КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ
Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Номер проекта 24-26-00248
НазваниеБАКТЕРИАЛЬНЫЙ РИЗОБИОМ ОДНОДОЛЬНЫХ И ДВУДОЛЬНЫХ КУЛЬТУРНЫХ РАСТЕНИЙ С РАЗНЫМ РАЗВИТИЕМ БАРЬЕРНЫХ ТКАНЕЙ В ПОГЛОЩАЮЩИХ КОРНЯХ В УСЛОВИЯХ ДЕФИЦИТА АЗОТА
Руководитель Бетехтина Анна Анатольевна, Кандидат биологических наук
Организация финансирования, регион федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Уральский федеральный университет имени первого Президента России Б.Н. Ельцина" , Свердловская обл
Конкурс №89 - Конкурс 2023 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований малыми отдельными научными группами»
Область знания, основной код классификатора 06 - Сельскохозяйственные науки; 06-104 - Агробиотехнологии
Ключевые слова сельскохозяйственные растения, минеральное питание, дефицит азота, азотфиксирующие ризобактерии, растительно-микробные ассоциации, тонкие корни, метагеномный анализ, агротехнологии
Код ГРНТИ68.03.03
ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ
Аннотация
Актуальность проекта связана с необходимостью введения новых агротехнологий с высокой эффективностью использования азота. Современные сельскохозяйственные культуры способны поглощать не более 40% от азота внесенных удобрений, в то время как оставшаяся часть поступает в окружающую среду и увеличивает эмиссию парниковых газов из почвы. Для создания экологически обоснованных технологий ведения сельского хозяйства необходим поиск природных механизмов эффективного азотного питания растений. Для поглощения почвенного азота травянистые растения реализуют комплекс приспособительных реакций подземных органов на уровне корневой системы, структуры поглощающих корней, микоризообразовании и ризосферной микрофлоры. Хорошо изучены растительно-микробные взаимодействия бобовых с клубеньковыми ризобактериями, в то время как ассоциативная микрофлора небобовых культур, которая, как показали последние исследования, также способна к успешной фиксации молекулярного азота, долгое время оставалась без внимания. Недостаточно изучен процесс формирования бактериального ризобиома в связи со строением корней у небобовых сельскохозяйственных растений. Корни растений являются потенциальными «экологическими нишами» для бактерий; строение корней может контролировать разнообразие и функциональный состав ризосферного микробиома. Поэтому исследования структуры поглощающих корней, наряду с анализом состава бактериального сообщества с помощью метагеномного анализа, имеют большие преимущества для понимания механизмов минерального питания сельскохозяйственных культур. В настоящем проекте предлагается новый методологический подход по оценке разнообразия ризосферного бактериального микробиома на поглощающих корнях с контрастным строением барьерных тканей. В результате будет получена уникальная информация о структурных особенностях корней однодольных и двудольных сельскохозяйственных растений, которая напрямую связана с механизмами дотации ризосферной микрофлоры корневыми экссудатами и быстроотмирающими тканями, что внесет вклад в развитие технологий адаптивного сельского хозяйства.
Цель проекта – оценка разнообразия ризосферных бактериальных микробиомов и выявление особенностей развития барьерных тканей поглощающих корней одно- и двудольных культурных растений в условиях дефицита азота. Для достижения поставленной цели у культурных растений, выращенных на почве с дефицитом азота: (1) будет изучено строение поглощающих корней, различающихся по степени опробковения/одревеснения экзодермы и эндодермы: с утолщенными эндодермой и экзодермой (Allium cepa, A. sativum); без утолщения в эндодерме и без экзодермы (Triticum durum, Solanum pomiferum); с утолщенной эндодермой и без экзодермы (Fagopyrum esculentum); без утолщения в эндодерме и с экзодермой (Helianthus annuus); (2) будет проведена оценка разнообразия формирующихся ризобактериальных сообществ и изучен их таксономический состав, включая выявление потенциальных азотфиксирующих микроорганизмов (на основе имеющихся литературных данных); (3) будет определено общее количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) в ризосферном субстрате и выявлена доля азотфиксаторов в общем количестве изолятов; (4) будет измерено содержание общего азота в биомассе одно- и двудольных видов растений с разным строением корней, выращенных в условиях дефицита азота, и выявлена взаимосвязь со структурой бактериального ризобиома. Полученные результаты могут послужить научной основой для развития эффективных агротехнологий, направленных на улучшение роста сельскохозяйственных культур на малоплодородных почвах.
ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Аннотация результатов, полученных в 2024 году
Проект направлен на решение фундаментально-прикладной научной проблемы в области эффективного, высокопродуктивного и экологически чистого агрохозяйства, связанной с выявлением возможных взаимосвязей между строением барьерных тканей поглощающих корней одно- и двудольных видов культурных растений и составом бактериальных сообществ их ризосферы в условиях ограниченного доступа азота. На первом этапе реализации проекта были проведены эксперименты по выращиванию модельных культур однодольных (пшеница мягкая, чеснок озимый, два сорта лука репчатого) и двудольных (рапс, подсолнечник, три сорта томатов) видов растений на малоплодородном субстрате без добавления и с двукратным добавлением азота (30 мг/кг почвы, в форме аммонийной селитры). Через 72-е суток вегетации после извлечения растений в ризосферной почве проводили оценку количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) и азотфиксаторов (КМАФАнАМ), а также некоторых физико-химических параметров (рН, общее содержание азота, органического углерода и подвижных форм фосфора). Была выделена тотальная ДНК для дальнейшего метагеномного анализа. У модельных видов измеряли параметры роста и структуру поглощающих корней, содержание в листьях фотосинтетических пигментов. Была также проведена оценка содержания азота в надземной биомассе однодольных видов культурных растений. Внесение азота приводило к некоторому повышению его содержания в почве только при выращивании двудольных растений, а остальные физико-химические показатели достоверно не изменялись. Структурные исследования поглощающих корней однодольных растений выявили различия, связанные с видовой принадлежностью и условиями произрастания. Корни пшеницы отличались одревеснением радиальных и тангентальных стенок клеток эндодермы. У лука и чеснока в эндодерме одревесневали радиальные стенки. У всех видов экзодерма была однослойная, ее клеточные стенки были утолщены. Лигнификация отмечена только у части корней пшеницы. Отличительным признаком корней луковых является хорошо развитая аэренхима (99%). В ряду пшеница < лук < чеснок значимо увеличивался радиус корней, за счет паренхимы коры и увеличения в ней числа слоев. По размеру стелы значительно выделялся чеснок. Внесение азота в почву приводило к утолщению корней за счет увеличения радиуса стелы и паренхимы коры у всех однодольных видов. Различия по морфометрическим признакам были сильно выражены у двудольных растений и менее контрастны у однодольных. У всех растений добавление азота вызывало увеличение длины побегов, сырой надземной и подземной биомассы. Этот прирост был значимым и в среднем составлял 160, 360 и 270%, соответственно, по сравнению с растениями, выращенными на малоплодородной почвосмеси. Все модельные виды значимо отличались по содержанию фотосинтетических пигментов. Их наибольшее количество среди однодольных растений отмечено в листьях обоих сортов лука, среди двудольных – у всех сортов томатов. Внесение N в почву приводило к существенному увеличению содержания как хлорофиллов, так и каротиноидов. Наибольшее увеличение хлорофиллов наблюдалось у пшеницы (в 2,7 раза), подсолнечника (в 2,2 раза) и томатов (в 2,9 раз). В то же время наибольшее увеличение каротиноидов было отмечено у чеснока (в 1,8 раз) и у томата сорта «Вороний глаз» (почти в 2 раза). Результаты дисперсионного анализа (two-way ANOVA) показали, что более значимым для содержания хлорофиллов оказалось внесение N, в то время как для каротиноидов – видовая специфичность. По содержанию общего азота в надземной биомассе среди однодольных видов достоверно выделялся чеснок (почти в 2 раза больше N, чем у пшеницы и лука). Добавление азота вызывало его накопление в надземной биомассе пшеницы и лука (в среднем в 1,9 раз), в то время как у чеснока этот показатель не изменялся. Значение КМАФАнМ в ризосферной почве пшеницы и лука, выращенных без внесения N, достоверно не отличалось от их количества в почвосмеси без растений. В то же время у чеснока их количество было достоверно ниже (в 2,5 раза). У всех двудольных видов КМАФАнМ в ризосферной безазотистой почве оставалось на уровне контрольного субстрата без растений. Добавление азота не влияло на КМАФАнМ контрольного субстрата, однако немного, но достоверно увеличивало их количество у пшеницы (в 2,0 раза), подсолнечника (в 3,3 раза) и томата сорта «Вороний глаз» (в 1,5 раза). КМАФАнАМ в почвосмеси без растений было в 4 раза ниже, чем КМАФАнМ, и внесение азота на них не влияло. В ризосферной почве модельных видов количество азотфиксаторов было почти в 8 раз ниже, чем общее содержание микроорганизмов. Добавление азота достоверно (в среднем в 5,4 раза) увеличивало количество азотфиксаторов у некоторых однодольных (пшеница, лук сорта «Лучок на пучок») и двудольных (подсолнечник и томат сорта «Балконное чудо» и «Комнатный Сибиряк).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что изученные виды однодольных и двудольных растений по-разному отзывались на внесение аммонийной формы азота. Это проявлялось как в морфофизиологических изменениях, так и в реакции их ризосферной микрофлоры. Изученные однолольные виды растений были контрастны по строению корней и накоплению N в надземной биомассе, что дает основание предположить связь между этими параметрами.
