КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ


Номер проекта 23-16-00059

НазваниеРазработка отечественной комплексной системы генотипирования и оценки племенной ценности сельскохозяйственных животных на основе ДНК-микрочиповой технологии и алгоритмов машинного обучения

Руководитель Столповский Юрий Анатольевич, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регион Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук , г Москва

Конкурс №80 - Конкурс 2023 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами»

Область знания, основной код классификатора 06 - Сельскохозяйственные науки; 06-204 - Животноводство

Ключевые слова Отечественные породы, ДНК-чип, генотипирование, племенная и генофондная оценка, алгоритмы машинного обучения

Код ГРНТИ34.23.00


 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ


Аннотация
В животноводстве России достаточно остро стоит вопрос сохранения отечественных генофондов сельскохозяйственных животных, их генотипирования, оценки племенной и генофондной ценности. В ходе проекта будет создана отечественная тест-система для выявления генетических маркеров, связанных с продуктивностью, резистентностью, адаптивностью и жизнеспособностью основных доместицированных видов животных. Для достижения поставленной цели будет использована технология ДНК-микрочипов низкой плотности, которая находит самые разнообразные применения в современной молекулярной биологии и медицине, но до настоящего времени не применялась в животноводстве РФ. Основная задача – разместить на ДНК-чипе генетические маркеры характеризующие аллельные варианты генов с известной функцией у сельскохозяйственных животных и провести скрининг (мониторинг) породного разнообразия России следующих одомашненных видов: крупного рогатого скота (КРС) (Bos Taurus), лошадей (Equus ferus caballus), коз (Capra hircus) и овец (Ovis aries). Впервые будут получены уникальные данные о генотипах животных, что откроет новые возможности для оценки генетической структуры, потенциала и селекционного статуса, а также для определения чистопородности, происхождения, филогенеза и геногеографических особенностей отечественных пород сельскохозяйственных животных. Предстоит исследовать пути и возможности применения генетических маркеров в сохранении генофондов сельскохозяйственных животных и современной селекции с использованием алгоритмов машинного обучения. Запланированы экспедиции для сбора биологического материала от местных генофондов животных республики Алтай. Будет использован уже созданный банк ДНК отечественных пород ИОГен РАН и проведено исследование генотипов быков-производителей головного центра по воспроизводству сельскохозяйственных животных с помощью ДНК микрочиповой технологии.


 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ


 

Публикации

1. Бекетов С.В., Свищева Г.Р., Упелниек В.П., Сенатор С.А., Кузнецов С.Б.,. Николаева Э.А,. Столповский Ю.А. Сравнительный микросателлитный анализ зебувидного скота с породами Bos taurus Генетика (год публикации - 2024)

2. Солошенков А.Д., Солошенкова Э.А., Семина М.Т., Спасская Н.Н., Воронкова В.Н., Столповский Ю.А. Искусственный интеллект и классические методы в генетике и селекции животных Генетика (год публикации - 2024)

3. Кузнецов С.Б., Солоднева Е.В., Семина М.Т.,. Солошенкова Э.А., Баженов С.А., Онохов А.А, Столповский Ю.А. Новые комбинации аллелей в генах бета-казеина и каппа-казеина крупного рогатого скота и сравнительный анализ их частот у разных пород Генетика (год публикации - 2024)


