, обитающих на двух свинофермах в Тамбовском (n=100) и Константиновском (n=100) районах Амурской области. Данная территория представляет особый интерес, так как это единственное место наложения ареалов северного оленя и других копытных, у которых ранее выявляли ВГЕ-3 и ВГЕ-4 (кабаны, домашние свиньи, косуля, благородный олень).

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
1. За время выполнения проекта была сформирована обширная коллекция ценнейшего биологического материала, с точки зрения эпидемиологии вирусных инфекций: сывороток крови, собранных в труднодоступном регионе- Арктической зоне Республики Саха (Якутия) от жителей оленеводческих поселений (n= 367); сывороток крови (n=497) и образцов фекалий (n=491) от северных оленей Республики Саха(Якутия); сывороток крови северных оленей (n=96); парных образцов сывороток крови (n=197) и фекалий от домашних свиней (n=197) Амурской области. 2. Получены данные о частоте выявления анти-ВГЕ IgG среди северных оленей Республики Саха (Якутия), данный показатель составил 15,5% (77/497; 95% ДИ 12,6–19,0%), что свидетельствует о довольно широком распространении инфекции, вызываемой ВГЕ или антигенно сходным вирусом, среди поголовья домашних северных оленей в Якутии. Выявление анти-ВГЕ у северных оленей в настоящем исследовании не обязательно свидетельствует о циркуляции среди этих животных именно вируса вида Paslahepevirus balayani, поскольку для капсидных белков разных представителей семейства Hepeviridae продемонстрирована перекрестная антигенная реактивность в других иностранных исследованиях. Именно антитела к капсидному белку ВГЕ являются, как правило, мишенью для серологических тестов, используемых для диагностики гепатита Е, в том числе для тест-системы, применявшейся в настоящем исследовании. Таким образом, реактивность сыворотки крови северных оленей в нашем исследовании может свидетельствовать о наличии антител к ВГЕ или другим ВГЕ-подобным вирусам. Частота выявления анти-ВГЕ достоверно увеличивалась с 3,5% (4/113; 95% ДИ 1,1–9,0%) у оленят в возрасте 3–6 мес до 25,0% (17/68; 95% ДИ 16,1–36,5%) у оленей в возрасте 2–4 года (р < 0,0001), соответственно нами впервые продемонстрировано достоверное увеличение частоты выявления анти-ВГЕ по мере взросления животных – по сравнению с оленятами в возрасте 4–6 мес, распространенность анти-ВГЕ возрастала среди животных, достигших 2 лет, и сохранялась примерно на одном уровне в более старших возрастных группах. Средняя частота выявления анти-ВГЕ в настоящем исследовании (15,5%) оказалась сходной с долей серопозитивных полуодомашненных северных оленей в Норвегии (15,7%) [Rinaldo CH et al, 2021], но значительно выше, чем в Канаде (8,8%) [Weger S et al, 2017]. 3. В связи с тем, что нам оказался недоступен метод определения РНК ВГЕ методом NGS, были подобраны новые универсальные для хепевирусов праймеры и отработан протокол амплификации нового фрагмента с использованием панели контрольных образцов ВГЕ генотипов 1,3 и 4 и секвенирование полученных ампликонов для подтверждения специфичности методом по Сенгеру. После успешной отработки протокола, на наличие РНК ВГЕ /ВГЕ-подобного вируса были проанализирован 491 образец фекалий от северных оленей, однако РНК вируса выявлена не была. 4. Крайне неожиданными и уникальными явились результаты по серопозитивности полуодомашненных северных оленей, обитающих в Амурской области. Частота выявления анти-ВГЕ IgG составила 92,7% (89/96, 95% ДИ 85,5-96,7%). Широкий разброс показателей коэффициента позитивности исследуемых образцов (23,6% образцов имели КП от 1 до 1,9; 24,7%- 2-2,9; 10,1% - 3-3,9; 22,5% - 4-4,9; 7,9%-5-5,9; 