Публикации
1.
Бетехтина А.А., Реутова Н.А., Веселкин Д.В.
Plants of different monocot families differ in nitrogen and phosphorus contents in leaves
DOKLADY BIOLOGICAL SCIENCES, Т. 517. № 1. С. 59-62 (год публикации - 2024)
10.1134/S001249662470100X
2. Малахеева А.В. Содержание азота и фосфора в листьях злаков и двудольных трав при зарастании техногенного субстрата (на примере начальных этапов зарастания золоотвала) Материалы Международного молодежного научного форума «ЛОМОНОСОВ-2024» / Отв. ред. И.А. Алешковский, А.В. Андриянов, Е.А. Антипов, Е.И. Зимакова. [Электронный ресурс] – М.: МОО СИПНН Н.Д. Кондратьева, 2024. , Секция «Почвоведение». Подсекция «Почвы урбанизированных и техногенных ландшафтов. Проблемы загрязнения и ремедиации почв», доклад 22. (год публикации - 2024)
3. Бетехтина А.А., Некрасова О.А., Малахеева А.В., Воропаева О.В., Малева М.Г. Ризосферная микрофлора злаков и двудольных трав, колонизирующих золоотвалы Механизмы адаптации микроорганизмов к различным условиям среды обитания: материалы III Всероссийской конференции с международным участием (PLAMIC 2024, Байкальск, 15–22 сентября 2024 г.). Иркутск: ИГУ, 2024. , С. 340-342. (год публикации - 2024)
4. Бетехтина А.А., Воропаева О.В., Малахеева А.В., Малева М.Г. Формирование азотфиксирующей ризосферной микрофлоры и содержание фотосинтетических пигментов у однодольных культурных растений в условиях низкой обеспеченности азотом Экспериментальная биология растений и климатические вызовы [Текст: электронный ресурс]: тезисы докладов Всероссийской научной конференции с международным участием. Годичное собрание Общества физиологов растений России (3–8 октября 2024 г., Уральский федеральный университет, Екатеринбург, Россия) / Под ред. М.Г. Малевой, И.С. Киселевой, Г.Г. Борисовой. – Электрон. дан. (1 файл : 18,5 Mб). – Екатеринбург : ИЗДАТЕЛЬСТВО АМБ, 2024. – Режим доступа: ссылка на файл в электронной библиотеке. https://ekbofr2024-insma.urfu.ru/ru/, С. 175 (год публикации - 2024)
5.
Малева М., Малахеева А., Салата А., Борисова Г.
Effect of various doses of birch-derived biochar on the growth of Helianthus annuus L.
