Аннотация результатов, полученных в 2024 году
Желудочно-кишечный тракт часто вовлекается в патологический процесс как при локальном, так и при системном амилоидозе. За отчетный период был проведен патоморфологический анализ 39 случаев с амилоидозом двенадцатиперстной кишки (24 биопсийных и 15 аутопсийных наблюдений), 13 биоптатов толстой кишки и 7 биоптатов желудка. При окрашивании гематоксилином и эозином во всех случаях амилоидные массы идентифицировались в виде гомогенных эозинофильных структур, которые при окраске конго красным приобретали кирпично-красный цвет, а при исследовании в поляризованном свете имели яблочно-зелёное свечение. С целью определения типа амилоида проводилось иммуногистохимическое (ИГХ) исследование при помощи панели антител к наиболее распространенным типам амилоидоза, в результате которого в двенадцатиперстной кишке AL lambda амилоидоз диагностирован в 11 (28%) биопсийных и 6 (15%) аутопсийных наблюдениях. Интерстициальные отложения амилоида обнаружены в 24% случаев, а в 76% отмечались как интерстициальные, так и интраваскулярные скопления амилоида. AL kappa амилоид был выявлен в 5 (13%) биопсийных и 1(3%) аутопсийном случае и характеризовался выраженными интерстициальными и интраваскулярным амилоидным паттерном в 83% наблюдений, а интерстициальным в 17%. АА амилоид был верифицирован в 5 (13%) биоптатах деванадцатиперстной кишки и в 6 (15%) аутопсийных наблюдениях, в каждом из которых отмечались интерстициальные и интраваскулярные отложения. Транстеритиновый амилоид был диагностирован в трех (8%) биопсийных и двух (5%) аутопсийных образцах. В 4 наблюдениях (80%) выявлены интерстициальные и интраваскулярные фокусы, а в одном случае (20%) – интраваскулярные депозиты. При анализе гистоанатомического распределения отложений различных типов амилоида выявлено, что в двенадцатиперстной кишке наиболее интенсивные отложения амилоида были выявлены при AL kappa амилоидозе. В случаях с ATTR как в биопсийном, так и аутопсийном материале отсутствовало поражение собственной пластинки слизистой оболочки, при этом в 100% наблюдений поражался подслизистый слой, а поражение мышечной пластинки слизистой оболочки выявлено лишь в 33% биопсий. В результате ИГХ типирования амилоида в толстой кишке AL lambda амилоид выявлен у 6 (46%) пациентов, AL kappa - у 2 (15,5%), АА - у 3 (23%), ATTR обнаружен в 2 наблюдениях (15,5%). В биоптатах толстой кишки отложения амилоида в слизистой оболочке обнаружены в 7 (54%) наблюдениях (по 3 случая с AL lambda и AA, а один с AL kappa). В мышечной пластинке слизистой оболочки – в 10 (77%) случаях (по три с AL kappa и АА амилоидом и четыре с AL lamda). В подслизистом слое во всех 13 случаях (100%) амилоид выявлен при всех типах амилоидоза. При ИГХ типировании амилоида в биоптатах желудка AL lambda амилоид обнаружен у 2 (29%) пациентов, AL kappa - у 4 (57%), ATTR диагностирован лишь у одного пациента (14%). При этом амилоид откладывался в слизистой оболочке в 3 (43%) наблюдениях (во всех случаях с AL kappa амилоидозом), в мышечной пластинке слизистой оболочки – в 7 (100%). В подслизистом слое амилоид выявлен в 6 случаях (86%), из них 4 с AL kappa и по одному с AL lambda и ATTR. Анализ корреляции возраста и пола пациентов в аутопсийных и биопсийных наблюдениях с амилоидозом двенатцатиперстной кишки показал, что в биопсийном материале самая старшая возрастная группа была у пациентов с AL-каппа амилоидозом, а в аутопсийном- у пациентов с ATTR. Так же интересно отметить, что в группе аутопсийных случаев диагноз был установлен при жизни лишь в 33% наблюдений. Проведенное исследование демонстрирует, что в гастроинтестинальных биоптатах преобладал AL-амилоидоз, преимущественно у лиц мужского пола. Нами было отмечено, что среди биопсий двенадцатиперстной кишки наиболее часто (46%) был диагностирован AL лямбда амилоидоз, тогда как в аутопсийной группе превалировал АА амилоидоз (48%), что может свидетельствовать о несвоевременной диагностике вторичного амилоидоза и отсутствии прижизненного лечения. С целью определения патоморфологических изменений во внутренних органах при множественной миеломе в сочетании с системным