Аннотация результатов, полученных в 2024 году
В 2024 году была проведена вторая животноводческая экспедиция в республику Алтай. Собраны 425 образца биологического материала от местных пород: лошадей - 178 образ-цов; овец -98; коз 45; КРС - 70; яков - 34. Создана панель по генам 60 генам мастей и заболеваниям лошадей. Исследованы маркеры MC1R, ASIP, MSTN на образцах алтайских и новоалтайских лошадей, собранных в ходе экспедиции. При разработке методов оценки консолидации пород лошадей проведен ана-лиз лошадей российской и европейской селекции, рассчитан показатель Dist (IBS), прове-дена классификация пород на группы: чистокровные, заводские, локальные. Была смоде-лирована популяция, созданная на основе животных разных пород (синтетическая популя-ция). Все группы пород достоверно отличались друг от друга (p-value < 0*10-8). Были раз-работаны диапазоны значений сходства и различий для выделенных групп пород. Для идентификации породной принадлежности впервые в генетике был применен метод ма-шинного обучения. В зависимости от включенных пород лошадей средние значения accura-cy для модели варьировали от 0,83 до 0,96. Проведено сравнение разных методов эффективности выделения ДНК из хрящевой ткани наружного уха и из лейкоцитарной фракции цельной крови крупного рогатого скота с по-следующей оценкой возможных перспектив применения технологии «генетического бир-кования» в животноводстве. В ходе оценки качества ДНК (A260/A280) наименьший разброс значений был получен в образцах из ушных выщипов – (1,89±0,008), а наибольший – в образцах из лейкоцитарной фракции цельной крови с использованием метода осаждения на колонках (1,84±0,193). При последующем сравнении технологий взятия образцов ушных выщипов для проведения генетических исследований (популяционно-генетическая харак-теристика, геномный анализ и др.) наиболее предпочтительной оказалась технология «ге-нетического биркования» FlexoРlusGeno. С использованием 14 микросателлитных маркеров (BM1824, BM2113, CSRM60, CSSM66, ETH3, ETH10, ETH225, ILSTS006, INRA023, SPS115, TGLA53, TGLA122, TGLA126, TGLA227) проанализированы выборки стад серого украинского скота ИЖСР им. М.Ф. Иванова – Аскания-Нова (Херсонская обл.) (n=101) и Алтайского экспериментального хозяйства п. Черга (Республика Алтай) (n=41). При рассмотрении F-cтатистик Райта по исследованным локусам величина FIS= –0.0285 указывает на избыток гетерозиготных генотипов в популяции серого украинского скота, с малой вероятностью встречи аллелей общего предка FIT=0.1161, а уровень FST=0.1394 свидетельствует о средней дивергенции субпопуляций, наибольший вклад в которую вносит локус Eth3. При этом количество вы-являемых полиморфных локусов – 95.64%, уровень аллельного – AR=7.66 и генетического разнообразия – HE=0.76 были больше в алтайской субпопуляции, чем в херсонской – 58.13%, 4.41, 0.61, соответственно. В то же время херсонское стадо характеризовалось лучшей выравненностью, однородностью и консолидированностью, что позволяет рас-сматривать его в качестве источника ценного племенного материала при разведении серой украинской породы. С помощью 11 микросателлитных маркеров (ОarCP49, INRA063, HSC, OarAE129, MAF214, OarFCB11) и 5 (INRA005, SPS113, INRA23, MAF65, McM527) получены данные об уровнях изменчивости и степени дифференциации 24 популяций (1140 образцов) ту-винской грубошерстной короткожирнохвостой овцы разных районов Республики Тыва и 24 пород овец (721 образец) различного происхождения, охватывающих основные овце-водческие районы Российской Федерации включая республику Алтай. Проведен сравни-тельный анализ кластеризация пород по данным SNP и STR генотпированию. Кластериза-ция, проводимая по данным SNP-анализа, успешно решает проблему дифференциации сложных синтетических пород, в отличие от STR-маркирования, где не учитываются более тонкие межпородные генетические взаимосвязи на уровне близкородственных групп, что создает предпосылки для взаимного методологического дополнения SNP- и STR-маркирования. Высокий уровень генетического полиморфизма местных пород России является показа-телем экологической пластичности породы и следствием ее приспособляемости к изме-нениям окружающей среды, а генетическая изоляция популяций местных пород опреде-ляется географической обособленностью Саяно-алтайского региона. Данная часть работы является началом работ по изучению генов-кандидатов местных пород лошадей, крупно-го рогатого скота, овец и их генетического потенциала.

 

Публикации

1. Бекетов С.В., Семина М.Т., Мокеев А.С., Фурса Н.Н., Сенатор С.А., Упелниек В.П., Столповский Ю.А. Перспективы применения технологии «генетического биркования» в животноводстве Главный зоотехник (год публикации - 2024)
10.33920/sel-03-2405-01

2. Солошенкова Э.А., Солошенков А.Д., Воронкова В.Н., Столповский Ю.А. Консолидация заводских и локальных пород лошадей Генетика (год публикации - 2025)

3. Бекетов С. В., Денискова Т. Е., Доцев А. В., Николаева Э. А., Зиновьева Н. А., Селионова М. И., Столповский Ю. А. Populations of Tuvan Shot Fat-Tailed Sheep in the Gene Pool Structure of the Sheep Breeds of the Russian Federation Russian Journal of Genetics, ISSN 1022-7954, Russian Journal of Genetics, 2024, Vol. 60, No. 1, pp. 87–99 (год публикации - 2024)
10.1134/S1022795424010022

4. Мокеев А.С., Фурса Н.Н., Бекетов С.В., Свищева Г.Р., Онохов А.А., Столповский Ю.А. Characteristics by STR Markers of Ukrainian Grey Cattle Breed in the Russian Federation Russian Journal of Genetics (год публикации - 2024)
10.1134/S1022795424701254

5. Столповский Ю.А., Бекетов С.В., Солоднева Е.В., Кузнецов С.Б. Сохранение генетических ресурсов сельскохозяйственных животных Главный зоотехник (год публикации - 2024)
10.33920/sel-03-2403-01


