Аннотация результатов, полученных в 2018 году
На первом этапе проекта выяснялась причина появления в крови атеросклеротических больных десиалированных липопротеидов низкой плотности (ЛНП). Была изучена возможность десиалирования ЛНП различными клетками. Установлено, что инкубация ЛНП с различными клетками и их гомогенатами не приводит к потере сиаловой кислоты (отсутствие десиалирования). С другой стороны, инкубация ЛНП с плазмой крови человека приводила к статистически значимому снижению уровня сиаловой кислоты. В результате инкубации ЛНП с плазмой крови снижалось также содержание всех основных классов липидов - фософолипидов, триглицеридов, холестерина и его эфиров. Окисляемость ЛНП за 24 часа инкубации не изменялась. Однако наблюдалось появление у липопротеидов атерогенных свойств, то есть способности вызывать накопление холестерина в культивируемых макрофагах человека. Для оценки чистоты полученного препарата сиалидазы использовали денатурирующий электрофорез в полиакриламидном геле. У различных препаратов, обладающих сиалидазной активностью, картина была различной. Встречались препараты, у которых выявлялись 2 белка с молекулярной массой 57 и 67 кДа, а также препараты, содержащие только один белок 57 кДа или 67 кДа. Можно предположить, что это разные ферменты или субединицы одного фермента. Ферментативная активность увеличивалась под воздействием ионов Са. Установлено, что значение 5,2 – это рН-оптимум фермента. Согласно полученным данным из всех типов липопротеидов именно ЛНП является наилучшим субстратом для фермента. Препараты фермента инкубировали с ЛНП. Все полученные препараты вызывали появление у липопротеидов атерогенных свойств, то есть способности вызывать накопление холестерина в культивируемых макрофагах. Полученные результаты были доложены на двух европейских мероприятии и на одном всемирном. Тезисы докладов опубликованы в двух журналах, относящихся к Q1. По доложенным результатам готовятся публикации. Кроме того, по теме проекта в журналах, индексируемых в базах данных Web of Science и/или Scopus, опубликовано 6 статей, из которых 4 опубликовано в журналах уровня Q1. По результатам проекта появились материалы в СМИ: http://xn--m1afn.xn--p1ai/ru/node/uchastvuyushchie-v-razvitii-ateroskleroza-fermenty-okazalis-polezny-v-borbe-s-nim https://indicator.ru/news/2018/11/14/borba-s-aterosklerozom/ https://www.gazeta.ru/science/news/2018/11/14/n_12286759.shtml http://www.nanonewsnet.ru/news/2018/uchastvuyushchie-v-razvitii-ateroskleroza-fermenty-okazalis-polezny-v-borbe-s-nim https://www.nkj.ru/news/34885/

Аннотация результатов, полученных в 2019 году
Изучена вариабельность нейраминидазной активности плазмы крови на репрезентативной выборке, состоящей из 350 человек - здоровых лиц и больных атеросклерозом. Выявлены два накладывающихся друг на друга распределения - с низкой и высокой сиалидазной активностью плазмы крови. Высокая сиалидазная активность плазмы крови ассоциирована с повышенным риском атеросклероза и ИБС как его основного клинического проявления; кроме того, полученные данные указывают на возможный новый механизм роли курения в атерогенезе, реализуемый через повышение сиалидазной активности плазмы крови, что увеличивает вероятность проатерогенной модификации ЛНП, независимо от клинических проявлений атеросклероза. Изучена связь нейраминидазной активности с традиционными факторами риска сердечно-сосудистых заболеваний и ее возрастно-половая вариация. Установлено, что существует сезонная индивидуальная вариабельность показателя, но при этом сиалидазная активность плазмы крови не ассоциирована ни с возрастом, ни с полом. Корреляции с отдельными факторами риска выявляются лишь при специфическом разделении участников исследования на подгруппы и в некоторых случаях могут иметь случайный характер. Изучена экспрессия эндогенных нейраминидаз NEU-1, NEU-2, NEU-3 и NEU-4 и экзогенных нейраминидаз вируса гриппа в крови человека и в образцах интимы аорты, различающихся по типу атеросклеротических поражений. Выявлено достоверное повышение экспрессии генов нейраминидаз NEU-2, NEU-3 и NEU-4 в атеросклеротических поражениях по сравнению с непораженными участками интимы аорты человека. Повышение активности эндогенной нейраминидазы в прогрессирующих атеросклеротических поражениях может способствовать атерогенной модификации ЛНП непосредственно внутри артериальной интимы, что усиливает дальнейшее прогрессирование атеросклероза. Установлено также, что у большинства человек клетки крови экспрессируют эндогенные нейраминидазы, что может объяснять сам факт наличия сиалидазной активности в плазме, в то время как величина такой активности регулируется другими механизмами, в том числе, возможностью выхода эндогенных нейраминидаз из клеток. Кроме того, сиалидазная активность плазмы более чем в половине случаев сопровождается присутствием экзогенных нейраминидаз вирусного происхождения.

