КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

---

Номер проекта 25-75-32004

НазваниеРазработка инновационной платформы CAR-γδT/iNKT клеточной терапии для лечения аутоиммунных заболеваний

Руководитель Фань Хуэй, PhD (признаваемый в РФ)

Организация финансирования, регион федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации , г Москва

Конкурс №114 - Конкурс 2025 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований под руководством зарубежных ведущих ученых» (имеющие прикладной характер фундаментальные научные исследования и поисковые научные исследования)

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины; 05-401 - Молекулярная и клеточная медицина

Ключевые слова CAR-клетки, гамма-дельта-T клетки, iNKT-клетки, аутоиммунные заболевания, генная терапия, персонализированная медицина, иммунорегуляция, иммунология, клеточная инженерия, трансдукция, векторные системы, аллогенная терапия, биотехнологии, молекулярная медицина

Код ГРНТИ76.03.55

---

 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

---

Аннотация
Аутоиммунные заболевания представляют значительную социальную и медицинскую проблему, затрагивая до 10% населения. Хроническое течение, мультиорганные поражения (почки, эндокринная система, ЦНС) и высокая частота инвалидизации (25–30% пациентов) определяют колоссальную нагрузку на систему здравоохранения. К числу наиболее тяжелых и резистентных к терапии состояний относятся системная красная волчанка, болезнь Грейвса, аутоиммунный полигландулярный синдром (АПС), аутоиммунный гипопаратиреоз, первичная надпочечниковая недостаточность и аутоиммунный сахарный диабет (СД1). Эти патологии сопряжены с высоким риском осложнений, снижением трудоспособности и качества жизни. Текущие терапевтические подходы (глюкокортикоиды, цитостатики, моноклональные антитела, заместительная терапия) имеют ограниченную эффективность, сопровождаются системной иммуносупрессией, риском инфекций и развитием вторичных злокачественных новообразований. В этой связи разработка таргетных методов, селективно подавляющих аутореактивные иммунные клетки без системного угнетения иммунитета, признана приоритетом современной трансляционной медицины. Проект направлен на решение приоритетной научно-технологической задачи - создание отечественной платформы CAR-клеточной терапии нового поколения, основанной на генетически модифицированных γδT и iNKT клетках, обладающих свойствами МНС-независимого антигенного распознавания, сниженной аллогенностью, минимизирующей риск реакции «трансплантат против хозяина» и высокой функциональной пластичностью. В рамках проекта будут исследованы два варианта клеточного продукта: CAR-γδT и CAR-iNKT клетки. На доклиническом этапе будет выбран и экспериментально протестирован один из прототипов, обладающий наилучшим сочетанием специфичности, безопасности и технологической реализуемости. Таким образом, будет создан один из двух прототипов клеточного продукта (CAR-γδT или CAR-iNKT), прошедший полный цикл доклинической разработки (до УГТ 6), включая молекулярное проектирование CAR-конструкции, выбор мишеней, трансдукцию клеток, культивирование и доклинические in vivo испытания на моделях аутоиммунных заболеваний. Научная и технологическая новизна Основой технологического решения является использование нестандартных Т-клеточных субпопуляций – γδT и iNKT клеток. В отличие от классических αβT-клеток, эти популяции: - не зависят от МНС при активации, что исключает необходимость подбора по HLA и открывает путь к созданию универсального аллогенного продукта; - обладают врожденной способностью к антигеннезависимому иммуномониторингу, что обеспечивает более раннее и устойчивое иммунное вмешательство; - имеют более низкий риск индукции синдрома высвобождения цитокинов и нейротоксичности, благодаря модулирующему цитокиновому профилю и низкой экспрессии ко-стимулирующих рецепторов. Дополнительной инновацией является создание мультиспецифичных CAR-рецепторов, распознающих сразу несколько ключевых мишеней, связанных с аутоиммунным воспалением: - CD19, CD20 - на В-клетках, вовлеченных в генерацию аутоантител; - BCMA, CD38, CD138 - на зрелых плазматических клетках, устойчивых к стандартной терапии; - CD40L - на активированных CD4+ Т-клетках, усиливающих B-клеточную активацию и нарушающих толерантность. Мультиантигенный подход позволяет преодолеть гетерогенность патогенеза аутоиммунных заболеваний, добиться устойчивого контроля заболевания без глубокой иммуносупрессии, а также повысить вероятность достижения клинической ремиссии при минимизации побочных эффектов. Ожидаемые технологические решения: 1. Молекулярное конструирование CAR-рецепторов нового поколения, включая одновременное распознавание нескольких антигенов, оснащенных сигнальными доменами CD28/4-1BB/CD3ζ и опциональными регуляторными кассетами. 