4,5% - 6-6,9; b 5,6% - больше 8) указывает на отсутствие риска нарушения правил сбора биологического материала, о котором первым делом подумали авторы исследования получив такие высокие показатели пораженности северных оленей в исследуемом регионе. При этом, не смотря на такой высокий показатель распространенности маркера анти-ВГЕ во всей исследуемой выборке, среди животных возрастной группы от года до 2 лет, анти-ВГЕ встречались достоверно реже, чем у особей 3 лет и старше (77,3% (17/22) и 96,9% (62/64), р=0,0108 соответственно), что ещё раз подтверждает нашу теорию о том, что большинство случаев заражения ВГЕ у северных оленей, по аналогии с домашними свиньями происходит у животных молодого возраста, после чего у них сохраняется гуморальный иммунитет. Такие высокие показатели распространенности анти-ВГЕ в Амурской области могут быть ассоциированы с возможностью постоянного контакта полуодомашненных северных оленей с другими копытными (кабаны, домашние свиньи, косули, благородные олени) в результате совпадения их ареалов обитания в Амурской области и осуществлением межвидового перехода. 5. Также в Амурской области при оценке распространенности маркеров перенесенной ВГЕ-инфекции среди животных двух крупнейших свиноферм области, Анти-ВГЕ IgG выявлялись в 92,86% (91/97, 95% ДИ 86,9-97,д4%) в Тамбовском и 100% (100/100, 95% ДИ 95,6-100%) в Константиновском районе. Сравнение полученных данных с двух свиноферм продемонстрировало наличие достоверных отличий между двумя обследованными регионами (p=0.0060), что может быть связано как с различной распространенностью вируса, так и с различиями в возрастных группах животных первой (поросята 3-7 месяцев) и второй свиноферм (взрослые животные от 1 года до 6 лет) соответственно. Полученные данные указывают на крайне активную циркуляцию ВГЕ на свинофермах Амурской области. Во всех 197 образцах фекалий с двух свиноводческих хозяйств (n=197) не было обнаружено РНК ВГЕ. 6. Проведен сравнительный анализ распространенности анти-ВГЕ среди жителей оленеводческих поселений арктической зоны Республики Саха(Якутия) и группой сравнения представленной условно здоровым населением Республики. Частота выявления анти-HEV IgG в исследуемой когорте (2,5%, 9/367) оказалась существенно ниже по сравнению с контрольной группой (6,7%, 45/670, p=0,0031), в первую очередь это было связано со статистически значимыми различиями среди старшего поколения участников от 50 лет и старше. Низкая серологическая распространенность ВГЕ среди населения Арктической зоны свидетельствует о низком риске заражения ВГЕ. Однако относительно высокая доля сывороток, реагирующих на анти-HEV IgM в нашем исследовании (4,1%), является подозрительной, учитывая тот факт, что все участники исследования не имели каких-либо симптомов острого заболевания и не сообщали о недавнем заболевании. Кроме того, только одна из 15 реактивных сывороток содержала также антитела IgG к ВГЕ. Тем не менее, было показано, что анализ IgM на антитела к ВГЕ, использованный в этом исследовании, имеет чувствительность и специфичность 98% (95% ДИ, 88–99,9%) и 95,2% (95% ДИ, 91,3–97,4%). соответственно [Drobeniuc, J et al, 2010], и большинство реактивных IgM к ВГЕ образцов имели значения COI 1,5 или выше, что указывает на низкую вероятность ложноположительных результатов. Отсутствие обнаружения РНК ВГЕ в сыворотке, реактивной к анти-ВГЕ IgM, также не является показателем неспецифической реактивности, поскольку виремия при ВГЕ-инфекции может быть преходящей. В совокупности эти данные свидетельствуют о возможной недавней бессимптомной инфекции ВГЕ у участников, реагирующих на анти-ВГЕ IgM.