Аннотация результатов, полученных в 2020 году
Проведено исследование влияния экзогенной сиалидазы на развитие атеросклероза у модельных животных (Apoe-/- дефицитные мыши на генетическом фоне линии C57BL / 6J) показало, что десиалирующая активность вводимого препарата способствует увеличению площади атеросклеротических изменений в сосудах испытуемых животных на 42.7%. Обе группы животных получали стандартную гиперхолестериновую диету в течение 12 недель. Всего было исследовано по 10 животных в каждой группе. Изменения площади поражений достоверно связаны с введением иммобилизованной сиалидазы. Однако гистологические исследования не обнаружили разницы в картине патологических изменений между группами. Что свидетельствует о необходимости продолжения поиска мишени и построенной на ее базе животной модели для изучения процессов развития атеросклероза. Следует также отметить, что в группах мышей дикого типа вне зависимости от диеты и введения препарата иммобилизованной сиалидазы, морфологические изменения в аорте отсутствовали. Получены результаты оценки роли экзогенных (вирусных) сиалидаз в формировании нейраминидазной активности после проведения клинического исследования осельтамивира фосфата (Тамифлю, Roche, США – лекарственное средство, официально разрешенное к применению в РФ). Работа выполнена в соответствии с принципами качественной клинической практики на 8 добровольцах, у которых по результатам предварительного скрининга была выявлена повышенная сиалидазная активность плазмы крови. Однако достоверных изменений сиалидазной активности плазмы при измерении сразу после перорального приема препарата, через 4 часа и через 6 часов не обнаружено В ходе работы по изучению нейраминидазной активности в течение 6-недельного клинического исследования с использованием селективного ингибитора нейраминидаз вирусов гриппа типа А и В осельтамивира фосфата (Тамифлю, Roche, США – лекарственное средство, официально разрешенное к применению в РФ). На 6 добровольцах достоверные изменения сиалидазной активности плазмы, измеренной сразу после приёма препарата, на 7, на 14 и на 42 день, обнаружены не были. Отсутствие эффекта данного ингибитора показало необходимость проведения дополнительного исследования. Для оценки влияния ингибиторов экзогенных нейраминидаз на активности нейраминидазы в сыворотке in vitro из ранее собранной коллекции были отобраны образцы, которые обладали высокой активностью нейраминидазы (сиалидазы). К данным образцам были добавлены осельтамивир, перамивир и занамивир в различных концентрациях. В результате ее было обнаружено достоверных различий (p<0,05) между опытными образцами сыворотки, к которым добавляли селективные ингибиторы, и контрольными, к котором был добавлен физиологический раствор. Полученные данные свидетельствуют о возможном отсутствии определяющей роли вирусных нейраминидаз в появлении модифицированных липопротеидов низкой плотности (десиалированных ЛНП). Что требует дополнительных исследований в поиске источника фермента ответственного за появление десиалированных ЛНП. Опубликовано 10 статей: 8 статей в журналах Web of Science/Scopus (7 из них в Q1), 2 статьи в журналах РИНЦ.