2. Оптимизация векторной доставки: проект предполагает разработку и сравнительную оценку вирусных (на базе лентивирусов) и невирусных (CRISPR/Cas9) систем, обеспечивающих уровень трансдукции >20% для γδT/iNKT клеток с доказанной стабильностью экспрессии и низким риском геномной интеграции. 3. Функциональная характеристика клеток in vitro: оценка фенотипа, экспрессии маркеров активации и истощения, пролиферации (Ki-67, CFSE (Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester)), секреторного профиля (ELISA/Luminex для IFNγ, TNFα, IL-10), специфической цитотоксичности (ко-культура с клетками-мишенями) и экспрессии CAR (проточная цитометрия, Western blot). 4. Разработка автоматизированного протокола производства, включающего роботизированные этапы выделения, модификации и культивирования клеток на платформах типа CliniMACS Prodigy/Wookong/Cocoon или эквивалентных, совместимых с GMP-подходом. Внедрение целевой технологии на основе цельной крови, минуя аферез, обеспечит логистическую и экономическую доступность. 5. Доклиническая валидация in vivo: исследование эффективности и безопасности клеточного продукта на валидационных моделях аутоиммунного тиреоидита, системной красной волчанки, АПС и др. Параметры: степень деплеции B-клеток (CD19⁺/CD20⁺), снижение титра аутоантител, персистенция CAR-клеток (qPCR, биолюминесценция), токсичность (синдром высвобождения цитокинов, реакция «трансплантат против хозяина», органные повреждения). 6. Разработка дорожной карты перехода от аутологичного к аллогенному применению: анализ иммуногенетической совместимости, стратегия селекции доноров, нормативно-правовая база и критерии масштабирования производства. Социально-экономический эффект и преодоление ограничений Проект отвечает приоритетным задачам по снижению зависимости от импортных клеточных продуктов, трансферу прорывных технологий в отечественную науку и формированию экспортно-ориентированной отрасли в сфере биофармацевтики. Ожидается, что в рамках проекта будет: - создано не менее одного прототипа клеточного продукта с УГТ 6; - разработан GMP-совместимый протокол производства; - получено не менее 4 патентов РФ/международных заявок; - подготовлено не менее 15 публикаций, включая публикации в Q1/Q2 журналах; - проработана модель серийного производства клеточного продукта и выхода на рынок (включая стратегию регистрации и софинансирования через государственные каналы здравоохранения). Разработка универсальной CAR-γδT/iNKT терапии позволит: - снизить стоимость лечения в 2-3 раза по сравнению с импортными CAR-T продуктами; - расширить доступность терапии для пациентов с редкими формами аутоиммунных заболеваний; - внедрить в клиническую практику персонализированные протоколы иммунотерапии, направленные на достижение долгосрочной ремиссии без системной иммуносупрессии; - сформировать задел для создания единой технологической платформы клеточной терапии, пригодной также для лечения онкологических и инфекционных заболеваний. Таким образом, проект сочетает в себе прорывные решения в области молекулярной медицины, трансляционной иммунологии и биофармацевтического инжиниринга и закладывает фундамент для создания нового поколения отечественных клеточных препаратов, не имеющих прямых мировых аналогов в контексте аутоиммунной патологии. Проект не предусматривает клонирование человека, генетическую модификацию человека, создание или генетическую модификацию эмбрионов человека для исследовательских целей, а также манипуляции со стволовыми клетками эмбрионального происхождения. Все планируемые доклинические исследования, включающие использование животных моделей, будут осуществляться только при наличии положительного заключения комиссии по биоэтике в соответствии с действующими российскими и международными нормами.