амилоидозом был проведен макро- и микроскопический анализ результатов 12 аутопсийных наблюдений. Проведено ИГХ типирование амилоидных отложений при помощи панели антител к наиболее распространенным типам амилоидоза, в результате которого AL lambda был диагностирован в 8 наблюдениях (66%), AL kappa - в 4 (34%). В костном мозге амилоид чаще откладывался интраваскулярно. При ИГХ реакции с антителом к CD138 отмечена иммунопозитивная реакция в миеломных клетках во всех наблюдениях. Проведенное исследование показало, что при амилоидозе, резвившемся на фоне ММ выявлены массивные амилоидные отложения в органах (сердце, почки, печень, легкие), приводящие к стремительной полиорганной недостаточности. При лечении пациентов с множественной миеломой следует обязательно помнить о возможности развития системного амилоидоза у пациента. За отчетный период было получено моноклональное антитело для диагностики AL-лямбда амилоидоза – "anti-Lambda, клон 300" для иммуногистохимического окрашивания. Для проведения иммунофлуоресцентного окрашивания был получен конъюгат "AF 488 anti-Lambda 300". Валидацию, оценку специфичности и чувствительности полученных нами антител "anti-Lambda, клон 300" и его флуоресцентного конъюгата для ИГХ и иммунофлуоресцентной диагностики проводили на 65 тканевых образцах, содержащих разные типы амилоида. В результате полученные нами моноклональные антитела показали выраженную иммунопозитивную реакцию при окрашивании образцов тканей с AL лямбда амилоидозом и отрицательную реакцию с AL каппа, ATTR и АА амилоидозом, что говорит об их высокой специфичности и чувствительности. В дальнейшем полученные антитела могут быть использованы для патоморфологической диагностики амилоидоза.

Аннотация результатов, полученных в 2025 году
Почки являются одним из доминирующих органов-мишеней при развитии системного амилоидоза. С целью установления клинико-морфологических особенностей поражения почек при различных типах амилоидоза исследованно 25 нефробиоптатов от 18 женщин (70%) и 7 мужчин (30%) в возрасте от 49 до 75 лет, а также 26 аутопсийных случаев от 16 женщин (62%) и 10 мужчин (38%), в возрасте от 53 до 97 лет. В биопсийном материале в результате иммуногистохимического типирования AL амилоидоз был диагностирован в 18 случаях (72%). Из них у 12 пациентов был установлен AL лямбда тип, а у 6 - AL каппа. АА был верифицирован у 5 (20%) пациентов. В двух биоптатах (8%) установлен амилоидоз с альфа-цепью фибриногена А (АFib). В аутопсийном материале AL амилоидоз выявлен в 12 случаях (46%). AL лямбда амилоидоз установлен в 10 случаях, а AL каппа амилоидоз – у двух умерших пациентов. АА амилоидоз был верифицирован у 10 (38,5%) пациентов, ATTR - в 4 (15,5%) аутопсиях . Анализ гистоанатомического распределения различных типов амилоида в почках, показал, что у 11 пациентов с AL лямбда амилоидозом выявлен смешанный тип отложений (64%), гломерулярный тип встречался у 2 пациентов (9%), гломерулярный+васкулярный – у 6 (27%). В случаях с AL каппа амилоидозом преобладал смешанный тип отложений (87%), лишь у одного пациента (12,5%) диагностирован васкулярный характер отложений. АА амилоидоз характеризовался смешанным паттерном в 12 случаях (80%), гломерулярным+васкулярным отложением в 2 наблюдениях (13,3%), тубулоинтерстициальным – в 1 (6,7%). У пациентов с ATTR в 3 случаях (75%) наблюдался васкулярный тип отложения, а в одном - тубулоинтерстициальный (25%). Во всех случаях с АFib амилоидозом (100%) выявлен исключительно гломерулярный тип отложений. Проведенное комплексное морфологическое исследование позволило установить ряд значимых корреляций между иммуногистохимическим типом амилоида и его патоморфологическими характеристиками. Для AL амилоидоза характерно полиморфное смешанное поражение с вовлечением клубочков, сосудов и тубулоинтерстиция, что свидетельствует о диффузном и агрессивном характере процесса. АА тип чаще демонстрирует смешанный паттерн, однако с заметной тенденцией к сочетанному гломерулярно-васкулярному поражению. ATTR дикого типа проявляется преимущественно васкулярным типом отложений при минимальной интенсивности, что объясняет редкое развитие тяжелой