Аннотация результатов, полученных в 2024 году
В ходе проведенного исследования была собрана цельная кровь от овец романовской породы разных половозрастных групп из двух хозяйств Ярославской области. В общей сложности было отобрано 89 образцов крови для исследования аллелофонда и тестирования новой системы, основанной на методе рестрикционного картирования. Кровь была отобрана из яремной вены и хранилась при температуре -20°C. Для выделения геномной ДНК применялся сорбентный метод. Образцы были использованы для формирования банка геномной ДНК. Дополнительно были отобраны образцы крови от 25 овец породы дорпер, 20 овец дагестанской горной породы, 11 суффолков и 6 баранов куйбышевской породы. Эти образцы планируется применять в дальнейших исследованиях. Для анализа геномной ДНК использовались специфические праймеры для амплификации генов DRB1 и DQB. Из-за высоких уровней полиморфизма в этих генах возникли сложности при подборе праймеров. Однако, с помощью программного обеспечения SnapGene была проведена дополнительная оптимизация возможных нуклеотидных последовательностей, подбор и синтез 19 различных праймеров и 8 зондов, что позволило улучшить как амплификацию, так и результаты секвенирования. В процессе анализа аллелей генов DRB1 и DQB было проведено виртуальное рестрикционное картирование 130 известных аллелей DRB1 с использованием ферментов SacI, SacII, MvaI, Hin1I и HaeIII и всех вариантов аллелей генов DQB1 и DQB2 ферментами HpaII, EagI, BssHII, NlaIII, AccII, HaeIII. Все аллели DRB1 были распределены по 20 группам на основе их рестрикционных карт. В случае исследования генов DQB 22 варианта гена DQB1 можно при помощи картирования разделить на 17 групп, а 27 вариантов DQB2 – на 21 группу. Для дальнейшей оценки генетического разнообразия в популяциях овец романовской породы был проведен анализ экзона 2 гена DRB1. Результаты ПЦР-амплификации, рестрикционного картирования с последующим дополнительным секвенированием выявили 19 и 17 аллелей в первой и второй популяциях соответственно, с совпадением в 44% между ними. Несмотря на то, что метод рестрикционного картирования показал достаточную точность для распределения образцов по 20 группам, возникли трудности, связанные с мелкими различиями в длине фрагментов и трудностью визуализации некоторых фрагментов на геле. Это требует дальнейшей оптимизации метода. Важной частью исследования была разработка тест-системы для диагностики аллеля DRB1*1101 на основе ПЦР в реальном времени. По литературным данным существует взаимосвязь между присутствием аллеля DRB1*1101 в генотипе с устойчивостью овец к кишечным нематодозам. Было показано, что ягнята, носители этого аллеля, имеют более низкую паразитарную нагрузку и высокие уровни антител. Это открытие имеет важное значение для селекционных программ, направленных на улучшение устойчивости овец к паразитозам. Разработанная в рамках гранта система позволяет эффективно определять наличие аллеля, что может быть использовано для селекции овец с устойчивостью к кишечным инфекциям. В результате проведенных исследований опубликовано 9 научных работ, включая 2 в ведущих российских и зарубежных научных изданиях, а также подготовлена и принята к публикации 1 статья в издании, индексируемом RSCI, Agris, и 1 статья подана на рецензирование в журнал, индексируемый международной базой цитирования Scopus. Кроме того, сформирована одна заявка на объект интеллектуальной собственности (Патент, регистрационный №2024136045).

Аннотация результатов, полученных в 2025 году
В рамках реализации проекта достигнуты значимые научно-практические результаты, существенно обогащающие иммуногенетику сельскохозяйственных животных. Основным достижением стало формирование репрезентативной биологической коллекции, включающей образцы от особей девяти пород (романовскую, дагестанскую горную, дорпер, суффолк, эдильбаевскую, акжаикскую, куйбышевскую, помесь эдильбаевской с калмыцкой и андийскую породы) из географически различных регионов России (тонкорунные, полутонкорунные и грубошерстные породы из Ярославской, Московской, Волгоградской областей, Республики Дагестан, Калмыкии) и Казахстана. Указанная коллекция, охватывающая как аборигенные, так и коммерческие породы, обеспечила широкую представленность материала и послужила основой для проведения комплексного анализа аллелофонда гена OLA-DRB1. Высокоточное генотипирование 336 животных позволило идентифицировать суммарно 85 уникальных аллельных вариантов, что коррелирует с известными научными данными и подтверждает высокий уровень естественного полиморфизма данного локуса. Результаты проведённых исследований подтверждают действие балансирующего отбора, поддерживающего генетическое разнообразие популяций на протяжении поколений и обеспечивающего адаптивность к изменяющимся патогенам. Особую ценность представляют результаты анализа аборигенных и малоизученных пород как уникальных генетических ресурсов. Изучение андийской породы овец, адаптированной к условиям высокогорья Дагестана, позволило впервые установить спектр аллелей гена DRB1. Высокий уровень генетического разнообразия данной породы отражает адаптивную пластичность, сформированную в условиях географической изоляции. Анализ эдильбаевской породы из Казахстана выявил рекордный полиморфизм; у 20% особей обнаружены генетические сигналы, не соответствующие аллелям базы данных IPD-MHC, что указывает на наличие ранее неописанных вариантов. ​Данные открытия расширяют представления об эволюции генов главного комплекса гистосовместимости и подчеркивают необходимость сохранения локальных пород как носителей уникальных аллелей для задач селекции и ветеринарной медицины. На основе литературных данных по ассоциации устойчивости к нематодозам с конкретными аллельными вариантами гена DRB1 разработана высокопроизводительная диагностическая тест-система на основе ПЦР в режиме реального времени с аллель-специфичными TaqMan-зондами. Система позволяет надежно идентифицировать целевой генотип за 3 часа, используя минимальные объёмы биоматериала (кровь, волос, ткани, семенная жидкость, эмбрионы). По результатам разработки был получен патент РФ. Все результаты систематизированы и использованы для подготовки серии публикаций, охватывающих сравнительный анализ генетического разнообразия пород и иммуногенетические характеристики аборигенных популяций. Проект реализовал комплексный цикл: от создания биобанка и фундаментальных открытий в эволюционной генетике до готового технологического продукта. Достижения вносят вклад в биологическую безопасность и устойчивое развитие животноводства посредством геномных технологий.