Ожидаемые результаты
В рамках реализации проекта планируется создание платформы CAR-γδT/iNKT-клеточной терапии, не имеющей прямых аналогов среди существующих методов, ориентированной на лечение резистентных аутоиммунных заболеваний. Будет разработан инновационный клеточный продукт на основе генетически модифицированных эффекторных клеток (γδT и iNKT), обладающих селективной активностью в отношении ключевых патогенных субпопуляций иммунной системы: CD19⁺/CD20⁺ B-клеток, BCMA⁺/CD38⁺/CD138⁺ плазматических клеток и CD40L⁺ активированных T-лимфоцитов. Ключевым технологическим решением станет реализация мультимишенной специфичности CAR-клеток по принципу TanCAR (Tandem CAR), при котором в одной CAR-конструкции объединяются два и более scFv-домена. Такой подход позволяет нацеливаться одновременно на несколько иммунных мишеней, значительно повышая эффективность подавления аутоиммунного процесса и снижая риск антигенного ускользания. Подход TanCAR активно разрабатывается в международной практике и демонстрирует обнадеживающие результаты в клинических испытаниях при онкогематологических заболеваниях (Grada et al., 2013; Zah et al., 2016; Brudno et al., 2020). Созданная платформа будет включать: - CAR-конструкцию нового поколения, способную одновременно распознавать ключевые мишени: CD19⁺/CD20⁺ B-клетки, BCMA⁺/CD38⁺/CD138⁺ плазматические клетки и CD40L⁺ активированные T-клетки. В ходе реализации проекта будут выбраны наиболее эффективные комбинации мишеней; - эффективную систему доставки, обеспечивающую стабильную экспрессию CAR с трансдукцией >20% γδT/iNKT-клеток и >50% αβT-клеток; - протокол культивирования с сохранением высокой пролиферативной способности (Ki-67+, CFSE-тест), низким уровнем истощения и длительной персистенцией in vivo (>28 дней); - in vivo подтверждение безопасности и персистенции клеточной терапии на иммунодефицитных моделях (NSG-мыши), включая оценку выживаемости CAR-модифицированных γδT- и iNKT-клеток, анализ цитокинового профиля (IL-6, IFNγ, IL-10), гистологическую оценку органов и молекулярный мониторинг экспрессии CAR-рецептора. Будет разработан стандартизированный и масштабируемый протокол подготовки CAR-клеток, соответствующий требованиям биобезопасности и воспроизводимости, с перспективой адаптации к условиям GMP при промышленном внедрении. Одним из ключевых направлений станет оценка профиля безопасности клеточного продукта, включая риск развития синдрома высвобождения цитокинов, реакции «трансплантат против хозяина», побочных эффектов, связанных с неспецифическим воздействием CAR-клеток на нецелевые ткани («off-target» эффекты). Снижение указанных рисков будет достигаться за счет использования γδT и iNKT клеток, обладающих врожденной способностью к ограниченной системной активации и независимых от МНС-представления антигена, что важно для минимизации риска гипериммунной активности, особенно в контексте аллогенного применения. Проект предусматривает разработку экономически эффективного, автоматизированного процесса получения клеточной продукции с потенциальным переходом к аллогенной терапии. Использование эффекторных клеток, не зависящих от МНС, позволит формировать универсальные банки донорских CAR-клеток и отказаться от индивидуализированной подготовки клеточного продукта. Это обеспечит снижение затрат, сокращение времени производства и расширение доступности терапии. Экономическая значимость Реализация проекта позволит: - создать отечественную клеточную терапию, независимую от зарубежных CAR-T решений и векторных систем; - снизить стоимость производства более чем на 30–40% за счет отказа от афереза, автоматизации и использования цельной крови; - сократить расходы здравоохранения за счет уменьшения частоты госпитализаций, отказа от пожизненной иммуносупрессии и повышения качества жизни пациентов; - повысить экспортный потенциал отечественной биомедицины, включая формирование высокотехнологичных производств и локализацию GMP-платформ. Социальная значимость Проект направлен на решение острой социальной задачи – обеспечение доступа пациентов с тяжелыми аутоиммунными заболеваниями к передовым методам лечения. Успешная реализация позволит: - добиться долговременной ремиссии без системной иммуносупрессии; - снизить уровень инвалидизации; - повысить трудовую и социальную активность пациентов; - уменьшить потребность в пожизненной дорогостоящей заместительной терапии (инсулинотерапия, заместительная гормональная терапия). Таким образом, по завершении проекта будет создана экспериментально подтвержденная, клинически релевантная платформа CAR-γδT/iNKT клеточной терапии, сопровождаемая готовым производственным протоколом и дорожной картой к коммерциализации. Полученные результаты будут соответствовать УГТ 6, что обеспечит высокую степень готовности к переходу в фазу клинических исследований и последующего серийного производства. Платформа станет основой для развития высокотехнологичной отечественной индустрии клеточной терапии с международной конкурентоспособностью.

---

 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

---