BIO Web of Conferences, 121: 02006 (год публикации - 2024)
10.1051/bioconf/202412102006
Аннотация результатов, полученных в 2025 году
Проведенное комплексное исследование было направлено на изучение взаимосвязи между анатомическим строением поглощающих корней, эффективностью использования азота (N) и структурой ризосферного микробного сообщества у однодольных и двудольных растений. Детально изучено строение тонких поглощающих корней у модельных двудольных видов: рапса (B. napus, BN), подсолнечника (H. annuus, HA) и трех детерминантных сортов томата (S. lycopersicum, SL, v.1 – 'Балконное чудо’, v.2 – ‘Комнатный Сибиряк’, v.3 – 'Вороний глаз’). Установлено, что степень одревеснения клеток эндодермы и развития экзодермы является видоспецифичным признаком, зависимым от уровня азотного питания. Например, у BN выявлено утолщение как радиальных, так и тангентальных стенок эндодермы, а экзодерма была слабо развита. У HA и SL, напротив, экзодерма формировалась активно. По морфометрическим параметрам (диаметр корня, толщина паренхимы коры) виды составили восходящий ряд: BN < HA < SL-v.1 < SL-v.2 < SL-v.3. Дефицит N приводил к уменьшению диаметра корней у всех видов, преимущественно за счет сужения центрального цилиндра и уменьшения коры, однако сила этой реакции статистически значимо зависела от вида растения. Сравнение с однодольными растениями подтвердило гипотезу о менее выраженном развитии барьерных тканей у двудольных. Так, средняя встречаемость корней с одревесневшей эндодермой у однодольных составила 30,3%, тогда как у двудольных – лишь 5,9%. Экзодерма была хорошо развита у всех однодольных и у большинства двудольных (кроме BN). Дефицит N стимулировал лигнификацию эндодермы у однодольных, но не имел системного влияния на развитие экзодермы. У однодольных также были значимо больше толщина паренхимы коры и число в ней клеточных слоев. Содержание N в надземной биомассе было достоверно выше также у однодольных. Внесение аммонийной селитры усиливало его накопление в побегах растений обоих классов, но более выраженно – у однодольных. Однако общая биомасса интенсивнее наращивалась двудольными, особенно HA и некоторыми сортами SL. Дефицит N сильнее угнетал рост биомассы именно у двудольных растений. Корреляционный анализ выявил класс-специфичные паттерны. У однодольных обнаружена слабая отрицательная корреляция между степенью одревеснения эндодермы и накоплением N в побеге, а также положительные связи содержания N с диаметром корня, стелы и развитием аэренхимы. У двудольных подобных связей для эндодермы не найдено, но предполагается потенциально более существенная барьерная роль экзодермы. Выращивание растений в течение 10 недель приводило к значительному потреблению минерального N, особенно нитратов, концентрация которых в вегетационных сосудах с растениями была на порядки ниже, чем в фоновом субстрате без растений. После вегетации содержание общего и щелочногидролизуемого N в почве под двудольными было статистически значимо выше, чем под однодольными. Общее микробное число не различалось между классами растений и не зависело от азотных добавок. Вопреки ожиданиям, численность ассоциативных азотфиксаторов в целом не была выше у двудольных, но достоверно увеличивалась при внесении минерального N у отдельных видов обоих классов. В микробном сообществе преобладали бактерии, участвующие в фиксации атмосферного азота и денитрификации, тогда как численность аммонификаторов и нитрификаторов была ниже. Выявлены положительные корреляции между численностью функциональных групп микроорганизмов и параметрами роста и питания растений, специфичные для каждого класса. Методами высокопроизводительного секвенирования идентифицировано 29 бактериальных типов. Доминировали Proteobacteria (син. Pseudomonadota), Acidobacteria и Bacteroidetes (Bacteroidota). Дефицит N по-разному влиял на относительную численность Proteobacteria: у однодольных она не менялась или росла, а у двудольных – снижалась. Альфа-разнообразие бактериального сообщества значимо различалось не только между видами, но и между сортами одного вида, а также зависело от класса растения. Внесение азота, как правило, снижало видовое богатство (индекс Чао1), особенно у однодольных, в то время как у SL эффект был неоднозначным и сортоспецифичным. Анализ 60 родов селективных N-трансформирующих ризобактерий показал, что их доля была выше у однодольных. Выявлены как общие (например, Stenotrophomonas, Candidatus Solibacter, Flavisolibacter), так и уникальные для каждого класса доминирующие роды. Обнаружены многочисленные и разнообразные корреляции между обилием конкретных бактериальных родов, параметрами растения и формами N в почве. Например, у однодольных обилие представителей рода Stenotrophomonas коррелировало с аммонийными формами, а у двудольных – с нитритными. У двудольных выявлен более широкий спектр родов N-фиксаторов (например, Rhizobium, Azohydromonas), обилие которых положительно коррелировало с ростом и накоплением азота. Значимые связи со структурными особенностями корней (одревеснением эндодермы, развитием экзодермы) были характерны в основном для минорных, а не для доминирующих родов бактерий. В целом исследование демонстрирует глубокую взаимосвязь между анатомией поглощающих корней, стратегией азотного питания и структурой ассоциированного микробного сообщества, причем все эти параметры имеют выраженную видо- и/или сортоспецифичность и зависят от уровня обеспечения азотом. Таким образом, можно сделать вывод о том, что структура корня является ключевым звеном, связывающим растение и уникальное ризосферное сообщество для эффективного использования азота.