Аннотация результатов, полученных в 2025 году
В рамках проекта выполнен комплекс исследований, направленных на изучение и сохранение генетических ресурсов сельскохозяйственных животных России. 1. Сбор и генетический анализ уникального материала. Проведены экспедиции в Республику Алтай, собран биологический материал от местных пород овец, коз и маралов (300 образцов). На основе этой и существующих коллекций проведен масштабный популяционно-генетический анализ 327 овец из 13 регионов, представляющих 8 пород. С помощью микросателлитных маркеров впервые детально изучено генетическое разнообразие аборигенных пород Саяно-Алтайского региона. Установлена высокая генетическая уникальность теленгитских овец из изолированных высокогорных урочищ, что критически важно для восстановления этой практически исчезнувшей породы. 2. Разработка новых инструментов для геномной селекции. Создан ДНК-микрочип. Завершена разработка и оптимизация отечественного полноразмерного ДНК-микрочипа для генотипирования сельхозживотных. Матрица из 2144 точек содержит маркеры для идентификации, диагностики наследственных заболеваний и оценки хозяйственно-значимых признаков. Для детекции внедрена высокочувствительная флуоресцентная система, оптимизированы протоколы пробоподготовки, что позволило устранить артефакты. Результаты генотипирования на чипе успешно верифицированы методами NGS и Сэнгера. Разработано программное обеспечение. Созданы алгоритмы для автоматизированного анализа данных генотипирования, включающие функцию подтверждения родства на основе SNP-панелей и пайплайн для формирования генетического паспорта животного. Паспорт включает оценку родства/инбридинга, статус по наследственным заболеваниям и селекционные рекомендации. 3. Исследование генетических основ хозяйственно-полезных признаков. Проведен систематический поиск и каталогизация известных генетических маркеров, связанных с продуктивностью, репродукцией и здоровьем овец. Для ключевых генов молочной продуктивности (CSN2 и CSN3) выполнено таргетное NGS-секвенирование на выборке из 332 голов скота. Проведен полный биоинформатический анализ, реконструированы спектры гаплотипов, что позволит оценить генетический потенциал местных прод. Для коз из разных регионов проведено полногеномное секвенирование и GWAS-анализ, выявлены ассоциации генов с поведенческими и морфологическими признаками. 4. Сформирован научный задел для дальнейших исследований. Подготовлена расширенная панель маркеров для ДНК-микрочипа овец и коз, включающая SNP для оценки мясной и молочной продуктивности, репродукции, устойчивости к болезням. Отработана технология печати и тестирования микрочимов, создана основа для их промышленного производства и внедрения в селекционную практику. Значимость результатов: Результаты проекта вносят существенный вклад в сохранение генетического биоразнообразия отечественного животноводства и создают современную технологическую основу (ДНК-микрочип и ПО) для ускоренной геномной селекции, что отвечает задачам обеспечения продовольственной безопасности страны.

 

Возможность практического использования результатов
Результаты проекта имеют высокий потенциал практического применения в животноводстве Российской Федерации. Выявленные генетические маркеры, ассоциированные со стрессоустойчивостью, поведенческими особенностями и адаптивностью домашних коз, могут быть использованы для создания и совершенствования селекционных программ, направленных на повышение продуктивности, устойчивости к заболеваниям и эффективности управления стадами. Разработанные подходы к оценке влияния урбанизации и климатических факторов на генетическую структуру популяций позволяют оптимизировать стратегии разведения животных в различных природно-хозяйственных зонах. Внедрение полученных результатов будет способствовать формированию научно-технологического задела для развития животноводства, повышению конкурентоспособности отечественной продукции и обеспечению продовольственной безопасности страны. Практическая значимость исследования заключается в обосновании ценности изученных пород как уникального генетического ресурса. Выявленная генетическая структура может быть учтена при разработке программ сохранения биоразнообразия, особенно для изолированных популяционных выборок отечественных пород сельскохозяйственных животных, требующих специальных мер управления. Их выраженная генетическая обособленность, подтвержденная высокими значениями бустреп-поддержки, указывает на уникальность этих выборок и их ключевое значение для программ восстановления и сохранения генофонда локальных пород доместицированных видов. Проблема идентификации породной принадлежности животных приобретает особую значимость в связи с интенсификацией селекционного процесса и необходимостью контроля чистопородности. Исследование филогении пород с точки зрения молекулярных маркеров позволяет оценить особенности их генофондов, подтвердить гипотезы о происхождении отдельных пород на основе молекулярно-генетических данных. В ходе выполнения проекта была создана модель на основе данных по российским породам овец и лошадей. Для определения успешности модели были рассчитаны стандартные метрики: accuracy, precision, recall и f1, построены матрицы ошибок. Показаны новые возможности идентификации породной принадлежности животных. В зависимости от включенных пород средние значения accuracy для модели варьировали от 0,83 до 0,96. Проведённый биоинформационный анализ позволяет научно обосновать ценность локальных пород как уникального генетического ресурса, обладающего высоким адаптивным потенциалом. На основе полученных данных выделены приоритетные популяции для программ сохранения и селекции, а также разработаны научно обоснованные стратегии генетического мониторинга и управления разнообразием. Выявленные в ходе исследования уникальные аллели и генотипы могут быть целенаправленно использованы в селекционных программах, направленных на повышение продуктивности, адаптивности и устойчивости животных к различным условиям содержания и болезням. Таким образом, в рамках проекта полностью выполнены задачи биоинформационного анализа, предусмотренные планом работ. Полученные результаты имеют существенное значение для развития животноводства и сохранения агробиоразнообразия в России и сопредельных регионах.