нефропатии в рамках данной формы. АFib характеризуется исключительно гломерулярной локализацией, что является его дифференциально-диагностическим признаком. При наличии в биоптате гломерулярного характера отложений амилоида целесообразно включение антитела к АFib- амилоидозу в панель для иммуногистохимического типирования. Наиболее массивные отложения преобладали при AL-каппа (75%) и АА-типе (66,7%), что может служить косвенным морфологическим маркером неблагоприятного прогноза для пациента. Проведено патоморфологическое исследование 30 аутопсийных случаев системного амилоидоза с поражением печени. По результатам ИГХ типирования у 11 (36,7%) пациентов диагностирован AL лямбда амилоидоз, у 2 (6,7%) – AL каппа. В 12 (40%) случаях установлен АА, ATTR обнаружен в 5 (16,7%) наблюдениях. Проведенное исследование позволило идентифицировать характерные специфические признаки поражения печени при различных типах амилоидоза, имеющие существенное значение для дифференциальной диагностики и понимания патогенетических механизмов различных форм системного амилоидоза. При AL амилоидозе отмечались выраженные перисинусоидальные и умеренные портальные амилоидные депозиты, выраженная портальная и умеренная лобулярная воспалительная инфильтрация, а так же признаки гемодинамических нарушений ("мускатная печень"), что свидетельствует об агрессивном характере течения заболевания. В случаях с AA амилоидозом обнаруживался деструктивный характер поражения паренхимы печени. При ATTR дикого типа амилоидные депозиты "механически" вытесняли ткани с минимальным клеточным ответом, гистологически это проявлялось отсутствием признаков мускатной печени и слабым воспалением. С целью получения моноклональных антител для иммуногистохимической и иммунофлуоресцентной диагностики AL каппа амилоидоза были проведены иммунизации лабораторных мышей пептидами, конъюгированными с белком-носителем BSA: соответствующий аминокислотным позициям 3-17 (NH2-СQMTQSPSSLSASVGD-CONH2) вариабельного региона каппа легкой цепи и 116-130 (NH2-CFIFPPSDEQLKSGTA-CONH2) константного региона каппа легкой цепи. Методом гибридомной технологии с промежуточными тестированиями в иммуноферментном и иммуногистохимическом анализах (ИФА и ИГХ) были получены гибридомы, продуцирующие мышиные моноклональные антитела к вариабельному региону каппа, клон KV-45 и мышиные моноклональные антитела к константному региону каппа, клон KC-31. Для оценки специфичности и чувствительности антител KV-45 и KC-31 после предварительных тестов были проведены иммуногистохимические окрашивания биопсийного и аутопсийного материала. Был подобран протокол иммуногистохимического анализа, подходящий для всех, полученных в рамках данного проекта антител. Специфичность и чувствительность клона антител KС-31 и KV-45 была подтверждена на образцах тканей с различными типами амилоидоза. Было показано, что антитела KC-31 специфично реагировало со всеми образцами, содержащими AL каппа амилоид, и не окрашивало образцы, содержащие другие типы амилоида. Специфичность и чувствительность антител KV-45 была проверена на 55 образцах с разным типом амилоидоза. Из 20 образцов с AL каппа амилоидозом 18 образцов было положительно окрашено антителами к вариабельному региону каппа легких цепей KV-45. Оставшиеся два 2 образца были иммунопозитивно окрашены обоими коммерческими антителами. Среди 18 образцов, окрашенных антителами KV-45, два образца имели негативное окрашивание с коммерческим антителами. Данные образцы были отправлены на масс-спекторметрическое типирование амилоида, по результатам которого был диагностирован AL каппа амилоидоз, что подтвердило достоверность иммунопозитивной реакции с полученным нами антителом KV-45. Полученные результаты показывают, что антитела KV-45 позволяют увеличить зону покрытия антител при использовании вместе со стандартными антителами к каппа легкой цепи, для детекции большего числа случаев с каппа амилоидозом. Ссылки на информационные ресурсы, посвященные проекту: https://www.espcongress.org/wp-content/uploads/2025/08/ECP2025_Abstract-Book.pdf https://www.mdpi.com/2227-9059/13/9/2196 https://www.mdpi.com/1422-0067/26/19/9806