Результаты исследований освещены в сети интернет: https://ria.ru/20251120/nauka-2056020263.html Москва, 20.11.2025 РИА Новости: «На Урале исследовали возможности томатов обходиться без дорогих удобрений».
Публикации
1.
Малева М.Г., Борисова Г.Г., Тугбаева А.С., Малахеева А.В., Воропаева О.В., Ермошин А.А., Бетехтина А.А.
Rhizobacteriome Diversity and Morphophysiological Features of Three Tomato Plant Varieties Under Nitrogen Deficiency
Nitrogen, MDPI, Volume 6, Issue 4, 102 (год публикации - 2025)
10.3390/nitrogen6040102
2. Бетехтина А.А., Малахеева А.В., Борисова Г.Г., Воропаева О.В., Малева М.Г. Морфофизиологические особенности Allium cepa и Allium sativum при выращивании «на зелень» в условиях дефицита азота Аграрный вестник Урала, Т. 26, № 2 (год публикации - 2026)
3.
Бетехтина А.А., Некрасова О А., Малахеева А.В., Воропаева О.В., Малева М.Г.
Nitrogen and Phosphorus Content in Cereals and Dicot Grasses Leaves and Features of Their Rhizosphere Microflora in Multi-Age Fly Ash Dumps / Содержание азота, фосфора в листьях злаков и двудольных трав и особенности их ризосферной микрофлоры на разновозрастных золоотвалах
Biology Bulletin / ИЗВЕСТИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК. СЕРИЯ БИОЛОГИЧЕСКАЯ, Vol. 52, Art. 116 / № 4, С. 443-454 (год публикации - 2025)
10.1134/S106235902560134X
4. Бетехтина А.А., Малева М.Г., Воропаева О.В. Структура боковых корней лука и чеснока и количественная оценка ризосферных бактерий азотного цикла в условиях дефицита азота Растения в изменяющемся климате: адаптация, устойчивость и продукционный процесс : тезисы докладов Всероссийской научной конференции с международным участием в рамках годичного собрания Общества физиологов растений России (г. Якутск, 24 июня — 1 июля 2025 г.) / Общество физиологов растений России, ФИЦ «Якутский науч. центр СО РАН», Ин-т физиологии растений РАН им. К. А. Тимирязева, Ин-т биол. проблем криолитозоны СО РАН ; под ред. Т. Х. Максимова, В. В. Нохсорова. — Казань : Бук, 2025. — 250 с. — Текст : электронный., С. 204 (год публикации - 2025)
5.
Бетехтина А.А., Малева М.Г., Малахеева А.В., Воропаева О.В., Ермошин А.А., Борисова Г.Г.
Влияние дефицита азота на морфофизиологические параметры Helianthus annuus и пул N-трансформирующих бактерий в его ризосфере
Журнал "СУБТРОПИЧЕСКОЕ И ДЕКОРАТИВНОЕ САДОВОДСТВО" , 2025, № 95, С. 255-271 (год публикации - 2025)
10.31360/2225-3068-2025-95-255-271
6. Бетехтина А.А., Малева М.Г., Тугбаева А.С., Малахеева А.В., Соколов Н.А., Игнатова А.С. Influence of nitrogen deficiency on rhizobacterial diversity and tomato fine root structure: A varietal comparison Актуальные вопросы биотехнологии: Материалы докладов Международной научной конференции (14–17 октября 2025 г., Уральский федеральный университет, Екатеринбург, Россия). – Екатеринбург : Издательство ИП Шестакова Е. В., 2025. – 232 с. – Режим доступа : https://biotech.urfu.ru/, С. 33 (год публикации - 2025)
Возможность практического использования результатов
Результаты выполнения проекта позволят создать теоретические основы для разработки технологии выращивания важнейших видов культурных растений в неблагоприятных почвенных условиях при минимальном внесении химических удобрений. На основе полученных результатов можно будет разработать технологию получения «зеленых удобрений» из небобовых растений для обогащения почвы биологическим азотом.